弓形虫病免疫学诊断方法研究进展

摘 要：弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的共患病。国内外学者在弓形虫病诊断方面进行了大量研究。目前，检测抗弓形虫抗体或循环抗原的免疫学诊断方法主要有染色试验（DT）、凝集试验（AT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫胶体金技术等。文章就该病的免疫学诊断方法的研究进展加以概述。

关键词：弓形虫病； 免疫学； 诊断方法

中图分类号：R382.5 文献标识码：A 文章编号：1006-3315（2014）07-155-001

弓形虫（Toxoplasma）是一种专性细胞寄生性原虫，具有广泛的宿主群并在世界范围内流行，引起共患寄生虫病。免疫学诊断方法具有敏感性高，特异性强，操作简便快速等优点，是目前国内外诊断弓形虫病的主要方法，主要有染色试验（DT）、凝集试验（AT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫胶体金技术等。

一、染色试验

DT曾被视为是弓形虫病病原特有的血清学检测方法，具有良好的特异性敏感性和重复性。活滋养体在致活因子的参与下，与样本的特异性的抗体相互作用，使虫体表膜破坏而不被美兰所染。但由于在进行检查时必须使用活的、有毒力的速殖子而存在巨大的危险性，限制了其应用[1]。

二、.凝集试验

直接凝集试验（DAT）简便快速，阳性反应出现时间比间接血细胞凝集试验（IHA）早。试验以甲醛固定的弓形虫悬液作为抗原与被检血清直接进行反应。间接血细胞凝集试验（IHA）主要建立在抗原抗体特异性结合形成抗原抗体复合物的基础之上。优点是简便、快速、灵敏，已广泛应用于流行病学调查[2]。

三、间接荧光抗体试验

间接荧光抗体试验（IFAT）是以完整的弓形虫为抗原，采用荧光标记的二抗检测特异IgM和IgG。IFAT具有特异、敏感、快速、重复性好等优点，与ELISA对猪弓形虫病的IgG抗体检测结果一致性较好[3]，但判定结果易带主观性。

四、酶联免疫吸附试验[4]

ELISA是当前诊断弓形虫感染应用最广的技术。利用酶的催化作用和底物放大的反应原理，提高了特异性抗原抗体免疫反应检测的敏感性。

1.葡萄球菌A蛋白ELISA

陈子庆等以弓形虫虫体抗原包被聚苯乙烯酶标板，建立了葡萄球菌A蛋白ELISA （SPA- ELISA）检测抗弓形虫抗体的方法。经与弓形虫可溶性抗原包被结果对照，两种方法无显著性差异。

2.斑点ELISA

斑点ELISA（Dot-ELISA）比常规ELISA更灵敏、简便，取材量少，因而迅速被推广应用。国外1986年已应用于弓形虫病诊断。但其也有不足，主要是结果判定比较主观，特异性不够高等。

3.亲和素-生物素-ELISA

郭志刚等用亲和素-生物素-ELISA（ABC- ELISA）对弓形虫试验感染不同时期的猪血清特异IgG进行检测。

4.PCR-ELISA

李健等将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交，再通过酶免显色反应测出OD值，以判断弓形虫感染情况。

五、免疫胶体金技术

目前，利用胶体金标记技术诊断弓形虫病的方法有免疫金银染色法（IGSS）、快速斑点免疫金渗滤法（DIGFA）和胶体金免疫层析法（GICA）。

1.免疫金银染色法

免疫金银染色法（IGSS）是一种较新的免疫诊断方法，其原理是胶体金探针与相应抗原或抗体形成抗原抗体复合物，经过银显影处理后，使金颗粒周围吸附大量银颗粒，光镜下即可见褐色金银颗粒。由于银染色对金颗粒的信号有放大作用，所以敏感性很高。

2.快速斑点免疫金渗滤法

快速斑点免疫金渗滤法（DIGFA）是应用微孔膜[硝酸纤维素（NC）膜]作载体的免疫检测技术，先将抗原或抗体点于NC膜上，封闭后加待测样品，洗涤后用胶体金探针检测相应的抗原或抗体，通过金颗粒放大免疫反应系统，使反应结果在固相载体NC膜上显示出来。并将其装入充满吸水材料的渗滤装置（塑料小盒）中，小盒分为底和盖，盖上一般有直径约0.5cm～0.8 cm的小孔。研究表明，此法比间接过氧化物酶法更敏感。

3.胶体金免疫层析法

免疫层析技术是近年来迅速发展的一种将胶体金标记技术、免疫检测技术、层析分析技术、单克隆抗体技术和新材料技术等多种方法有机结合在一起的一种新型诊断技术。目前应用范围也日益广大。

六、展望

近几年通过大量的试验研究，弓形虫病诊断研究方面已取得较大进展，一些研究成果已经或正在对弓形虫病的防控产生积极影响，但是今后应为检测提供可靠的诊断抗原或抗体，加快解决试剂的标准化问题，建立综合的检测系统来弥补单一检测系统的不足。

参考文献：

[1]赵恒梅，徐克继，杨慧珍.免疫酶染色试验诊断弓形虫病的研究[J]中国共患病杂志，1991，7（5）：13-14

[2]陈义民，李观娣，李宝琛.实验弓形虫病的间接血凝诊断试验[J]中国兽医科技，1980，（4）：10-15

[3]张述义，魏梅雄，张月丽，等.直接凝集试验（DAT）检测弓形虫 IgG抗体的研究[J]中国共患病杂志，1991，7（5）：10-12

[4]张德林，李学瑞，杜重波.用弓形虫代谢分泌抗原制备间接血诊断试剂的研究[J]中国兽医科技，2003，33（9）：15-18