甘草甲醇提取物FM100对小鼠溃疡性结肠炎的药效学研究

作者：吴国泰，任远，马骏，王志旺，邵晶，姜晓霞

【摘要】 目的 观察甘草甲醇提取物FM100对小鼠溃疡性结肠炎的作用。方法 用三硝基苯磺酸钠（TNBS）和乙醇制造小鼠溃疡性结肠炎模型，空白对照组和TNBS模型组灌胃等容量生理盐水，阳性对照组灌胃地塞米松0.2 mg/kg，FM100大、中、小剂量组分别灌胃FM100 300 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg,连续灌胃14 d。观察小鼠体质量变化、腹泻、结肠黏膜组织形态学、脾脏指数及髓过氧化物酶(MPO)活力等指标。结果 甘草甲醇提取物FM100可不同程度地改善TNBS/乙醇所致溃疡性结肠炎小鼠体质量下降和腹泻症状，明显降低结肠黏膜粘连及其溃疡分值和脾脏指数，但可增高MPO活力（P<0.05或P<0.01）。结论 甘草甲醇提取物FM100对小鼠溃疡性结肠炎有较好的改善作用，能减轻结肠局部的病理性损伤。

【关键词】 甘草甲醇提取物FM100；溃疡性结肠炎；小鼠

Abstract:Objective To investigate the effects of methanol extract of Glycyrrhizae FM100 on ulcerative colitis (UC) mice. Methods A mouse model of UC were made by TNBS and alcohol. The blank control group and model group were given NS, the positive group was taken 0.2 mg/kg Dexamethasone, FM100 large, middle, small groups were taken 300 mg/kg, 200 mg/kg, 100 mg/kg FM100 separately for 14 days. Observed body weight, diarrhea, histomorphology of colon mucosa, spleen index and myeloperoxidase (MPO) activity. Results Methanol extract of Glycyrrhizae FM100 could improve in different degrees the decreased body weight and diarrhea symptom, decreased the colon mucosa adhesion, ulcer grade and spleen index, increased the MPO activity. Conclusion FM100 can improve the UC of mice, alleviated the pathologic injure in partial colon.

Key words: methanol extract of Glycyrrhizae FM100; UC; mouse

溃疡性结肠炎（uicerative colitis，UC）是以腹泻、黏液脓血便、腹痛和里急后重为主要症状，以结肠黏膜慢性炎症和溃疡为病理特点的一种消化道疾病，近年来发病率呈上升的趋势，临床缺乏有效的治疗手段和药物。有文献报道甘草甲醇提取物FM100具有抗消化性溃疡的作用[1],但对UC有无疗效尚未见报道。本实验研究观察了甘草甲醇提取物FM100（含甘草甜素较少的精制部分）对小鼠溃疡性结肠炎的治疗作用，为临床用药提供实验依据。

1 实验材料

1.1药品与试剂

甘草甲醇提取物FM100，参考文献[2]方法制备；地塞米松片，国药准字H33020822，浙江仙琼制药有限公司生产，批号：040904；三硝基苯磺酸钠（TNBS），天津市福晨化学试剂生产厂生产，批号：20041112；髓过氧化物酶（MPO）试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号：20050428。

1.2 实验仪器

UV-9100型紫外分光光度计，北京瑞利分析仪器公司生产；BS110sartorius电子天平，北京赛多里斯有限公司生产；HH.S11-2型水浴锅，北京长安科学仪器厂生产。

1.3 实验动物

昆明种小鼠，体质量（20±2）g，雌雄兼用，购自兰州生物制品研究所，合格证号：医动用字14-001。

2 方法及结果

2.1造模和给药[3,4]

小鼠按性别、体质量随机分为空白对照组，TNBS模型组，阳性对照组，甘草甲醇提取物FM100大、中、小剂量组。空白对照组和TNBS模型组灌胃等容量生理盐水，阳性对照组灌胃地塞米松0.2 mg/kg，FM100大、中、小剂量组分别灌胃FM100300 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg。各组每天给药1次，连续给药14 d。

