FHIT和P16蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

[摘要] 目的 研究FHIT和P16基因蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其意义。 方法 使用组织芯片和免疫组织化学SP法检测FHIT和P16基因蛋白在60例非小细胞肺癌组织中的表达情况。 结果 非小细胞肺癌中FHIT和P16蛋白表达阳性率差异无统计学意义（P > 0.05）。FHIT的表达阳性率在肺鳞癌中为37.93%（11/29），在肺腺癌中为70.96%（22/31）（P < 0.05）；P16的表达阳性率在肺鳞癌中为31.03%（9/29），在肺腺癌中为70.96%（22/31）（P < 0.05）。FHIT蛋白表达与肺癌淋巴结转移有关（P < 0.05）。 结论 尚不能认为非小细胞肺癌中FHIT和P16蛋白表达相互关联。FHIT和P16在肺鳞癌发生中起了重大作用，FHIT可作为预测非小细胞肺癌有无淋巴结转移的指标。

[关键词] 非小细胞肺癌；FHIT；P16；免疫组织化学；组织芯片

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）36-0147-02

Expression and significance of FHIT and P16 proteins in non-small cell lung cancer

ZHANG Yanzi1 ZENG Xiangyi1 ZOU Xihong1 LI Qiulian1 PENG Qian1 WANG Xiaoping1 DU Richang2

1.The Second Respiratory Department of the First People's Hospital of Shaoguan City in Guangdong Province， Shaoguan 512000， China； 2.The Pathology Department of the First People's Hospital of Shaoguan City in Guangdong Province，Shaoguan 512000， China

[Abstract] Objective To discuss the expression and significance of FHIT and P16 in non-small cell lung cancer. Methods The expressions of FHIT and P16 proteins were studied by tissue chip technique and immunohistochemical SP methods in 60 cases of non-small cell lung cancer tissues. Results The positive expression rate of FHIT and P16 protein in NSCLC was no statistically significant difference（P > 0.05）. The positive expression rate of FHIT protein was 37.93%（11/29） in squamous carcinoma tissues while 70.96%（22/31）（P < 0.05）. This study also showed that the positive expression rate of p16 protein was 31.03%（9/29） in squamous carcinoma tissues of lung and 70.96%（22/31） in lung adenocarcinoma tissues（P < 0.05） . The expression of FHIT in NSCLC was closely related to lymph nodes metastasis（P < 0.05）. Conclusion It can not be considered that the expression of P16 and FHIT protein in NSCLC were correlated with each other. FHIT and P16 play important role in the the development of squamous carcinoma of lung. FHIT may be considered as an indicator to predict the presence of lymph node metastasis in non-small cell lung cancer.

[Key words] Non-small cell lung cancer； FHIT； P16； Immunohistochemistry； Tissue chip

恶性肿瘤是常见的一类疾病，人们谈“癌”色变。近年来，在肿瘤分子生物学研究领域中，许多人在研究肿瘤基因的异常表达与肿瘤的关系。本实验在2009年通过组织芯片和免疫组化观察FHIT和P16基因蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况，进而探讨FHIT和P16基因与非小细胞肺癌发病关系。

1 材料与方法

1.1 实验材料

标本为存档石蜡标本60例（为胸外科手术后经病理科确诊为非小细胞肺癌），其中鳞癌29例，腺癌31例；33例为无淋巴结转移者，27例为有淋巴结转移者。实验试剂：SP试剂盒、FHIT兔抗人多克隆抗体（工作液）、P16鼠抗人单克隆抗体（工作液）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 制片

先制成组织芯片石蜡块后，然后切片，采用免疫组化SP法，详细步骤严格按照说明书进行。用已知阳性的肾组织切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 免疫组织化学

FHIT和P16蛋白的表达免疫组化以出现棕黄色颗粒为阳性，FHIT和P16蛋白阳性主要定位在胞浆，少数定位在细胞核。0～10%肿瘤细胞内可见棕黄色颗粒为阴性；>10%肿瘤细胞见棕黄色颗粒为阳性。

1.4 统计学方法

使用软件SPSS13.0进行χ2检验或四格表确切概率法，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 FHIT和P16蛋白在非小细胞肺癌中的表达

