铁炮百合叶片的组织培养研究

摘要：以铁炮百合的叶片为外植体进行离体培养研究，结果表明：一定浓度范围内的6-BA、KT、2，4-D和NAA间的配组，能诱导不定芽形成。当激素组合为0.5mg/LNAA＋1.0mg/LKT＋0.3mg/L6-BA＋1.0 mg/L2，4-D时，铁炮百合的愈伤组织诱导率，出芽率与平均出芽数均达到最高。最佳继代增殖培养基为MS，小苗在1/2MS＋0.1mg/L6-BA上容易生根。

关键词：百合；叶片；激素；愈伤组织；芽诱导

百合(Lilium spp)是百合科百合属的多年生草本球根花卉，是世界上著名的观赏花卉。铁炮百合又称为麝香百合、复活节百合、龙牙百合、喇叭百合。铁炮百合花洁白，基部带绿色，形如喇叭，花筒较长，外形似炮筒，有铁炮百合之称，气味清甜芳香，故又叫麝香百合。铁炮百合在欧美主要作切花及复活节的盆花用，几乎成为复活节不可缺少的花卉，故在欧美诸国广泛栽培，栽培水平也很高。铁炮百合株形端直，花色纯白，形状优美，香气袭人，给人以洁白、纯雅之感，在中国又寓有百年好和的吉祥之意。铁炮百合产于江西省、湖南省、湖北省、安徽省、浙江省、河南省和陕西省等地，是我国较早的栽培种之一。。江西省的万载县、宜春市袁州区、上高县在大面积栽培，并已开发出百合系列深加工产品，已成为万载县的支柱产业和江西省名牌产品。铁炮百合的鳞片含有丰富的淀粉，主要供食用，风味独特，亦可药用，有润肺、止咳、清热、安神和利尿等功效，此外，还可用于观赏，大而洁白的花朵含有芳香油，可提取香料。当前百合产区主要依靠小鳞茎、珠芽和鳞片扦行无性繁殖，其后代容易积累病毒，严重影响其产量和品质，用种子进行繁殖，其后代会出现分离，不能保持原有母株的优良特性，且幼龄期过长，现在生产上很少采用。而利用组织培养繁殖百合，可在短期内获得保持原有品种优良性状的大量种苗，而且通过茎尖脱毒后，可获得大量无毒种苗，从而大大提高其产量和品质，是防止品种退化的一种重要手段。此外，传统留种方式主要是去大留小，占有耕地且降低产量，大大增加了种植成本，如果能推行组培工厂化育苗方式，不仅能使一些优良株系得到迅速推广，而且能大大节约留种成本，产生显著的经济效益。国内外对百合的组织培养研究，最早是1957年Robb首次发表了百合组培的论文，此后，一直有人从事该项研究，如国外的Hussey(1975，1982)、Takayama(1979，1982)、Stimart(1978，1981)等，我国的杨乃博(1981)、陈为民(1982，1983)、黄济明(1983)、解继能(1987)等。近年来，关于百合离体快繁的研究也有许多报道，但对叶片的诱导与分化的研究却很少。本研究通过不同激素配比的培养基对百合愈伤组织以及不定芽的诱导效果的比较，拟建立良好的培养体系，从而加速百合的繁殖进程。

材料与方法

实验时间和地点

实验于2009年12月-2010年5月初，在安徽省阜阳市农业科学研究所组织培养室内进行。

材料

铁炮百合无菌幼苗。

方法

取材。选用铁炮百合无菌苗的叶片为材料。剪取叶片基部以上2处-3处，分成小段，每段约0.5cm。接种到不同诱导培养基上进行愈伤组织、不定芽的诱导及芽苗的生根诱导。其中每个处理接种5瓶，每瓶培养基接种3个外植体，30天后统计试验结果。

培养基。以MS为基础培养基，细胞分裂素用BA、KT，生长素用NAA、2.4-D，以四者不同的浓度比例配置成诱导分化培养基，设置以下四种激素配比：

①0.5mg/LNAA＋1.0mg/LKT＋0.3mg/L6-BA＋1.0mg/L2.4-D，

②1.0mg/LNAA＋1.0mg/LKT＋0.3mg/L6-BA＋1.0mg/L2.4-D：

③0.5mg/LNAA＋2.0mg/LKT＋0.3mg/L6-BA＋1.0mg/L2，4-D，

④0.5mg/LNAA＋1.0mg/LKT＋1.0mg/L6-BA＋1.0mg/L2，4-D。

不定芽的增殖培养基设置以下几种配方：①Ms；②Ms＋0.1mg/L6-BA：③Ms＋0.5mg/L6-BA。

生根培养基设置以下四种配方，①Ms；②Ms＋0.1mq/L6-BA，③Ms＋0.5mg/L6-BA，④1/2Ms，⑤1/2Ms＋0.1mg/L6-BA。探索不同浓度激素比例对百合叶片的诱导分化及生根的影响。培养基均添加琼脂6.5g/L，蔗糖30g/L，pH调至5.8。在1.3kPa、121℃条件下灭菌20min。

接种。将叶片接种于诱导分化培养基上，将诱导产生的丛生芽分割成单芽接种于增殖培养基，最后将长势良好的丛生芽分化出的芽苗接种于生根培养基进行生根诱导1000Ix-2000lx，光照每天12h。

结果与分析

愈伤组织的诱导及不定芽的分化

设计4种起始诱导培养基，每种培养基接种15片外植体。接种后的外植体15d后叶片两端的伤口逐渐膨大呈哑铃形，长出细小淡黄色的愈伤组织，随着时间的推移而不断变大，最后分化成芽。统计愈伤组织及不定芽诱导状况。

在4种分化培养基上分别接种叶片切块进行分化效果的试验，试验结果见表1。

由表1可以看出，叶片在不同激素配比的培养基上分化效果不同：在培养基①中，叶片分化率最高，可达47％，培养基②、③和④中，分化率分别为40％、33％、20％。最佳诱导分化培养基为①0.5mg/LNAA＋1.0mg/LKT＋0.3mg/L6-BA＋1.0mg/L2，4-D。

成苗

将诱导产生的丛生芽分割成单芽，分别接种于不同培养基上，以MS为基本培养基，每种培养基接种5个单芽，40天后观察统计，统计结果如表2。

由表2可以看出，在没有添加任何激素的MS基本培养基中，长势最好，叶色深绿，芽苗健壮，在MS＋6-BA0.1mg/L培养基中，长势略差于Ms中的长势，夜色绿，但较Ms中的略矮；在Ms＋6-BA0.5mg/L培养基中，虽能生长，但长势不好，叶色浅绿。因此，最佳增殖培养基是①MS基本培养基。

生根

将小苗接种于生根培养基中，每种培养基接种5个单芽。在合适培养基上10天左右芽基部开始生根，并逐渐生长，同时茎也生长，20天左右根可以长至1.2cm-2.0cm，根数2条-7条，苗高4cm-8cm。表3列出了不同培养基上培养30天的生根情况。

由表3可以看出，在没有添加任何激素的1/2MS培养基中，百合试管苗也能生根且生根最多、最长。但根细长较弱，叶片较少且窄长、叶色浅。在MS培养基中，百合试管苗生根较多，长度适中，叶片较宽且叶色深绿。在添加不同浓度的6-BA的MS和1/2MS培养基中，苗出根数明显减少且较粗，根很短，长势也较差。生根最适培养基是①MS基本培养基。

炼苗和移栽