一丁基锡和二丁基锡致小鼠骨髓细胞DNA损伤

作者：付保荣　曹向宇　惠秀娟　马溪平　李法云　谢明 【摘要】 目的 研究不同剂量的一丁基锡、二丁基锡对体外培养的小鼠骨髓细胞DNA损伤作用。方法 应用彗星试验检测不同浓度一丁基锡、二丁基锡对小鼠骨髓细胞DNA损伤。结果 结果1×10-10，1×10-11?g/L剂量的一丁基锡、二丁基锡与对照组比较，差异有统计学意义(P<0?05，P<0?01)。随着剂量的增加，DNA损伤也越严重，存在着明显的剂量-效应关系。组间比较，差异有统计学意义 。结论　体外条件下，一丁基锡、二丁基锡可引起小鼠骨髓细胞DNA的损伤。

【关键词】 一丁基锡；二丁基锡；骨髓细胞；DNA损伤；彗星试验

丁基锡化合物广泛地用于工业、农业、各种杀虫剂、除草剂、纺织品防霉以及海洋船只防污(antifouling)涂料中。其中，三丁基锡化合物被认为是迄今为止由人为因素大量进入海水环境的最毒的化学品之一〔1〕。环境中极低含量的有机锡(ng/L)就可对水生物产生毒性影响，并可通过食物链进入人体，危害人类健康，因而受到研究者的关注〔2〕。以往研究者只是通过宏观的动物实验研究毒性较强的三丁基锡的毒性，却忽视了体内降解后一丁基锡和二丁基锡的毒性〔3〕，并且对有机锡的研究局限于较高剂量〔4〕。本试验主要通过灵敏度高的彗星试验探讨一丁基锡和二丁基锡在小于ng/L剂量下对小鼠骨髓细胞可能产生的影响情况，为进一步在分子水平上研究丁基锡化合物对生物的影响提供理论依据，以便对有机锡化合物的生物效应评价提供参考资料。

1 材料与方法

1?1 主要试剂

一丁基锡、二丁基锡(美国Acros公司)。甲基磺酸甲酯(MMS)，二甲基亚砜(DMSO)，TritonX?100，溴化乙锭(EB，美国Sigma公司)。

1?2 试验动物

ICR小鼠(中国科学院上海实验动物中心)，体重25?g左右，常规喂养，观察1周后，健康小鼠供试验用。

1?3 方法

1?3?1 取材

小鼠颈脱臼处死后，取出小鼠股骨，用骨剪剪断两端膨大处，用注射器吸取少许D?Hanks液从股骨一端注入，将骨髓冲洗入玻璃离心管中，直至股骨发白，离心后用D?Hanks液调整细胞浓度为106～107个/ml，4℃冷却待用。

1?3?2 染毒

将制得的细胞分装于9个5?ml刻度玻璃离心管中，用RPMI1640培养液将体积加至2?5?ml，然后于每管中加入受试物、阳性药甲基磺酸甲酯(MMS)，使一丁基锡、二丁基锡的最终浓度在骨髓细胞中为1×10-10，1×10-11，1×10-12?g/L，另设单蒸水作为空白对照，DMSO为阴性对照，混匀后置于37℃恒温水浴中染毒1?5?h，染毒期间，不定时轻摇离心管混匀细胞。染毒结束后，1?000r/min离心5min，去清液，以100?μl冰冷的D?Hanks液重悬细胞，台盼兰染色测定细胞存活率。

1?3?3 彗星试验

依照 Hartmann 按本实验室常规方法进行〔5〕，并有改进〔6〕。荧光显微镜下，用515～560?nm的激发光观察，在200×下每处理组计数50个彗星图像，用CASP(Comet Assay Software Project)图像分析软件测定尾长、尾部DNA含量。

1?4 统计分析

应用SPSS11?5软件进行统计分析。

2 结 果

一丁基锡二丁基锡对小鼠骨髓细胞DNA损伤情况见表1。从表1看出：1×10-10，1×10-11g/L剂量的一丁基锡、二丁基锡均可此起骨髓细胞的损伤，与对照组比较差异有统计学意义。1×10-12g/L剂量的一丁基锡、二丁基锡不能引起骨髓细胞的损伤，与对照组比较差异无统计学意义。随着剂量的增加，DNA损伤也起严重，存在着明显的剂量?效应关系。组间比较，差异有统计学意义。表1 一丁基锡、二丁基锡对小鼠骨髓细胞DNA损伤(略)注：各组与DMSO比较，a P<0?05，b P<0?01(1μm=7?31px)

3 讨 论

在本实验条件下，随着一丁基锡、二丁基锡剂量的增加，DNA迁移量增多，迁移的距离增大，呈现了良好的剂量?效应关系。说明一丁基锡、二丁基锡在一定浓度范围内可引起受试细胞产生遗传毒性，导致小鼠骨髓细胞DNA损伤有可能是通过引起DNA断裂实现的，但其确切机制有待进一步研究。实验结果表明，二丁基锡比一丁基锡对小鼠骨髓细胞DNA损伤作用更大，即二丁基锡比一丁基锡对小鼠骨髓细胞的毒性更大。在同样实验条件下检测三丁基锡对小鼠骨髓细胞DNA损伤作用〔3〕，通过数据比较，在同样的受试物浓度即1×10-10，1×10-11，1×10-12g/L下，丁基锡化合物对小鼠骨髓细胞的毒性依为三丁基锡>二丁基锡>一丁基锡，与陈天乙等人的研究结果一致〔7〕。

【参考文献】

〔1〕江桂斌.国内外有机锡污染研究现状［J］.卫生研究，2001，30(1)：1-3.

〔2〕Takahashia S,Mukai H,Tanabe,S,et al.Butyltin residues in livers of humans and wild terrestrial mammals and in plastic products［J］.Environ Pollut,1999,106:213-218.

〔3〕惠秀娟，曹向宇，张朝红，等.三丁基锡和三苯基锡对小鼠骨髓细胞DNA损伤［J］.中国公共卫生，2005，21(9)：71-72.

〔4〕Nicotera,Fandmpierluigui.Tributyltin stimulates in rats thymocytes［J］.Biochem Biophy,1999,283(1):46-45.

〔5〕Hartmann A,Agurll E,Beevers C,et al.Recommendations for conducting the in vivo alkalin comet assay［J］.Mutagenesis,2003,18(1):45-51.

〔6〕曹向宇，惠秀娟，马汐平，等.激素类除草剂二氯喹啉酸遗传毒性比较［J］.中国公共卫生，2006，22(3)：333-334.

〔7〕陈天乙，谭元生，田明.有机锡化合物对两栖动物的急性毒性研究［J］.环境科学，1994，15(5)：63-64.