见表1。

表1 FHIT和P16蛋白在非小细胞肺癌中的表达

注：χ2=0.1667，P > 0.05

2.2 非小细胞肺癌有无淋巴结转移组中FHIT和P16蛋白表达

见表2。

2.3 FHIT和P16蛋白在肺鳞癌与腺癌中的阳性表达

见表3。

2.4 FHIT和P16蛋白在肺鳞癌中的表达

见表4。

表4 FHIT和P16蛋白在肺鳞癌中的表达

注：χ2=0.3333，P > 0.05

3 讨论

肺癌的发病率和病死率呈逐年增加趋势。基因改变在恶性肿瘤的发生发展中起决定性的作用，基因调节细胞生长和分裂。两类基因即致癌基因和抑癌基因均参与了肿瘤的发生。脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad，FHIT）被认为是抑癌基因，定位于染色体3p14.2上，它是将脆性位点与肿瘤相联系起来[1]。3p14.2区域有500 kb，可以包含许多其他基因。p16基因又称为多种肿瘤抑制物基因，被认为是重要的抑癌基因，p16基因编码的蛋白产物具有生长抑制作用。p16基因的灭活与肿瘤发生密切相关。文献[2]认为p16基因的表达缺失是非小细胞肺癌中的常见事件。王国付等[3]认为FHIT蛋白和P16蛋白表达缺失与非小细胞肺癌的发生有关。Chen P等[4]实验示：p16及FHIT基因转录本缺失检出率在肺癌患者中显著高于良性肺部疾病的患者。表1示本实验60例非小细胞肺癌标本中20例肺癌FHIT、P16同时表达阳性，13例肺癌FHIT阳性、P16阴性，11例肺癌FHIT阴性、P16阳性，而16例肺癌FHIT、P16同时表达缺失，表明肺癌的致癌因素不仅仅是FHIT、P16表达缺失，本实验所选标本至少有三种因素参与了肺癌的发生。说明多种基因功能异常和多种因素作用形成肺癌。单纯恢复某一个抑癌基因的功能可能不能完全抑制肿瘤的生长。文献[5]认为非小细胞肺癌中FHIT与P16蛋白表达呈正相关。但从表1可以看出非小细胞肺癌中FHIT和P16蛋白表达阳性率差异无统计学意义（P > 0.05），尚不能认为非小细胞肺癌中FHIT和P16蛋白表达相互关联。

FHIT蛋白阳性表达率在有淋巴结转移肺癌组为37.03%（10/27），无淋巴结转移组为69.69%（23/33）（P < 0.05）。P16的表达阳性率在有淋巴结转移组为40.74%（11/27），无淋巴结转移组为60.60%（20/33）（P>0.05）。文献[6]认为P16缺失与肺癌有淋巴结转移有关。表明FHIT蛋白表达与肺癌淋巴结转移有关，可作为预测肿瘤有无淋巴结转移的指标，而P16则不然。本实验FHIT的表达阳性率在肺鳞癌中为37.93%（11/29），在肺腺癌中为70.96%（22/31）（P < 0.05）。P16的表达阳性率在肺鳞癌中为31.03%（9/29），在肺腺癌中为70.96%（22/31）（P < 0.05）。王萍等[7]认为肺鳞癌中FHIT基因和P16基因表达缺失均低于肺腺癌。王国琴等[8，9]实验示FHIT蛋白在肺鳞癌中失表达阳性率高于腺癌，差异有统计学意义（P < 0.05）。杨文君等[10]认为P16表达与肺癌病理组织分型无关。本实验证明FHIT基因、P16基因表达缺失与非小细胞肺癌病理组织类型有关，参与肺鳞癌的发生、发展。检测FHIT基因、p16基因表达缺失可以作为鉴别肺癌的组织类型的一个参考指标。从表4可以看出FHIT、P16蛋白在肺鳞癌中的表达差异无统计学意义（P > 0.05），尚不能认为两者在肺鳞癌表达有关系。两者在肺鳞癌的发生过程中可能存在关联，也有可能为独立因素。有待进一步研究。

肺鳞癌中FHlT基因、P16基因失表达都是频发事件，但应用该两基因蛋白诊断肺鳞癌时，目前尚无优劣之分。而FHlT基因、P16基因可能在肺腺癌的发病过程中并非起关键作用，有待进一步研究肺腺癌的发病机制。FHIT和P16在肺鳞癌发生中起重大作用。联合检测FHIT和P16蛋白有利于判断非小细胞肺癌的病理组织类型。FHIT可作为预测非小细胞肺癌有无淋巴结转移的指标。

[参考文献]

[1] Ohta M，Inoue H，Cotticelli MG，et al. The FHIT gene，spanning the chrolnosome 3p14.2 fragile site and renal carcinoma-associated t（3：8） breakpoint.is abnormal in digestive tract cancers[J]. Cell，1996，84（4）：587-597.

[2] Panani AD，Maliaga K，Babanaraki A，et al. Numerical abnormalities of chromosome 9 and p16CDKN2A gene deletion detected by FISH in non-small cell lung cancer[J]. Anticancer Res，2009，29（11）：4483-4487.

[3] 王国付，钦光跃，李祝尧，等. 非小细胞肺癌组织中FHIT、P53和P16蛋白的异常表达及其与临床病理的关系[J]. 中国肺癌杂志，2004，14（4）：21-24.

[4] Chen P，Li J，Wang Y，et al. Detection of FHIT and p16 mRNA deletion in biopsy specimens obtained by bronchoscopy for the diagnosis of lung cancer[J]. Int J Biol Markers，2013，28（3）：259-266.

[5] 王海霞，张建勇. FHIT和p16在非小细胞肺癌中的表达及意义[J]. 山东医药，2008，48（5）：37-38.

[6] 冼磊，周华富，张兴华，等. p16基因甲基化及蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达[J]. 广东医学，2009，30（12）：1816-1818.

[7] 王萍，张庆，王祖义，等. 非小细胞肺癌组织中FHIT和P16基因表达的研究[J]. 癌变·畸变·突变，2007，19（3）：242-245.

[8] 王国琴，张灿珍，魏万里，等. FHIT基因在非小细胞肺癌中的表达及意义[J]. 实用肿瘤杂志，2006，31（4）：339-342.

[9] 袁玲，王新允，郑海燕，等. 应用组织芯片研究肺癌及癌前病变组织中FHIT的表达及其意义[J]. 中国肺癌杂志，2007，10（3）：192-196.

[10] 杨文君，翔燕，俞友娟，等. p53、p16、FHIT基因蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义[J]. 实用肿瘤杂志，2006，（1）：43-45.

（收稿日期：2013-11-08）