时间：2022-10-14 11:36:35
【摘要】目的 研究大剂量山莨菪碱联合乌司他丁对急性胰腺炎大鼠的治疗效果。方法 健康成年SD大鼠100只，实验前12 h禁食，自由饮水，随机（随机数字法）分为5组：健康对照组、SAP组、SAP+乌司他丁治疗对照组、SAP+山莨菪碱治疗组、SAP乌司他丁加大剂量山莨菪碱治疗组各20只。观察各组大鼠的淀粉酶、磷脂酶A2、内毒素检测结果和组织学变化。 另外再取SD大鼠60只，随机分为3组： SAP组、SAP+乌司他丁治疗对照组、SAP+乌司他丁及大剂量山莨菪碱治疗组，制作方法同前，观察生存情况。结果 SAP的血淀粉酶、PLA2、内毒素水平比三个治疗组明显升高（P
【关键词】胰腺炎；山莨菪碱；乌司他丁；磷脂酶A2；内毒素；全身炎性反应综合征；淀粉酶；炎性介质；蛋白酶抑制剂
The study of treating acute pancreatitis with large dose of anisodamine combined with ulinastain Zhang Gengwei， Shan Aijun， Liu Xunfa， Long Liangong， Wang Jin. The Surgical Emergency Department of Shenzhen People’s Hospital， Shenzhen， 518020， China
Corresponding author：Zhang Gengwei，Email：
【Abstract】Objective To study the effects of large dose anisodamine （654-2） combined with ulinastain on severe acute pancreatitis （SAP）.
Methods 100 healthySD rats which were fasted 12 hours before experiment and were allowed drinking water freely， were divided to 5 groups randomly（random number）： normal control group，SAPgroup，SAP+Ulinastain group， SAP+ Anisodamine group， SAP+Ulinastain+Anisodamine，there were 20 rats in every group .To observe the levels of diastase， phospholipase A2（PLA2） and endotoxin and pathology of rats in every group.Another cohort of 60 SD rats were divided into 3 groups： SAP group，SAP + Ulinastain group，SAP + Ulinastain+large dose Anisodamine group，survival periods were observed.
Results The levels of diastase， PLA2 and endotoxin in SAP rats were higher than those in 3 SAP with treatment groups （P
Conclusions Anisodamine could effectively relax the Oddi sphincter thereby decreasing the hydrostatic pressure inside the bile duct and pancreatic duct. Ulinastain is a kind of proteinase inhibitor suppressing many kinds of enzymes and in tern to stabilize lysosomal membrane and inhibit the release of lysosomal enzyme. Combination of the large dose Anisodamine with Ulinastain could inhibit the overexpression of inflammationary factors in SAP，thereby lessening the severity of viscera injury.
【Key words】Pancreatitis；Anisodamine；Ulinastain；， Phosphatidase A2；Systemic inflammatory response syndromes ；Diastase；Inflammationary mediators；Protease inhibitor
急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是一种常见的外科急腹症，轻型易于治疗，重型病情凶险，是目前外科急腹症中最棘手的疾病之一[1-3]。胆汁返流是导致胰腺消化酶被激活的主要因素，在Vater壶腹阻塞时，胆汁可返流入胰管。因感染胆汁中的细菌能使胆汁中的结合胆汁酸变成游离胆汁酸，游离胆汁酸对胰腺有很强的损伤作用，并可激活磷脂酶原A，产生激活的磷脂酶A，它作用于胆汁中的卵磷脂，产生有细胞毒性的溶血卵磷脂，引起胰腺组织的坏死[4]。所以，解除Vater壶腹处梗阻，松弛Vater壶腹处Oddi括约肌是治疗急性胰腺炎关键[5]。重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis SAP）是临床常见、病死率极高的危重急症；医学历经长期不懈探索，在提高SAP病例非手术治疗成功率、降低其并发症发生率上，很大程度上依赖有效药物的支持及处理[6]。 磷脂酶A2是人体的重要脂肪酶之一，正常含量有促进脂肪消化和吸收的功能，在病理情况下，此酶的异常释放可以使组织产生严重损害，由于血清中PLA2的水平与组织学改变同步，因此血清中PLA2的活性测定较测定血清中淀粉酶、脂肪酶、糜蛋白酶更具有特异性[7]。
