橘皮苷的提取及抑菌活性研究

摘要 以橘皮苷为实验材料，提取橘皮苷，其最佳提取工艺条件：料液比为1:15，浸提温度为75℃，浸提时间为3h，pH值为4。然后从橘皮苷的浓度、溶剂、热稳定性3方面来考察橘皮苷的抑菌功能。结果表明，这3个因素对菌种的抑菌效果有明显不同，但都有一定的抑菌作用，且基本不受温度变化的影响，可以作为良好的抑菌产品。

关键词 橘皮苷；抑菌；提取

中图分类号S5 文献标识码A 文章编号 1674-6708（2011）46-0104-02

Study on the Abstraction and Antibacterial Activity of the Glycoside in Orange Peel

SONG Fei

Northeast Agricultural University，Harbin 150025

Abstract This experiment used orange peel slag as experimental material to abstract glycoside. The optimum extraction technology is as follows: material-water ratio is l:15, extraction temperature was 75℃, extraction time is 3h, pH value is 4. The bacteriostatic function of glycoside in orange peel was studied considering three factors of concentration, solvent and thermostability. The results show that the bacteriostatic efficacy of the three factors is different, but all of them have certain bacteriostatic efficacy and are not affected by temperature. The glycoside in orange peel can be used as a good antibacterial product.

Keywords glycoside in orange peel；antibacterial；abstraction

柑橘是芸香科植物柑橘属的总称，包括橙子、柚子、金橘、蜜橘、广柑等。在我国主要分布于广东、湖南、浙江、福建等地，我国柑橘栽培面积居世界第一，产量居世界第二位，已超过美国，仅居巴西之后，2002年产量达1 199万t[1]。而我国柑橘加工产品80%是罐头[2]。柑橘在加工过程或新鲜使用时，都会产生约20%~50%的果皮渣[3]。随着柑橘深加工的不断深入，规模的不断扩大，柑橘果皮渣的污染情况日益严重，解决果渣问题越来越受到人们的重视。橘皮苷是黄酮类化合物，降低血压、抗过敏、降低低密度胆固醇、影响血压、改变体内酶活性、改善微循环、抗菌、抗肝炎、抗氧化、抗肿瘤、抗癌等生理功能，有很高的药用价值[4-6]。柑橘皮中含有较多的橘皮苷，本文以柑橘皮渣为原料，从柑橘皮中提取橘皮苷，然后对其抑菌活性进行研究，以无用橘皮转变为有用的物质，解决了柑橘皮渣带来的垃圾污染问题。

1 材料与方法

1.1试剂与仪器

柑橘：市售；甲醇、乙醇、氯化钙、亚硫酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙、牛肉膏：分析纯；W205B数控恒温水浴锅：上海申胜生物技术有限公司；万能粉碎机：中国天津泰斯特仪器有限公司；R-205旋转蒸发器：上海申胜生物技术有限公司；电子天平：上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂；循环真空泵：巩义市予华仪器有限责任公司。

1.2 方法

1.2.1 橘皮苷提取工艺流程

（称取）橘皮残渣粉碎碱溶水浴加热过滤调pH冷却抽滤洗涤干燥产品。

1.2.2 单因素试验

1） 固液比对橘皮苷得率的影响

称取5.0g橘皮粉，固定提取温度为70℃，提取时间为2h，pH值为4，考察不同固液比对橘皮苷得率的影响，结果如图1所示。

2） 温度对橘皮苷得率的影响

称取5.0g橘皮粉，固定固液比1：15，提取时间为2h，pH值为4，考察温度对橘皮苷得率的影响，结果如图2所示。

3） 时间对橘皮苷得率的影响

称取5.0g橘皮粉，固定固液比1：15，提取温度为75℃，pH值为4，考察时间对橘皮苷得率的影响，结果如图3所示。

4） pH值对多糖得率的影响

称取5.0g橘皮粉，固定固液比1：15，提取温度为75℃，提取时间为3h，考察pH值对橘皮苷得率的影响，结果如图4所示。

1.2.3 橘皮苷的抑菌试验方法

用橘皮苷配制成0.05%、0.1%、0.2%、0.4%、0.8%的甲醇溶液，将这些溶液和一份饱和乙醇溶液分别倒入培养皿中，将剪好的滤纸片置于不同的溶液中进行浸泡，晾干。把五种试验用的菌种用无菌生理盐水配制成105个/L左右的菌液，把大肠杆菌、枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌制成的菌液加入到牛肉膏蛋白胨培养基平板上，青霉、根霉菌液加入到马铃薯培养基平板上。取0.5mL菌液加入到平板上，立即用涂布棒迅速将菌液均匀涂开，涂好后，将浸渍过橘皮苷溶液的滤纸圆片风干，放到每个涂有菌液的平板上，每个培养皿中放4个纸片，平行做3个培养皿。细菌在37℃下培养，霉菌在28℃下培养，均培养48h，测定抑菌圈直径大小，确定抑菌效果[7]。

2 结果分析与讨论

2.1 不同因素对提取橘皮苷的影响

根据单因素对橘皮苷提取率的影响情况可知：沉淀时的pH值对橘皮苷的提取有一定的影响。当pH4时，则有杂质出现。所以控制pH值2~4为宜；当固液比为1:15时，提取率最高，之后增加固液比，提取率增高不明显，从经济角度考虑，选取1:15的固液比比较适宜；在浸取过程中，温度控制也有影响。因橘皮苷溶于热水常温时溶解度0.1g/mL，而75℃时溶解度为10g/mL。若再加高温度，溶解度增加不大，反而出现了杂质。影响了产物的纯度。所以，以75℃浸取较好。另外在橘皮苷的洗涤过程中，不宜用过高温度的水洗涤，否则产物损失很大。浸提时间在3h左右时，提取率较高，当小于3h或大于3h时，产率都较低，其原因可能是橘皮苷分子中的酚性轻基，在碱液作用下逐渐从橘皮中溶解出来，浸泡时间太短橘皮苷溶解不充分，时间过长，部分橘皮苷分解，体现了橘皮苷在水中的不稳定性。

2.2 浓度对橘皮苷抑菌效果的影响

橘皮苷浓度（%）

（注：+有一定的抑菌效果，+ +有较好的抑菌效果，+ + +有较强的抑菌效果，+ + + +有很强的抑菌效果，一无抑菌效果。）

从表1的实验结果分析可以看出，不同质量浓度的橘皮苷对5种菌种的生长均有抑制作用，但对不同菌种有不同的抑制程度，其中对枯草杆菌的抑制作用最强，对霉菌的抑制作用最弱。另外，同一浓度，对不同的菌种所抑制的程度不同，其中橘皮苷的质量浓度在0.2%~0.6%之间均有较好的抑菌效果。而质量浓度低于0.1%及高于0.6%，有抑菌作用但效果较差。