穴位免疫疗法的实验研究

［摘

要］

目的：通过观察不同途径注射基因重组白细胞介素-2(rIL-2)对环磷酰胺造模大鼠免疫功能的影响，为临床应用穴位免疫疗法提供依据。方法：采用环磷酰胺造模大鼠，以大鼠胸腺、巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数、血清IL-2含量为指标，通过穴位注射、肌肉注射rIL-2及穴位注射生理盐水进行疗效比较。结果：3种治疗方法均能显著提高环磷酰胺造模大鼠降低的巨　噬细胞吞噬百分率和吞噬指数、血清IL-2含量(P

［主题词］

免疫抑制；环磷酰胺；免疫疗法；穴位研究

Experimental　Study　on　Acupoint　Immunotherapy--Effects　of　Different　In　jection　Methods　on　Immunologic　Functions　in　Cyclophosphamide　Model　Rats

Yang　Jun1,　Li　Jun2　(1.Affiliated　Acupuncture　and　Moxib　ustion　Hospital　of　Anhui　TCM　College,　Hefei　230061,　China;　2.　Anhui　TCM　College)

［Abstract］

Purpose

To　observe　effects　of　different　inj　ection　methods　of　gene　recombined　interleukin-2(rIL-2)　on　immunologic　function　s　in　the　cyclophosphamide　model　rats　so　as　to　provide　a　basis　for　clinical　appli　cation　of　acupoint　immunotherapy.　Methods

In　the　cyclopho　sphamide　model　rats,　the　thymus,　macrophage　phagocytic　percent　and　phagocytic　in　dex,　serum　IL-2　content　were　used　as　indexes　to　compare　the　therapeutic　effects

of　acupoint　injection　of　rIL-2,　intramuscular　injection　of　rIL-2　and　acupoint

injection　of　saline.　Results

The　3　injection　methods　all

could　significantly　increase　the　decreased　macrophage　phagocytic　percent,　phago　cytic　index　and　serum　IL-2　content　in　the　model　rats　(P

the　three　injection　methods.　Conclusion

The　therapeutic

effect　of　acupoint　injection　of　rIL-2　is　better　than　that　of　intramuscular　inje　ction　of　rIL-2.

［Key　words］

Immunosuppression;　Cyclophosphamide;　Immuno　therapy;　Research　on　Acupoints

穴位免疫疗法是将一些有免疫作用的微生物或生物制剂运用于穴位注射中，以调节机体的免疫功能，从而达到免疫防治的目的。此法依靠现代分子生物学的最新成果和中医传统理论，有效的结合了免疫制剂的特异性免疫功能和经穴的非特异性免疫功能，临床应用有广阔的前景［1］。本实验采用环磷酰胺致大鼠免疫抑制模型，观察穴位注射rIL-2对模型大鼠胸腺、巨噬细胞吞噬百分率、吞噬细胞指数及血清IL-2含量的影响，旨在为临床应用穴位免疫疗法提供实验依据。

1

材料与方法

1.1

材料

(1)动物：wistar大鼠50只，体重180～220　g，雌雄各半，由安徽医科大学实验动物中心提供，适应性喂养1周后用于实验。

(2)试剂及药品：注射用基因重组人白介素-2(沈阳市康利制药厂，批号000619)；环磷酰胺　(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号0010281)，白细胞介素-2放免试剂盒(总医院科技开发中心放免所)。

1.2

方法

(1)分组及造模方法：将50只大鼠随机分为5组，即空白组、模型组、穴位注射生理盐水组、穴位注射rIL-2组、肌肉注射rIL-2组，每组10只。除空白组外，余4组取新鲜配制的20　mg/ml环磷酰胺的生理盐水溶液，按20　mg/kg予腹腔注射，同时予空白组1　ml/kg生理盐水腹腔注射对照处理，以上处理每天1次，连续7天。

(2)选穴及取穴：穴位取"足三里"，左右侧交替使用。定位根据林文注主编《实验针灸学》并以比较解剖学为依据，"足三里"位于膝关节后外侧腓骨小头下约5　mm处，肌肉注射组选取"足三里"穴旁开1　mm肌肉饱满非经穴区处。

(3)治疗方法：注射用针采用1　ml一次性无菌注射器(上海米沙瓦医科工业有限公司)。肌肉注射rIL-2组与穴位注射rIL-2组采用新鲜配制rIL-2浓度为5万IU/ml的生理盐水溶液，按人鼠剂量换算，每只鼠每次按1.8万IU/kg体重给药；穴位注射生理盐水组同时按0.4　ml/kg体重注射生理盐水溶液。当日各组注射时均取同一侧肢体的穴位或部位，回抽无血后以相同速度推入。以上治疗每天1次，连续7天。