本实验利用大鼠SAP模型，观察SAP全身应用大剂量山莨菪碱对血淀粉酶、磷脂酶A2、内毒素及各脏器病理学变化的影响，探讨大剂量山莨菪碱联合乌司他丁对SAP的治疗作用。
1 材料与方法
1.1 药物与分组
实验动物为SPF级健康Wistar大鼠100只，体质量200～250 g，由深圳市人民医院动物实验室提供，实验前12 h禁食，自由饮水，随机（随机数字法）分为：①健康对照组（NC，n=20）；②SAP组（SAP，n=20），③SAP+乌司他丁治疗对照组（SAP+UTI，n=20）；④SAP+山莨菪碱治疗组（SAP+654-2，n=20）；⑤SAP乌司他丁加大剂量山莨菪碱治疗组（SAP+UTI+654-2，n=20）。另外再取SD大鼠60只，随机分为3组：①SAP组（SAP，n=20）；②SAP+乌司他丁治疗对照组（SAP+UTI，n=20）；③SAP+乌司他丁及大剂量山莨菪碱治疗组（SAP+UTI+654-2，n=20）。制作方法同前，观察生存情况。
1.2 SAP模型制作
乙醚吸入加氯胺酮腹腔注射麻醉后，强力碘消毒腹壁，经腹壁正中切口入腹，在显微手术镜下取出十二指肠，找到胆胰管，于胆胰管末端加压注射5%牛磺胆酸钠溶液0.2 mL，1 min后拔针，制备SAP模型[8]。术毕背部皮下注射生理盐水2.5 mL/100 g，以补充术中丢失的液体，注射后10 min或稍长时间，胰腺出现水肿及点状出血及坏死，则SAP模型成功。
1.3 药物治疗
SAP+UTI 组在SAP模型制备成功后，经静脉注射乌司他丁2000 U；SAP+654-2组在SAP模型制备成功后，经静脉推注山莨菪碱10 mg/kg，6 h后再重复给上述药物1次；SAP+UTI+654-2组在SAP+UTI 组基础上静脉推注山莨菪碱10 mg/kg+乌司他丁2000 U，6 h后再重复给上述药物1次。
1.4 检测指标
12 h后处死各组动物，心脏采血测定：①血清淀粉酶（碘比色法）；②磷脂酶A2（酸滴定法）；③内毒素（基质偶氮显色鲎实验法）。
1.5 组织形态学检查
各组大鼠处死后解剖胰、肝、肾、肺等，观察其大体形态改变，并取组织行光镜检查。
1.6 统计学方法
计量资料以均数±标准差（x±s）表示，数据分析采用SPSS 13.0统计软件包进行成组t检验、方差分析，计数资料采用χ2检验，以P
2 结果
2.1 血清淀粉酶、磷脂酶A2及血浆内毒素水平
SAP+UTI+654-2组、SAP+UTI组、SAP+654-2组和SAP组比较，SAP+UTI组和SAP+UTI+654-2组比较，差异均有显著性意义（P0.05）（表1）。
2.2 组织学变化
2.2.1 大体标本所见 ①SAP组：胰腺质软，出血，呈暗红色，分叶结构模糊，均有较大面积水肿、坏死和钙化斑出现，腹腔内有大量血性腹水，胃、肠管扩张并有出血点，肺组织充血、水肿，肝表面弥漫性出血点及局灶性坏死；②SAP+UTI+654-2组腹腔少量积液，胰腺水肿并见小灶性出血点及坏死；肺、肝、肾病理学改变明显较轻；③SAP+654-2组及SAP+UTI组病理学改变介于二者之间。
2.2.2 光镜检查 ①SAP组：胰腺组织呈大片凝固性坏死，细胞结构模糊不清，间质小血管壁也有坏死，残余正常组织少，肝成片状坏死；肺肾间质充血、水肿，肺泡壁断裂等；②SAP+UTI+654-2组：无大片凝固性坏死，间质充血水肿并有中性粒及单核细胞浸润，胰、肝、肺、肾脏器的病理学改变均较SAP组明显减轻（图1）；③SAP+654-2组及SAP+UTI组病理学改变介于二者之间，仍有小块凝固性坏死。
2.3 动物生存情况
SAP组3 d内病鼠病死率为65%，SAP+UTI组3 d内病鼠病死率为47%，与SAP组差异有统计学意义（P
3 讨论
AP是临床普外科常见的急腹症之一，主要病因为胰管阻塞、胰管内压力骤然增高、胰腺血液淋巴循环障碍等引起胰腺消化酶对其自身消化[9]。其中SAP约占8%～12%，其病死率很高，达15%～20%，是目前病死率甚高的临床常见重症，尽管其治疗方法不断改进，但总的疗效并不理想[10]。
山莨菪碱（654-2）是胆碱受体阻滞剂，在急性胰腺炎的治疗中倍受争议，常规用量是1 mg/（kg·d），近来发现静推大剂量山莨菪碱4 mg/（kg·d）用于AP后不良反应很少，可明显减轻微循环损伤，缩短病程，降低病死率[4]。乌司他丁是从健康成年男性新鲜尿液中分离纯化出来的一种糖蛋白，属蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用。另具抑制溶酶体酶的释放，清除氧自由基及抑制炎症介质释放的作用[6]。
SAP的血淀粉酶、PLA2、内毒素水平比3个治疗组明显升高（P
大剂量山莨菪碱的全身应用，阻滞胰周植物神经，不但可以减少神经性胰液、胰酶分泌，同时还具有解痉、降低胆胰管系的压力，特别是松弛Oddi括约肌的作用，这些对减少胰腺组织等进一步损害有益[2，7，9]。引起SAP病例死亡的主要并发症是ARDS，应用大剂量山莨菪碱可以解除小血管痉挛，改善V/Q比值，并且保护溶酶体膜，减少其酶对肺组织的损伤。新近有文献报告山莨菪碱不但能改善组织的微循环，还具有抗细胞因子、抗氧自由基、稳定溶酶体膜的作用，在细胞水平上与内毒素相对抗，以及阻断由于脏器缺血对细胞的不可逆损伤的作用。乌司他丁属蛋白酶抑制剂，对多种酶有抑制作用[10]；对于急性胰腺炎早期急性全身炎性反应综合征（SIRS）和导致多器官功能衰竭（MOSF）治疗效果明显。本研究结果与以上结论相符。
参考文献
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（收稿日期：2013-08-11）