马尾松松针的有机溶剂提取的研究

摘要：采用有机溶剂法提取马尾松中的总黄酮，研究了溶剂种类、提取时间、料液比单因素及对应因素的正交试验对马尾松松针总黄酮提取的影响。结果表明：单因素试验中，最优提取条件为70%乙醇溶剂、提取时间1.5h、料液比1：40；正交试验中，所研究的因素对此马尾松松针总黄酮的提取影响不大。

关键词：马尾松；提取；抗氧化性

马尾松属松科植物，分布广泛、天然蓄积量大，是我国亚热带地区分布最广、资源最大的树种。松针是松属植物的代表性药用部位，据《本草纲目》记载：“久服松针，令人不老，轻身益气，绝谷不饥不渴”，并说松“主治风湿症，生毛发，安五脏、守申，不饥延年，去风痛脚痹，杀米虫，历节岗痛，风牙肿痛，阴囊湿痒”。通过现代技术对松针的研究发现，松针提取物富含生物黄酮类物质，具有很高的营养和药用价值。目前，常用的植物黄酮的提取方法主要有：超声波浸提法、微波浸提法、溶剂回流提取、超临界CO2提取、酶法提取等。本研究旨在采用简单的有机溶剂回流探索马尾松松针总黄酮的提取，在一定意义上为松针及黄酮利用价值的进一步研究提供了试验依据。

1.材料与方法

1.1材料与仪器

马尾松采自湖南永州的小山丘；芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氢氧化钠、1，1-二苯基-2-苦基肼、邻二氮菲、硫酸亚铁、EDTA、双氧水、氮蓝四唑、核黄素、甲硫氨酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾，氯化钠、氯化钾、电子分析天平、SHZ-D（Ⅲ）循环水式多用真空泵；RE-5298A旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅、UV-1800紫外可见分光光度计。

1.2试验方法

1.2.1提取物的制备。取新鲜松针5g粉碎置于圆底烧瓶中，加入一定量的溶剂，水浴加热回流提取，减压浓缩至20mL，得马尾松提取物。提取工艺的选取：采用有机溶剂回流提取松针，进行了溶剂种类、提取时间、料液比单因素试验；正交试验。

1.2.2总黄酮含量、提取率的测定。其基本原理为：黄酮类化合物与A1（NO3）3和NANO2在碱性条件下进行络合显色，以芦丁为标准品，在510nm处测定吸光度制作标准曲线，通过外标法确定总黄酮含量。①芦丁对照品标准溶液。准确称取5.00mg对照品，以蒸馏水为溶剂，定容至25mL，浓度为0.20mg/mL。②芦丁对照品标准曲线的绘制。精确吸取芦丁标准应用溶液0.00mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL分别置于10mL容量瓶中。依次加入0.3mL5%亚硝酸钠溶液，摇匀后静置6分钟，0.3mL10%硝酸铝溶液，摇匀后静置6分钟，4mL的4%氢氧化钠溶液，以蒸馏水定容至10mL，摇匀后放置15分钟，510nm处测定吸光度值。③提取物总黄酮含量的测定。提取液过滤，取100uL滤液置于1.5mLEP管中，加蒸馏水至1mL，从中取出800uL，移至10mL的容量瓶中，以蒸馏水定容到10mL。按照标准曲线绘制的方法进行测定A。

2.结果与讨论

2.1芦丁的标准曲线

通过上述的检测方法，芦丁标准品在0-0.06mg/mL范围在波长510nm下的吸光度有良好的相关性。线性方程为：y=12.77x+0.012；R2=0.994。

2.2单因素试验

2.2.1溶剂种类。总黄酮提取率，在料液比为1：30，提取时间为1h条件下，选取了70%乙醇、60%丙酮、乙酸乙酯三种溶剂对松针进行提取。由图2可知，70%乙醇的提取效果最好。

2.2.2提取时间。料液比1：30，根据前面的试验，选取70%乙醇为提取溶剂，对提取时间因素进行研究，从图3中可得出，提取时间为1.5h时，黄酮提取率最高。

2.2.3料液比。通过上述试验探索，选取提取溶剂70%乙醇、提取时间1.5h的条件对料液比因素进行研究。从图4的试验结果表明：1：40的料液比下，总黄酮的提取率最高；1：30-1：60的料液比对总黄酮提取率影响不大。

2.3溶剂回流正交试验

根据以上单因素试验结果，分别选择提取时间、料液比、回流温度、乙醇含量四因素，按照表1设计L9（34）正交表，确定了9组不同组合试验，从中筛选最佳的工艺条件。见表1。

由正交试验结果分析表可知，各因素对松针中总黄酮得率影响的程度依次为回流温度>料液比>提取时间（C>B>A），提取时间、料液比、回流温度对总黄酮提取率的影响为没有显著性差异因素（P>0.05），即回流温度、料液比、提取时间3个影响因素对乙醇溶剂提取松针总黄酮的得率影响不显著，故只需要选取合适的因素范围，提取条件简单、不苛刻。同时，在所选取的研究条件下，最佳提取工艺为A2、B2、c2，即提取时间为1.5小时，回流温度为85%，料液比为1：40。

3.结论

（1）对于总黄酮提取率单因素试验研究中：最优提取条件70%乙醇溶剂、提取时间1.5小时、料液比1：40。（2）正交试验中，最优工艺条件：提取时间为1.5小时，回流温度为85%，料液比为1：40。松针总黄酮提取工艺受本研究中的3个影响因素不明显。