全自动生化分析仪AU680测糖化血红蛋白国产试剂与进口试剂的比对

(河北威县人民医院检验科河北威县054700)【摘要】目的 观察全自动生化分析仪测糖化血红蛋白原装进口试剂与国产试剂检测结果，探讨国产试剂替代进口试剂的可能性；方法 选择北京利德曼公司的糖化血红蛋白检测试剂，与美国BIO-RAD VARIANTⅡ HbAlc检测结果进行比较，分析放置时间对检测结果的影响；结果 精密度良好，批内CV为3.12%，批间CV值为3.41%；稀释线性良好，R2=0.992，实测浓度数值与理论数值契合度很高；胆红素、三酰甘油、尿素三种物质对检测结果没有明显影响； 密闭条件下，全血标本放置2周结果稳定，溶血标本放置6个月结果稳定；结论 北京利德曼公司的糖化血红蛋白检测试剂与日本希森美康糖化血红蛋白检测试剂结果差异无显著性（P>0.05），完全能够满足临床检测要求。【关键词】免疫凝集法；糖化血红蛋白；国产试剂盒【中国分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1004-5511（2012）04-0029-01 糖尿病是一种多发性的全球性疾病，WHO预计2025年全球将有多达3亿多糖尿病患者，我国糖尿病患病率也呈逐年上升的趋势［1］。糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin HbAlc）是血液内血红蛋白与葡萄糖结合的那部分，其含量正相关于血糖浓度，反应血糖升高患者的1-2个月前平均血糖水平，是糖尿病血糖控制的金标准［2］。HbAlc检测方法根据不同的检测原理分为三类，包括阳离子交换层析法、免疫凝集法、微柱法、高压液相色谱法等［3］。本文选用北京利德曼公司的糖化血红蛋白测定试剂，通过免疫凝集法检测HbAlc，评价其检测效果的可靠性与准确性，比较进口试剂与国产试剂的差异性。1 材料与方法1.1 仪器与试剂:全自动生化分析仪：日本产希森美康 AU680；糖化血红蛋白分析仪：BIO-RAD VARIANTⅡ（美国）；试剂：希森美康原装试剂，BIO-RAD VARIANTⅡ（美国）配套试剂：校准品（BB62636）、离子交换柱（EA51800）、全血底物（AA70003）；北京利德曼公司试剂盒（70711G211）:包括溶血剂、血红蛋白测定试剂及糖化血红蛋白（HbAlc）检测试剂，核准液（3670506）。1.2 标本:根据糖尿病的诊断标准（2007版），收集2010年3月-2010年8月经我院确诊的45例糖尿病患者（病理组）和45例正常健康人（健康组）血液标本，所有标本均采集空腹静脉血，采用 抗凝，密闭室 保存，2d内检测。高胆红素血清与高三酰甘油血清分别从黄疸患者和高脂血症患者采集，4次检测总胆红素与直接胆红素，然后取平均值。1.3 方法:(1) 精密度实验 选取病理组与健康组全血样本各一份,每天上、下午分别测定1次，共测定10d,连续测定20次，计算批内与批间CV值。(2)抗干扰实验 取高胆血红素血清、高三酰甘油血清、高尿素血清三种干扰物质，按1/5-5/5不同的比例，加入病理组与健康组混合全血标本中，检测糖化血红蛋白HbA1c浓度。(3) 线性分析 选择已知HbA1c浓度标准液，配制5.3、7.8、10.3、13.2、15.0等5个不同百分浓度的标本，每个标本进行4次HbA1c浓度检测，对检测结果作线性回归分析，比较理论浓度与实测浓度的相关性。(4) 相关性分析 把病理组与健康组共计90例标本分别在全自动生化分析仪（AU680）和糖化血红蛋白分析仪（BIO-RADVARIANTⅡ）测定HbA1c值，并对比分析检测结果。(5)时间影响分析 将混合全血标本与溶血标本置于 密闭室内，于1d、2d、1wek、2wek、1月、6月后进行4次检测，获取4次检测的平均值，分析时间因素对检测结果的影响。(6)方法学评价 根据杨昌国［4］等介绍美国临床实验室评价方案。(7) 统计学处理 使用SPSS13.