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摘 要：目的：研究活血解毒益气法组方对兔PTCA术后内皮功能的影响。方法：运用球囊原位扩张、拉伤致兔颈总动脉PTCA术后内皮损伤模型，术前3天予活血解毒益气法大、小剂量组和普拉固灌胃给药，造模成功后继续给药15天，采集标本，分别采用硝酸还原酶法、按试剂盒说明和酶联免疫吸附法进行检测。观察其对血清NO、NOS和血浆vWF的影响。结果：活血解毒益气法大、小剂量组和普拉固均能显著增加NO、NOS的含量，并能显著降低vWF的水平，与模型组比较，均有显著性差异，(P
关键词：PTCA；活血解毒益气法；血管内皮功能失调；一氧化氮(NO)；一氧化氮合酶(NOS)；血管性假血友病因子(vWF)
中图分类号：R-33
文献标识码：A
文章编号：1673-7717(2008)03-0600-02
收稿日期：2007-10-14
目前经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA)已发展成为一种较成熟的介入性治疗手段，药物洗脱支架的广泛应用已明显降低了RS的发生率，并被称为是继单纯球囊扩张、支架置入之后，冠心病介入史上第3座里程碑。但近来的循证医学研究表明，药物支架置入后，其近期血栓形成和远期RS仍不可完全避免。血管内皮损伤、失调是再狭窄发生的启动及促进因素[1]。目前中医药在防治PTCA术后再狭窄的研究中，认为本病的病机为本虚标实，以脏气虚弱为本，血瘀、痰浊为标。主要通过活血化瘀、化痰去浊、益气养血等法的配合运用来防治本病。我国第一代著名中西医结合心血管病专家廖家桢教授认为PCI术后急性血栓形成和再狭窄的病理过程与创伤修复相似，则辨治当类同于中医修复创伤的治法。因此，中医治疗的原则应为修复新伤，针对病变局部瘀毒互结、正气亏虚的病机特点治以活血解毒益气，而使心脉通畅，瘀毒两清。活血解毒益气法的组方用药体现了这一基本治法。本实验主要观察以中医修复创伤的活血解毒益气法组方对兔PTCA术后血管内皮功能的影响。
1 材料与方法
1.1 动物 健康新西兰家兔30只，体重1.8～2.3kg，均为雄性，由浙江中医药大学动物实验中心提供。许可证号：SCXK(浙)2005-0022。
1.2 仪器与试剂 分光光度仪：上海第二仪器厂；酶标仪：变色龙，芬兰Labsystems公司；电热恒温水浴箱：上海精宏实验设备有限公司；高速离心机：上海医用分析仪器厂；兔血清一氧化氮(NO)试剂盒：南京建成生物工程研究所；兔血清一氧化氮合酶(NOS)试剂盒：南京建成生物工程研究所；兔血浆血管性假血友病因子(vWF)试剂盒：浙大生物基因工程有限公司(进口原装)。
1.3 手术器械及药品 手术器械：2.0mm×20mm PTCA球囊导管和手推压力泵：美国Medtronic公司；血管钳3把，眼科弯镊4把，大剪刀1把，眼科剪2把(弯)，持针器1把，7号4号线各1卷，缝合针线。药品：戊巴比妥钠：国药集团化学试剂有限公司批号：F20041117；青霉素钠：华北制药有限公司批号：X0506107；肝素钠：上海第一生化药业有限公司批号：060502。
1.4 实验用药及分组 ①活血解毒益气法组方：由半枝莲、丹参、金银花、牡丹皮、生黄芪等组成，由杭州市中医院制剂室制备，浓度为3g生药/mL。②普伐他汀20mg：由中美上海施贵宝制药有限公司提供，批号：0603056，每片20mg，动物按1.5mg/kg给药，用双蒸水溶解制备成混悬液。③分组：假手术组；模型组；活血解毒益气法组方大剂量组(中药B组)；活血解毒益气法组方小剂量组(中药A组)：阳性对照药(普伐他汀)组，为临床等效剂量(1.5mg/kg)。每组6只兔子。④给药方法：从造模前3天开始，给兔子灌胃给药，药物均根据“人和动物体表面积折算的等效剂量比率表”[2]计算，以临床等效剂量为小剂量，4倍于临床等效剂量为大剂量。造模成功后，各给药组继续给药15天。普通饲料喂养。
1.5 模型制备方法 兔子适应性喂养1周后，用3%的戊巴比妥钠1mL/kg耳缘静脉注射麻醉。术前予肝素钠100U/kg耳缘静脉注射抗凝。沿颈前正中线切开皮肤，暴露并游离右颈总、颈内及颈外动脉，于右侧颈总动脉近心端距颈内外动脉分叉处3～4cm处及颈内动脉起始处用动脉夹夹闭，在右颈外动脉远心端距分叉处约1cm处结扎，于右颈外动脉下垫一镊子柄，并用眼科剪剪开一“V”形切口(约为管周的1/3)，直视下逆行插入PTCA球囊导管(2.0mm×20mm)至动脉夹处，连接压力泵，以7～9个大气压注入肝素生理盐水扩张球囊持续30s，缓慢回拉导管，重复3次，抽空球囊，退出导管，在切口近端结扎右颈外动脉，术后肌注青霉素80万U/天。连续3天，术后普通饲料喂养。假手术组不行球囊扩张外，余步骤同上。