第1 d给药后1 h，乙醚轻度麻醉小鼠，用直径2 mm灌肠器（蘸取少量液体石蜡）从插入结肠约4 cm处灌肠造模。其中空白对照组灌肠 NS 0.1 mL/只；TNBS模型组，阳性对照组，FM100大、中、小剂量组灌肠2 % TNBS（用50 %乙醇作溶媒）0.1 mL/只。第7 d，空白对照组灌肠NS 0.1 mL/只，其余各组灌肠1 % TNBS（用50 %乙醇作溶媒）0.1 mL/只。

2.2统计学分析

采用SPSS10.0统计软件包分析，实验数据用(±s)表示,组间比较采用t检验。

2.3观察指标及结果

2.3.1FM100对TNBS所致UC小鼠体质量的影响

分别于造模前及造模后隔日称小鼠体质量，观察各组小鼠体质量变化，结果见表1。表1FM100对TNBS所致UC小鼠体质量的影响（略）注：与空白对照组比较#P<0.05, ##P<0.01；与TNBS模型组比较*P<0.05, **P<0.01

结果显示，TNBS和乙醇灌肠形成溃疡性结肠炎后小鼠体质量增长缓慢,随着病程的延长，体质量逐渐下降（P<0.05或P<0.01）；阳性对照组和FM100大、中、小剂量组(除第12 d FM100小剂量组)小鼠体质量的增长明显快于TNBS模型组（P<0.05或P<0.01）；但阳性对照组,FM100大、中、小剂量组组间小鼠体质量的变化均无统计意义(P>0.05)。

2.3.2FM100对TNBS所致UC小鼠腹泻和粪便隐血的影响

第7 d，各组灌肠4 h后，参照文献[5]自拟以下标准对粪便进行分值评价：0分，正常粪便；1分，软粪便；2分，无定形软便；3分，水样或脓样便。结果见表2。表2FM100对TNBS所致UC小鼠腹泻的影响(略) 注：与空白对照组比较#P<0.01；与TNBS模型组比较*P<0.05, **P<0.01

结果显示，除空白对照组外，各组小鼠灌肠后4 h时出现明显的腹泻症状（P<0.01）,多为软便或无定形粪便,也可见水样或脓血样粪便；按粪便性状评估,阳性对照组和FM100大、小剂量组可明显改善UC小鼠腹泻症状（P<0.05或P<0.01）；但阳性对照组,FM100大、中、小剂量组组间比较均无统计意义。

小鼠灌肠后4 h，采用联苯胺法检测各组小鼠粪便隐血[6]。结果显示，TNBS模型组小鼠粪便隐血反应呈强阳性（深蓝色）,空白对照组隐血呈阴性（浅黄色）,FM100中剂量、小剂量组和阳性对照组个别小鼠粪便隐血呈阳性（蓝色）,但其程度弱于TNBS模型组，表明给药组小鼠结肠出血性损伤明显低于TNBS模型组。

2.3.3 FM100对TNBS所致UC小鼠组织损伤形态学影响

造模第14 d，禁食（不禁水）12 h后处死小鼠，取上约4 cm的一段结肠，放大镜下观察结肠黏膜损伤情况，参照表3标准进行评分，计算各组总分值（总分值=腹腔粘连分值+结肠溃疡及炎症分值）；然后测量结肠自然长度及负荷长度（负荷重量2 g）,用负荷长度增加值比自然长度的百分比表示结肠弹性。结果见表4。表3腹腔粘连及结肠溃疡评分标准分值腹腔粘连情况（略）表4 FM100对TNBS所致UC小鼠结肠组织形态学的影响(略)注：与空白对照组比较#P<0.05, ##P<0.01；与TNBS模型组比较*P<0.05, **P<0.01

结果显示，TNBS诱发溃疡性结肠炎后,小鼠结肠粘连,肠壁红肿增厚,弹性下降,有溃疡、出血点和穿孔等现象，粘连及溃疡评分分值明显增高（P<0.01），结肠弹性明显下降（P<0.05）；FM100大、中、小剂量组能明显改善小鼠结肠粘连及溃疡（P<0.05或P<0.01）；FM100大剂量组能明显增强小鼠结肠弹性（P<0.01），FM100中、小剂量组及阳性对照组小鼠结肠弹性具有一定的增强趋势，但无统计意义。阳性对照组,FM100大、中、小剂量组组间小鼠结肠粘连及溃疡评价分值的变化和结肠弹性的增加均无统计意义。