1.3

观察指标与方法

(1)所有大鼠在治疗第7次后，间隔4　h分别眼眶静脉采血，血液标本离心后收集血清，采用放免法测定血清IL-2含量。

(2)取血后第2日，每鼠称重，腹腔注射5%鸡红细胞溶液2　ml，8～12　h后将所有大鼠脱颈椎处死，仰位固定于鼠板。消毒腹部，剪开皮肤，经腹腔注入生理盐水2　ml，转动固定板1　min，然后抽取腹腔液1　ml，滴涂于干净载玻片上，每片0.2　ml，共2片，放在垫有湿纱布的搪瓷盒中，置于37℃孵箱中温育30　min。取出玻片，投入生理盐水漂洗，以除去未贴片的细胞。晾干，以丙酮-甲醇液(1∶1)固定5　min，再用4%姬姆萨-瑞特氏液染色3～5　min，用蒸馏水漂洗，晾干。在油镜下计数巨噬细胞数200个，按下式计算吞噬百分率与吞噬指数［2］。

吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数

吞噬百分率＝－－－－－－－－－－－－－－－－－－　×100%

200个巨噬细胞

被吞噬的鸡红细胞总数

吞噬指数＝－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

200个巨噬细胞

(3)涂片后，剪下大鼠的胸腺，电子天平称重。

1.4

统计学方法

实验数据用均数±标准差表示，组间比较用方差分析和t检验。

2

实验结果及分析

2.1

各组大鼠胸腺指数及血清IL-2含量的改变(见表1)

注：与空白组比较，*P

(因治疗和实验过程中意外致大鼠死亡者剔除，故结果样本数与分组时不同)

由表1可知，胸腺指数，与空白组相比，各组均极其显著降低(P

2.2

各组大鼠巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数的改变(见表2)

注：与空白组比较，***P

由表2可知，吞噬百分率、吞噬指数，与空白组相比，穴位注射rIL-2组无显著性差别，其余各组降低极其显著(P

3

讨论

基因重组白介素-2与淋巴细胞产生的白介素-2在体内外生物学活性无任何差异，并可利用基因工程技术大量生产，成为新兴免疫增强药，其小剂量应用疗效不佳，大剂量应用则副作用明显。

环磷酰胺为临床常用化疗、免疫抑制药物，其造模大鼠为经典免疫抑制模型。从实验结果看，尽管穴位注射生理盐水组、肌肉注射rIL-2组、穴位注射rIL-2组拮抗环磷酰胺造成大鼠胸腺损害的作用与模型组相比，差异无显著性意义，但对巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数及血清IL-2含量的提高与模型组相比，差异有显著性意义，证明三种注射方法均有一定作用。

在对巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数的改善上穴位注射rIL-2组与肌肉注射rIL-2组和穴位注射生理盐水组相比差异都极其显著。

由以上结果分析：肌肉注射rIL-2组发挥了rIL-2的药物作用。

穴位注射生理盐水组则发挥了"足三里"的穴位作用和穴位注射的针刺效应。环磷酰胺造模免疫抑制大鼠模型，属于中医理论的"正气虚"证，正气充足有赖于先天精气的充沛和后天水谷之气的濡养。脾胃为后天之本，故用足阳明胃经合穴"足三里"，针之可调理中焦、健脾运胃、补益气血，使正气得充。赵蓉［3］等观察针刺"足三里"穴6天，可使环磷酰胺造模免疫抑制大鼠降低了的腹腔巨噬细胞吞噬百分率、吞噬指数显著升高，表明了针刺"足三里"对机体非特异性免疫功能有改善作用。而从本实验结果分析穴位注射rIL-2组不但具有肌肉注射rIL-2组的药物作用，还有穴位注射生理盐水组穴位注射的针刺效应以及"足三里"的穴位作用，三种良性因素叠加，从而使其疗效最显著。而对胸腺损害的拮抗作用和提高血清IL-2含量上穴位注射rIL-2组与肌肉注射rIL-2组和穴位注射生理盐水组间相比较，差异不显著，疗效相当。笔者认为这可能与样本例数较少、rIL-2剂量偏小、治疗时间过短有关，有待于进一步实验证实。

本实验结果也表明，"足三里"穴可提高大鼠细胞免疫和体液免疫功能，前人试验也有类似结论［4］。传统中医理论即认为足三里穴具有调理脾胃、补益气血、扶正祛邪的功效，为强壮要穴。故可考虑将足三里穴作为穴位免疫疗法的主要选穴，从而最大限度地发挥穴位免疫疗法的穴位特异性。

穴位免疫疗法的优点完全可以弥补生物免疫制剂价格昂贵、用量大则副作用明显等不利于临床广泛应用的缺点，但对于其机理的研究相对滞后。今后的研究重点将着重于免疫特定穴位的筛选、不同药物最佳注射剂量的确定及产生放大作用的途径。

4

参考文献

1

吴焕淦，赵琛，陈汉平.略论穴位注射.中国针灸，1998；18　(5)：303

2

陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社，1993：316

3

赵蓉，马春红，谭连红，等.针刺对免疫抑制大鼠巨噬细胞功能的影响.针刺研究，1994；19(2)：67

4

宫斌，莫启忠，熊晓玲，等.针刺足三里穴对大鼠免疫功能的影响.上海针灸杂志，1994；13(1)：34

(收稿日期：2002-01-25，齐淑兰发稿)

(本题为安徽省科委97科研重点攻关项目