继代培养期不同培养基对铁皮石斛茎芽生长的影响

摘要 继代培养期不同培养基对铁皮石斛茎芽的生长试验结果表明，选用继代培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA的铁皮石斛长势最好。幼苗叶片绿色、较大且舒展，生根率达到100%。

关键词 铁皮石斛；继代培养；培养基；茎芽生长

中图分类号 S567.239 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）05-0124-01

根据传统医学记载，石斛主要有滋阴清热、生津止渴等功效[1]，铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为多年生附生草本，具有生津益胃、滋阴清热、止咳润肺、抗菌消炎等功效，是传统名贵中药之一[2-4]。但是近年来由于人们长期采挖，加上栖息地范围狭窄，野外生长周期长，使得铁皮石斛资源日趋枯竭。为此，笔者探讨了继代培养期不同培养基对铁皮石斛茎芽生长的影响，以提高铁皮石斛组织培养移栽成活率。

1 材料与方法

1.1 试验材料

铁皮石斛种子播于无菌玻璃瓶后，通过组织培养诱导产生原球茎。在超净工作台上取出瓶内幼苗，切除根系，取2/3以上茎芽作为试验材料。在基本培养基中加入白糖3.5%，琼脂粉0.85%，pH值为5.8～6.0，附加6-BA（6-苄基氨基嘌呤）、NAA（萘乙酸）的培养基。

1.2 试验设计

试验共设4个处理，分别为：MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA（A），N6+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA（B），1/2MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA（C），以MS为对照（CK），不添加任何激素。每个处理50瓶，重复3次以上。

1.3 试验方法

培养基置于培养室进行光照培养，每天光照12 h，光照强度1 800～2 000 lx，温度（25±2） ℃，培养2个月后观察记录铁皮石斛茎芽增殖结果及生长情况。将无菌瓶苗生长正常的茎芽切下，转入继代增殖培养基，每次培养60 d，重复3次，共培养180 d，观察茎芽增殖生长状况[5-6]。

2 结果与分析

2.1 增殖分析

从表1可以看出，采用MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培养基，导致茎芽生长活力中等，表现为下部叶片轻度黄化，生长迟缓；采用N6+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培养基，茎芽生长活差，表现为下部叶片严重黄化，生长迟缓；采用1/2MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培养基，茎芽增殖倍数达到6.5倍，平均芽长达到3.5 cm，叶片生长基本正常，芽健壮。因此，选择1/2MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培养基进行继代培养，达到组培工厂化育苗水平，更有可能培养合格商品苗。

2.2 方差分析

衡量铁皮石斛茎芽的增殖倍数，不仅可以用株数计算，还可以使用重量计算。由于球茎聚集成团，采用称重的方法来判断茎芽的增殖情况更加合理。从表2可以看出，不同的培养基配比对茎芽的增殖倍数达到1%的极显著差异。与CK相比，1/2MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培养基茎芽增殖较快，颜色鲜绿，体积较大，芽高生长较大；与其他处理的差异达到1%的极显著水平，这与前人研究结果一致；1/2MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培养基配比使用后绝大多数成苗，具有2片展开的小叶，叶色浓绿，少数保持原球茎状态，此结果与株数统计的一致。

3 结论与讨论

铁皮石斛原球茎外形呈小圆锥状，其顶部有淡绿色鳞片状叶原基突起，尚未分化成真叶。每一个大的原球茎包含多个小原球茎。培养原球茎的目的是继代繁殖、保存种子、扩大繁殖倍数[7-8]。

本试验采用野生铁皮石斛种子作为外植体，通过原球茎诱导、增殖培养，再诱导成苗的技术方法。组培苗的繁殖系数能达到10倍以上，有力地促进铁皮石斛组培产业的发展。但是，通过试验发现增殖10代后，原球茎胚性消失，只增殖不分化。因此，在生产中应及时观察并且复壮或淘汰。

另外，总酚含量、PPO活性、组培褐变率三者有一定的关联程度。活性炭通过吸附酚类物质使多酚氧化酶（PPO）失（下转第127页）

（上接第124页）

去活性来抑制褐变。而且，它能够吸附在高压灭菌时产生的有害物质。在本试验中，加入0.5 g/L的活性炭对原球茎的增殖及长势较为有利。

4 参考文献

[1] 包雪声，顺天生，陈立钻，等.中国药用石斛[M].上海：上海医科大学出版社，2001：63-64.

[2] 陈瑞蕊，林先贵，施亚琴.药用石斛及其组培技术研究概要[J].江苏农业科学，2002（5）：65-66.

[3] 张明，夏鸿西，朱利泉，等.石斛组织培养研究进展[J].中国中药杂志，2000，25（6）：323-326.

[4] 唐桂香，黄福灯，周伟军.铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究[J].中国中药杂志，2005，30（20）：1583-1586.

[5] 朱艳，秦民坚.铁皮石斛茎段诱导丛生芽的研究[J].中国野生植物资源，2003，22（2）：56-57.

[6] 蒋波.铁皮石斛原球茎生长分化及生根壮苗研究[J].玉林师范学院学报：自然科学版，2005，26（3）：66-69.

[7] 陈云龙，何国庆，华允芬，等.细茎石斛多糖的提取分离纯化和性能分析[J].中国药学杂志，2003，38（7）：494-497.

[8] 郁美娟，孟庆华，黄德音，等.石斛属植物有效成分及药理作用研究[J].中药，2003，25（11）：918-921.