软件包，重复性统计结果采用平均值加标准差表示（x），检测结果作配对t检验，以P0.05），,健康组t=0.712，P=0.486，（P>0.05），差异无显著性，表明两者具有相同的检测能力。检测结果如表2所示。表2 免疫法与色谱法检测病理组与健康组结果比较(x-±s)2.5 时间影响分析 在 密闭室内，全血标本放置2周结果稳定，1个月后检测结果比均值低；溶血标本放置6个月结果稳定。时间因素对结果的影响如表3所示。表3 密闭条件下全血标本及溶血标本时间影响分析（%）3讨论2008年，美国糖尿病协会与欧洲糖尿病研究会联合提出糖尿病治疗目标浓度为HbAlc不大于7%；［5］。也就是说，在检测HbAlc过程中，必须保证在7%左右浓度时检测的准确性，满足临床诊断和监控糖尿病的目的。免疫凝集法利用糖化血红蛋白抗体结合凝集素，升高溶液中的聚光度，通过竞争HbAlc抗体结合位点，使凝集素与HbAlc抗体的结合速度降低，利用700nm吸光度升高与糖化血红蛋白浓度成反比、600nm总血红蛋白浓度与吸光度升高成正比的原理快速简捷地检测HbAlc的目的。本组检测结果表明，使用北京利德曼公司试剂盒免疫凝集检测HbAlc时，其线性范围、稀释变异完全符合检测要求，检测最低浓度限度为0.075g/L，而且不精密度小于5%，检测结果与美国糖化血红蛋白分析仪进行比较，差异无显著性(P>0.05)；从抗干扰实验分析，黄疸、血脂等因素对免疫凝集法无明显干扰，说明免疫凝集法有一定的抗干扰性［6］。本组实验还表明，在 密闭室环境中，放置2周时间内，全血标本对HbAlc结果无明显改变；放置6个月溶血标本HbAlc检测结果无明显改变。特别是对于溶血标本，由于可以长时间保存，能够实现长时间的质量控制，有助于疗效的评估的延续性及治疗的可靠性。日本希森美康公司生产的AU680全自动生化分析仪分析测定快速，有较高的准确度与灵敏度，但其配套进口试剂价格昂贵，患者难以接受。在保证结果准确可靠的前提下，用国产糖化血红蛋白试剂和原装糖化血红蛋白试剂，对糖尿病人及高危人群标本分别用进口与国产试剂进行测定，通过精密度实验、抗干扰实验、线性分析、相关性分析、时间影响分析，证实国产试剂检测HbAlc完全能够满足临床需求，体现了良好的应用前景，可代替进口试剂。参考文献［1］Zimmet P. Mc Catry D. The NIDDM epidemic:global ectimates and projection: a look into the crystal ball ［J］. IDF Bulletin,1995,40(8):8-16［2］中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南(2007年版)［J］. 中华内分泌代谢杂志， 2008， 24(2)：增录2a-1-23.［3］John WG， Mosca A， Weykamp C， et al. HbA1c standardisation： history， science and politics［J］. Clin Biochem Rev， 2007， 28(4)：163-168.［4］杨国忠，许叶等.线性评价和干扰试验中NCCLS评价方案的应用［J］.临床检测学杂志，1999，17（3）：184-186［5］David M, Nathan, Rury R, et al . Management of hyperglyceimia in type 2 diabetes: a consensus algorithm for the initiation and adjustment of therapy［J］。Diabetes Care,2008,31(3):173-175［6］Gremmels H D,Richter A,Watzke l.Evaluation of the hemoglobin Alc-analyzer TOSOH HLC-723 G7［J］.Clin Lab,2003,49:243