2.3.4 FM100对TNBS所致UC小鼠结肠MPO活力的影响

将2.3.3中观察后的4 cm结肠称重，按1∶19加匀浆介质制成5 %的组织匀浆，按试剂盒说明书检测并计算MPO活力。结果见表5。表5FM100对TNBS所致UC小鼠结肠MPO活力和脾脏指数的影响(略)注：与空白对照组比较#P<0.01；与TNBS模型组比较*P<0.05, **P<0.01；与阳性对照组比较P<0.05,P<0.01；与FM100大剂量组比较P<0.05

2.3.5 FM100对TNBS所致UC小鼠脾脏指数的影响

造模14 d处死小鼠，分离脾脏，滤纸吸去血液并称重，计算脾脏指数（脾重/体质量×100 %）。结果见表5。

结果显示，造模组小鼠脾脏明显增大（P<0.01）；FM100大、小剂量及阳性对照药明显降低小鼠脾脏指数（P<0.05或P<0.01），但是，阳性对照组,FM100大、小剂量组组间小鼠脾脏指数的变化均无统计意义；阳性对照药显著降低MPO活力（P<0.01），FM100中、小剂量增高MPO活力（P<0.05或P<0.01），且呈剂量依赖性。

3讨论

本实验采用的TNBS/乙醇诱发小鼠实验性UC模型与临床上溃疡性结肠炎的病理改变极为相似，乙醇破坏了肠道黏膜屏障,TNBS为一种半抗原,与组织蛋白结合为一种抗原物质,使T淋巴细胞致敏,诱发自身免疫反应,从而导致肠道炎症的发生。造模后动物出现了体质量减轻、腹泻、便血等症状和腹腔粘连、结肠溃疡出血甚至穿孔等病理变化。连续给药14 d后结肠黏膜充血水肿、出血和溃疡的发生明显减轻,表明FM100具有对抗TNBS所致的炎性病理损害的作用；给药组动物肠管弹性升高，表明FM100对炎性渗出有抑制作用，给药组动物腹泻、便血等较轻,且体质量增加,表明FM100能改善UC小鼠的病理状态。MPO主要存在于中性粒细胞内嗜苯胺盐颗粒中,其局部活力的增高可以反映中性粒细胞浸润的程度，急性炎症期出现的炎性细胞浸润以中性粒细胞为主，TNBS/乙醇诱发小鼠溃疡性结肠炎的急性期,结肠组织MPO活力增高,地塞米松对照组MPO含量显著低于模型对照组,表明地塞米松具有对抗炎性细胞浸润的作用，但是FM100各给药组MPO活力明显增高，我们认为，这可能与甘草甲醇提取物FM100所含的化学成分有关，甘草甲醇提取物FM100是含甘草甜素较少的甲醇浸膏的精制组分，富集各种黄酮、异黄酮类化合物，其抗溃疡作用的主要成分有甘草苷、甘草素、异甘草苷等[1]，由此，我们推论，甘草所含的黄酮类及异黄酮类化合物不一定具有对抗炎性细胞浸润的作用，其具体作用机理还有待于进一步实验研究。

【参考文献】

[1]贾国惠,贾世山.甘草中黄酮的药理作用研究进展[J].中国药学杂志,1998,33（9）:513-516.

[2]肖崇厚.中药化学[M].上海：上海科学技术出版社,1997：413-414.

[3]张晓峰.中药治疗溃疡性结肠炎实验研究中动物模型的应用[J].河北医学,2001,7(2):185-187.

[4]Charles O Elson, Kenneth W Beagley, Almaz T Sharmanove， et al. HaPten Induced Model of Murine Inflam|matory Bowel Disease[J].The Journal of Immunology,1996，157:2174-2185.

[5]刘保林,戴媛媛,唐宁,等.吴茱萸氯仿提取物对小鼠溃疡性结肠炎的药效学研究[J].中药药理与临床,2003,19(6):16-17.

[6]叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M].第2版.南京:东南大学出版社,1997:142-143.