HPLC法测定治偏痛颗粒中芍药苷的含量

【摘要】 目的 控制治偏痛颗粒的质量。方法 建立高效液相色谱法测定治偏痛颗粒中芍药苷的含量。色谱柱为岛津Shimpack CLC-ODS色谱柱(6．0 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0．05 mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇（67∶173∶4∶4），检测波长230 nm，流速为1．0ml/min，柱温35℃。结果 芍药苷进样量在0．2～2．0μg范围内线性良好，（r=0．999 9），理论板数6 000，方法平均回收率为100．8%。结论 本法操作简单，结果可靠，可作为治偏痛颗粒的常规检验方法。

【关键词】 治偏痛颗粒;芍药苷;含量测定;高效液相色谱法

【Abstract】 Objective Studies on quality control of Zhipiantong granules.Methods The content of paeoniflorin was determined by RP-HPLC. Shimpack CLC-ODS column (6．0 mm×150 mm，5 μm)was used with a mobile phase of methanol-0．05 mol/L KH2PO4 solution-Acetic Acid-Isopropanol （67:173:4:4）and detected at 230 nm.The flow rate was 1．0ml/min．Results The Range of linearity is 0．2～2．0 μg paeoniflorin (r=0．999 9).The theoretical plate number is 6 000．The average recovery is 100．8%.Conclusion The established method is simple ,reliable and suitable for the usual quality control method of Zhipiantong granules.

【Key words】 Paeoniflorin；Assay；Zhipiantong granules；RP-HPLC

治偏痛颗粒由川芎、柴胡、白芷、香附、白芍、郁李仁、白芥子、甘草等8味中药材组成的纯中药制剂，具有行气、活血、止痛等功效，临床主要用于血管性头痛和偏头痛。本品已收载于卫生部药品标准中药成分制剂第20册，其质量标准只有一项理化鉴别，不能很好地控制本品的内在质量，因此，本文拟定了测定芍药苷含量作为检测指标。采用高效液相色谱法，建立了专属性好、灵敏度高，并且简便易行的测定方法。

1 仪器与试药

Waters 2690 高效液相色谱仪，996PDA，Millennium 32 色谱工作站。治偏痛颗粒（四川旭华制药有限责任公司：批号：050801，050802，050803；规格：每袋装20 g），芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 色谱条件与系统适用性试验

2．1 色谱条件 色谱柱：岛津Shimpack CLC-ODS色谱柱(6．0 mm×150 mm，5μm)，流动相：甲醇-0．05 mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇（67∶173∶4∶4），检测波长230 nm，流速：1．0 ml/min，柱温：35℃。

2．2 系统适用性试验 在此条件下，按芍药苷计算，理论板数为6 000。芍药苷峰与其前后相邻峰的分离度均>1．5。治偏痛颗粒阴性对照、芍药苷对照品及样品色谱图 如图1。

3 溶液的配制

3．1 供试品溶液 取本品2 g, 精密称定,精密加入甲醇20 ml，称定重量，超声处理30 min（功率250 W，频率50 kHz），取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液作供试品溶液。

3．2 对照品溶液 取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含0．1 mg的溶液，作对照品溶液。

4 线性范围

精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成浓度为0．1 mg/L的对照品溶液，取对照品溶液2、6、10、16、20 μl进样测定，以所得芍药苷的峰面积（A）对进样量（C）进行线性回归，回归方程为：A=1．401 4×106C．5827×104；r=0．9999，结果表明，芍药苷进样量在0．2～2．0 μg范围内，峰面积与进样量线性关系良好。

5 精密度、重现性及稳定性试验

取同一供试品溶液（每1 ml含0．1 mg的芍药苷），重复进样5次，测定峰面积，计算RSD为0．52%；取同一批样品，按含量测定方法重复测定，计算RSD为0．96%。表明样品的精密度及重现性均较好。另取供试品溶液，自溶液配制后分别在0、2、4、6、8 h测定峰面积，RSD为0．27%，表明该溶液在8 h内基本稳定；取对照品溶液，自溶液配制后分别在0、5、10、14、19、25 h测定峰面积，RSD为1．40%，表明对照品溶液溶液在25 h内基本稳定。

6 回收率试验

精密称取已知含量的供试品9份，分别加入低、中、高（398．4、498．0、597．6 μg）不同量的芍药苷对照品，按照样品测定法进行测定，计算回收率，结果低、中、高3种浓度的平均回收率分别为102．0%、102．3%、98．0%(3例)；平均回收率为100．8%, RSD为2．5%。

7 样品含量测定

按本文色谱条件，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，依法测定3批样品的含量(2例）分别为0．66、0．85、0．85 mg/g。

8 讨论

8．1 本试验曾以川芎中的阿魏酸作指标成分，以甲醇1％冰醋酸乙腈（7∶80∶13）为流动相，检测波长：322 nm；此条件下阿魏酸与其他组分分离良好，但阴性(缺川芎)样品干扰较重。具文献报道，处方中的甘草含有阿魏酸，因此采用白芍中的芍药苷作含量测定指标成分。

8．2 本试验考察了浸渍，超声处理与回流提取3种方法，依法测定三者的含量分别为0．72、0．72、0．71 mg/g，认为三者提取结果基本相当，因此选用操作比较简单的超声处理作为提取方法。

8．3 本试验考察了甲醇1％冰醋酸水溶液，乙腈1％冰醋酸水溶液，甲醇乙腈1％冰醋酸水溶液，及甲醇-0．05 mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇4种色谱系统，结果后者分离效果最好，并考察了流动相比例，以甲醇-0．05 mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇（67∶173∶4∶4）最为理想。

8．4 本文用二极管阵列检测器，在200～400 nm范围内进行光谱扫描，提取芍药苷色谱峰光谱图，在230 nm处有最大吸收，选择230 nm作检测波长，以提高检测灵敏度，并对色谱峰的纯度进行检测，提高了分析方法的准确性和可靠性。

参考文献

1 Specification of traditional patent medicines promulgated by ministry of public health ,P R China(中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂).1998，20(20)：173.

2 Chp（中国药典）.2005，1：68.

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