负荷运动对大鼠脊髓前角细胞的影响

【摘要】 目的 观察负荷运动后大鼠AChE阳性反应物的变化。方法 用酶组织化学和图象分析方法观察大鼠脊髓前角运动神经原内AChE细胞的变化。结果 负荷运动后大鼠脊髓前角运动神经原AChE细胞免疫反应增强(P

【关键词】 运动;乙酰胆碱脂酶;大鼠

Effect of athletics on ache in the anterior horn of rats

LI Ke,FENG Li, ZHANG Hui.Liaoning Health College of Vocational Technology.Shen Yang, 110101 China

【Abstract】 Objective To investigate the relationship between changes of AChE and athletics.Methods Thedependent model of male rats was athleticed.The alteration of AChE and ultrastructure of anterior horn neurous were studied by means of histochemistry and quantitative method of micro-image analysis system were observeddependence rats. Results The average grey value of AChE positive reactive product in experimental group was grower than that in control group (ph

【Key words】 athletics;AChE;rat

闰绍细胞(Renshaw cell)是脊髓前角内的一种神经元,它接受前角运动神经元轴突侧支的支配,它的活动转而反馈抑制前角运动神经元的活动。目前知道,前角运动神经元支配骨骼肌的接头处递质为乙酰胆碱,则其轴突侧支与闰绍细胞发生突触联系,也必定释放乙酰胆碱作为递质。我们观察运动负荷后大鼠脊髓前角内神经AChE阳性反映物改变,现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料 雄性Wistar大鼠 中国医科大学动物室提供,碘化乙酰硫胆碱(购于Sigma公司); LUZEX-F显微图像分析仪(日本,松下公司)

1.2 实验动物分组 本实验选用雄性健康Wistar大鼠40只,体重260～300 g,随机分成二组。正常对照组:20只。实验组:20只。

1.3 实验方法

1.3.1 负荷运动大鼠模型制备:每天进行2次游泳运动负荷,每次45 min,共60天。

1.3.2 组化标本制备 对实验动物用1%戊巴比妥钠(40 ml/Kg)腹腔麻醉后开胸,经左心室70滴/min滴入1%肝素钠的生理盐水500 ml,同时剪开右心耳。继用0.1M磷酸盐缓冲液(PBS,PH=7.4)配制的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定。取出实验动物的脊髓组织,放入含4%多聚甲醛PBS的固定液中进行后固定大约2小时,之后将实验动物的脊髓组织切成薄片移入含20%蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放,至组织薄片沉底,经水包埋,恒冷箱连续横切片,片厚20μm。经OCT包埋,恒冷箱连续切片,片厚16 m,-70℃保存备用。

1.3.3 尼氏染色 冰冻切片吹干,经PBS漂洗5 min×3次,将切片置入1%甲苯胺蓝溶液中37℃孵育90 min,取出后用蒸馏水冲洗,PBS漂洗5 min×3次,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,光镜下观察。

1.3.4 乙酰胆碱脂酶组织化学方法 染色方法:A.作用液的构成:0.82%的醋酸钠;0.6%的醋酸;2.94%柠檬酸钠;0.75%硫酸铜0.137%异-OMPA;0.165%铁氰化钾;双蒸馏水;碘化乙酰硫胆碱。B.切片在作用液中放置于37℃温箱内30~120 min。C.切片着色后蒸馏水冲洗。D.梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,光镜下观察。

1.4 显微图像定量分析

用Luzex-F显微图像分析仪测定脊髓前角单位面积AChE阳性反应物平均灰度值和阳性反应物密度,所得数据经计算机SAS软件系统进行统计学处理,用x±sd表示。

2 结果

2.1 尼氏染色结果 正常对照组大鼠脊髓前角细胞的尼氏染色切片上,神经元数量较多,排列紧密,形态完整,泡浆有内尼氏体。实验组脊髓前角细胞,正常神经元数量明显增多,细胞丰满,泡浆内尼氏体丰富。根据尼氏染色说明负荷运动大鼠模型制备成功。

负荷运动大鼠脊髓前角单位面积AChE阳性物反应物密度之间比较

2.2 酶组织化学结果 正常对照组可见AChE阳性反应物分布于大鼠海马各区,阳性反应物呈棕褐色,分布于胞质及突起,胞核不着色,细胞形态完整但细胞数量少,纤微丰富。与正常对照组比较,实验对照组AChE阳性反应物大量增多(P

3 讨论

神经末梢释放乙酰胆碱递质的神经,称胆碱能神经,目前,还没有直接显示乙酰胆碱的组织化学方法。一般利用水解乙酰胆碱的酶-乙酰胆碱酯酶来显示胆碱能神经细胞的组织化学特性,并认为乙酰胆碱的分布大致上与乙酰胆碱酯酶的分布一致。乙酰胆碱脂酶不仅存在于中枢神经系统而且也存在于周围神经系统中。所以,早在60年代就开始应用乙酰胆碱酯酶进行酶组织化学检测[1]。本实验的结果表明经过负荷训练的大鼠的脊髓前角运动神经元内AChE阳性反应物大量增多,提示,运动锻炼对大鼠的脊髓前角运动神经元内AChE阳性反有一定的影响、根据这一结果,我们推测,经训练负荷运动后躯体运动的协调性显著增强,除了与肌肉的张力有关外,与神经递质功能

增强有一定关系[2]。

参 考 文 献

[1] Karnovsky MJ,Roots L.A "direct-coloring"thiocholine method for cholinesterase.J Histochem.Cytochem,1962,12:219-221.

[2] Andersen P.Pathwag of postsgnaptic inhibition in the hipp ocanpus. JNeurophgsiol,1964,27: 608 1997-06-10.