1.6 检测方法 血清NO检测方法，采用硝酸还原酶法。血清NOS检测方法，按试剂盒说明进行操作。血浆vwF检测方法，采用酶联免疫吸附法。
1.7 统计学分析 应用SPSS12.0软件包，各组实验数据经正态分布检验后以均数±标准差(±s)表示。均数间的比较经方差齐性检验后，以单因素方差分析统计结果，P
2 结 果
2.1 NO NOS检测结果 模型组NO、NOS均低于假手术组，但无明显差异；西药组、中药A、B组均显著高于模型组(P
2.2 vWF检测结果 模型组vWF含量较假手术组明显升高(P
3 讨 论
血管内皮细胞(VEC)所处的解剖部位是一个易于发生损伤的功能性界面，PCI是借助球囊的机械张力作用于动脉粥样斑块，使之压缩、破裂、断裂或裂开，从而造成冠状动脉腔的扩大。这个过程造成了不同程度的内膜剥脱，甚至中膜的撕裂，由于这种组织结构的破坏，造成内皮依赖性收缩与舒张、凝血与抗凝血以及生长抑制因子与促生长因子和抗炎物质及炎性反应之间的不平衡，即称之为内皮功能失调。内皮损伤是再狭窄发生的启动及促进因素[1]。内皮损伤一旦发生，一方面它将促进炎症介质的释放和附壁血栓的形成，另一方面则释放各种血管活性物质、生长因子、黏附因子等，促进血管收缩，平滑肌细胞迁移和增殖，启动一系列血管损伤后的修复反应，促进内膜增生及血管重塑，最终导致RS的发生。
正常情况下，VEC能利用左旋精氨酸在NOS的催化下合成释放N0。NOS分布很广，除内皮细胞外，其他细胞如神经细胞、活化的巨噬细胞、平滑肌细胞也能合成NO。NOS分为两种类型：一种为原生型(cNOS)，又分为内皮细胞型(eNOS)和脑型(nNOS)两种亚型。酶的激活需要Ca2+的存在，为Ca2+依赖型；另一种为诱生型(iNOS)，来源于巨噬细胞、平滑肌细胞，为非Ca2+依赖型。
NO可激活血管平滑肌细胞内的鸟苷酸环化酶使环一磷酸鸟苷(cGMP)含量增加，血管扩张；抑制血小板向血管内皮损伤部位黏附与聚集；抑制VSMCs的增殖；诱导VSMCs的凋亡；抑制细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)的表达，从而抑制白细胞与内皮下基质的黏附[3]。内皮功能障碍以内皮依赖血管舒张功能障碍为代表，NO的合成与释放减少是主要原因[4]。故PTCA使血管内皮细胞受到损伤，内皮功能受到影响，导致NOS大量破坏，N0产生不足，进一步加重内皮功能的障碍。
VWF由血管内皮细胞及巨核细胞合成和分泌的糖蛋白，当内皮细胞损伤、变性、脱落等时，内皮细胞产生vWF增多。vWF水平的增加是血管内皮细胞损伤的标志物之一[5]。由于机械性损伤致血管内皮细胞受损，vWF水平升高是内皮细胞损伤或激活的标志。随着vWF的明显增加，纤维蛋白含量也增加[6]，vWF分子可与血小板膜上的糖蛋白受体Ib结合，促进血小板的黏附聚集与释放反应[7]，启动凝血系统，使血黏度增加，血流缓慢，有利于血小板血栓的形成。
本实验结果可见，PTCA术后2周模型组表现为NO、NOS水平较假手术组有所下降，但均不是非常明显。这可能与内皮损伤后机体对大量cNOS遭到破坏产生代偿，通过内膜中iNOS的表达增加而在一定程度上弥补总NOS及NO的不足。模型组vWF水平较假手术组明显下降，这与球囊机械拉伤血管内皮，大量vWF释放入血有关。
近期REGRESS研究(他汀类药物的生长消退评价研究)结果显示，普伐他汀是唯一报道可以延缓PTCA术后RS的他汀类药物。Hamelin等[8]研究发现：普伐他汀具有活化内皮性N0合成酶的作用。本实验中普伐他汀组NO及NOS水平较模型组升高，与国内外临床报道一致[9]，vWF水平均较模型组显著降低，这可能与药物对PCI术后所致的血管内皮损伤的修复作用有关。
中药活血解毒益气法组方大、小剂量组N0及NOS水平均较模型组显著升高，vWF水平均较模型组显著降低，但两组间无显著差异，与普伐他汀组亦无明显差异。
可见，中药活血解毒益气法组方及西药普拉固都能通过增加NOS的水平，促进NO的分泌，通过增加扩血管活性物质的释放和/或减少扩血管活性物质的分解抑制血管的弹性回缩，并能通过抑制vWF的分泌，预防急性和亚急性血栓形成，对因PCI所致的血管内皮损伤有保护和修复作用，进而改善血管内皮功能，防治急性血栓形成和再狭窄的发生；中药大、小剂量组与西药普拉固疗效相当，但二者间无明显量效依赖关系。
参考文献
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