HE染色方法的改良

[摘要] 目的：提高HE染色分辨率、延长切片着色的保持时间和使用时间。方法：切片入苏木精染液前入柠檬酸溶液；上行酒精脱水直接从95％酒精开始；苏木精染液的配制中用硫酸铝替代硫酸铝钾。结果：改良的染色法较传统HE染色法的染色时间缩短8-10分钟，改良苏木精染液存放时间长，其使用率也提高，染色力保持时间长。结论：提高HE染色分辨率、延长切片着色的保持时间，同时提高了苏木精染液的使用率，提高了工作人员的工作效率。

[关键词] HE染色；柠檬酸；硫酸铝

HE染色是组织胚胎学中最常用的一种染色方法，在组织学的实验课中，经HE染色的切片是学生观察最多的一类切片，其中细胞核染色是HE染色中最关键的一步，但用传统的Harris苏木精染液染色有下列弊端，如染色时间长，染液易产生沉淀等，针对以上弊端对染液的配制和染色方法做了一些改良。

1材料与方法

1.1材料

苏木精2g无水乙醇40ml硫酸铝20g蒸馏水500ml氧化汞1g柠檬酸1g

1.2改良苏木精染液的配制方法

A液：在100ml锥形瓶中加入40ml无水乙醇，再加入2g苏木精，搅拌混合均匀。B液：1000ml锥形瓶中加入500ml蒸馏水，再加入20g硫酸铝，搅拌混合混匀。把A液与B液混合加热煮沸并去火，再迅速加入1g氧化汞，再煮沸，冷却后加入1g柠檬酸并搅拌。柠檬酸溶液：将1g柠檬酸溶解于500ml蒸馏水中。

1.3改良染色方法：

（1）石蜡切片经二甲苯脱蜡后梯度酒精下行入水。

（2）切片浸入柠檬酸液5-10秒。

（3）切片浸入改良苏木精染液染色4-7分钟。

（4）自来水冲洗3-5次。

（5）切片快速入盐酸酒精分化1秒。

（6）再次自来水冲洗2-3次，在自来水中返蓝10分钟（时间可以适当延长）。

（7）切片浸入伊红染色30秒。

（8）自来水冲洗3-5次。

（9）过95％酒精、100％酒精2次（时间各3秒），二甲苯透明，中性树胶封片。

2结果

（1）在苏木精染液之前过一下柠檬酸液缩短了在苏木精染液中的染色时间，时间缩短了6-8分钟。

（2）用硫酸铝替代硫酸铝钾配制的苏木精染液存放时间长，其使用率也提高，染色力保持时间长，不需过滤直接试用。

（3）上行酒精直接从95％酒精开始，为实验室节省了酒精原料，也使整个染色时间缩短1-2分钟，提高了染片效率。

3讨论

HE染色的关键是苏木精染色液，其在使用过程中易受PH值、温度等的影响。苏木精是碱性染料，但苏木精中的酸浓度过低或无酸时，细胞核容易被过度染色，染色液容易出现结晶和氧化膜[1]。室温越低染色时间越长，温度在15℃-18℃时染色需要10-15分钟。但柠檬酸液的使用，中和了切片上自来水的碱性，降低了切片组织表面的PH值，使其PH值与染液基本一致，保持了染液的稳定性，延长了染液的使用时间，使细胞核的着色效果更好，使切片在苏木精染液中的染色时间缩短了6-8分钟，提高了工作效率。

硫酸铝钾在染色中是媒染剂，在组织细胞中与染料苏木精之间架起桥梁[2]。但在实际的使用过程中，大量的硫酸铝钾从配制后的染液中析出形成结晶[3]，尤其是室温比较低时这种情况更明显，容易形成沉淀、结晶，需要过滤才能使用，而且染色过程中常在切片组织上形成沉淀影响正常组织结构的观察。用硫酸铝替代硫酸铝钾的染液存放过程中不会出现沉淀、结晶，不用过滤即可使用。而且改良苏木精染液存放时间长，染色力保持时间长。

切片染色后从95％酒精开始脱水，改变了传统的70％酒精开始的上行酒精梯度。经过多年的实践总结，不影响切片的染色质量，减少了酒精原料的浪费，简化了上行脱水过程。

改良后的染色法使组织结构分辨更清晰，整个染色时间缩短了8-10分钟，减少了酒精的使用量；通过多年的实践证实，改良苏木精染液对组织结构着色的保持时间较原来延长1-2年，提高了染液的使用率，而且不影响染色效果，为实验室节省了资源，提高了工作人员的工作效率。

参考文献：

[1]沈溪明，李海刚，等.不同浓度酸对Harris苏木精染色液染色效果的影响[J]。临床与实验病理学杂志，2005，20（3）：361-362.

[2]熊正文，李春光，等.配制苏木精染液时媒染剂用量的探讨[J]。张家口医学院报，2000，17（2）：20.

[3]王美娥，潘慧娟，钱峰.Harris氏苏木精染液配制的改良[J]。中国卫生检验杂志，2004，14（1）：107