复方当归提取物对皮肤抗氧化作用实验研究

[摘要]目的：观察含复方当归提取物的护肤品对皮肤的抗氧化作用。 方法：测定含复方当归提取物护肤品对D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤超氧化物歧化酶（SOD）、羟脯氨酸（Hyp）及皮肤含水量的影响。 结果：含复方当归提取物护肤品具有使D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤SOD、Hyp含量增高的作用(P

[关键词]中药化妆品；超氧化物歧化酶；羟脯氨酸；皮肤含水量；D-半乳糖

[中图分类号]R284.2[文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2007）11-1574-02

An experimental research on the function of anti-oxidation of skin by cosmetics with the compound extract of Danggui

LU Qi，ZHAO Hui，MU Yang

(Captial of University Medicine, Beijing 100054, China)

Abstract:ObjectiveResearching the function of anti-oxidation of skin by cosmetics with the compound extract of Dang Gui.MethodsTo measure the effect by cosmetics with the compound extract of Dang Gui to the contents both of SOD, Hyp and the water content of skin of mouse skin with senilitied model of galactose-D.ResultsIt is evidently less than the normal ( P

Key words:cosmetics with Chinese herb;SOD;Hyp;water content of skin;galactose-D

中草药因其独特机理和美容效果已被广泛应用于护肤类化妆品中，而对于发现和评价中草药护肤品的有用性与安全性，一直是美容应用技术理论与技术研发所面临的热点课题。在前期动物实验研究已表明含复方当归提取物水剂型护肤品具有增加小鼠表皮含水量和提高小鼠皮肤细胞SOD活性；人体试验研究显示它具有改善人体皮肤颜色，增加皮肤白晰、透明效果的基础上[1]，本文观察复方当归提取物制备的乳液、成型面膜2个剂型，清洁、按摩、贴敷、滋润4种护肤品共同使用对小鼠D-半乳糖衰老模型皮肤的影响，探讨复方当归提取物系列护肤品（简称DGCC）对人体皮肤外观改善与抗氧化作用的关系。

1材料和方法

1.1实验动物：选用ICR 3月龄小鼠30只（首都医科大学实验动物中心提供）。

1.2实验仪器：752N型紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），DY89-1型电动玻璃匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司），FA/JA型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。

1.3主要试剂：D-半乳糖（上海试剂二厂），超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（南京建成生物科技公司），羟脯氨酸（Hyp）试剂盒（南京建成生物科技公司），考马斯亮蓝蛋白测试盒（南京建成生物科技公司）。

1.4 受试药物：复方当归提取物由北京中医药大学制剂中心制备。DGCC为清洁乳、按摩霜、成型面膜及滋润霜，由广州雅倩化妆品公司北京研究中心监制。

1.5实验方法

1.5.1动物分组、造模及给药：随机分为3组，每组10只。D-半乳糖组：每天给小鼠颈背部皮下注射12.5% D-半乳糖（1 000mg/kg）；正常对照组：每天小鼠颈背部皮下注射等容量生理盐水；DGCC组：每天小鼠颈背部皮下注射12.5%的D-半乳糖（1 000mg/kg），并用剃毛器剃去背部被毛，暴露大小约2cm×3cm的皮肤，用DGCC清洁乳涂抹和清水清洗，再用DGCC面膜敷贴于暴露部位30min，然后用DGCC按摩膏按摩1min，最后外涂DGCC滋润霜。

1.5.2衰老小鼠皮肤SOD活力和皮肤总羟脯氨酸含量测定：各组小鼠均于42天后处死，取背部脱毛部位皮肤组织块，经预冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪及结缔组织，滤纸拭干，取0.5g置10ml烧杯，加预冷生理盐水，眼科剪剪碎组织块后，倒入匀浆管中，加预冷生理盐水至5ml，用电动玻璃匀浆机制成10%组织匀浆（在冰水中进行），然后反复冻融3次，使其完全破碎，细胞内容物完全游离液相中。制备组织匀浆采用SOD试剂盒和羟脯氨酸试剂盒按说明书方法测定。

1.5.3衰老小鼠皮肤含水量测定：用打孔器取下脱毛后皮肤组织0.5g，精密称皮肤湿重，放置80℃干燥箱中48h，称皮肤干重。并按下列公式测量含水百分率：

1.6统计学方法：本研究中所有资料均采用Spss for window10.0统计软件进行分析，行方差分析及 χ2检验。

2结果

2.1 DGCC对衰老小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸含量的影响：见表1。

结果显示：与正常组比较，D-半乳糖组小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸含量明显降低；与D-半乳糖组相比，DGCC组小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸含量明显增高，与正常组相比没有明显差别。

2.2 DGCC对衰老小鼠皮肤含水量的影响：见表2。

结果显示：与正常组比较，D-半乳糖组小鼠皮肤含水量明显降低。DGCC组小鼠皮肤含水量有升高趋势，但与D-半乳糖组对比没有统计学意义。

3讨论

皮肤衰老的确切机制尚未完全阐明，目前认为皮肤衰老损伤重要原因是自由基累积[2]，自由基累积可使生物膜中不饱和脂类发生过氧化，形成过氧化脂质，其终产物MDA是强交联剂，与蛋白质、核酸或脂类结成难溶性物质，使生物膜硬化导致通透性降低，影响细胞物质交换，继而使之破裂、死亡。在正常生理条件下，机体抗氧化防护机制与SOD能有效清除自由基，对抗自由基损害。随着年龄增长，体内抗氧化酶类减少，机体抗氧化防护功能减退，故测定皮肤抗氧化剂活性可作为判定受试动物皮肤衰老程度的指标。胶原蛋白是动物皮肤组织的组成成分，羟脯氨酸为胶原蛋白特有的氨基酸，测定皮肤羟脯氨酸含量可反映皮肤中胶原蛋白含量。在人体老化的过程中，成纤维细胞氧气供应不足，直接影响脯氨酸羟化产生羟脯氨酸，使胶原蛋白合成减少，胶原纤维形成不良，因此出现皮肤弹性降低和皱纹增加。故测定皮肤羟脯氨酸含量可作为判定受试动物衰老程度的指标。由于老龄动物饲养周期长，个体差异大，不易获得，本实验采用Ｄ-半乳糖所致的小鼠衰老模型。Ｄ-半乳糖拟衰老模型原理为Ｄ-半乳糖在体内引发非酶糖基化反应，损伤生物大分子正常生理功能，同时由反应产物晚期糖基化终产物(AGEs)诱导自由基损伤，进而放大非酶糖基化效应而致[3-4]。本实验结果证实该模型亦可导致小鼠皮肤明显衰老。

实验结果显示：Ｄ-半乳糖衰老模型小鼠皮肤SOD、Hyp明显低于正常组，皮肤水含量降低表明，模型小鼠皮肤呈现渐进性老化，角质层变薄，皮肤水合能力降低，水分丧失增加。DGCC共同使用42天后，与Ｄ-半乳糖组相比，DGCC组SOD活性和Hyp含量具有显著性差异。可显著增强D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤SOD活性(P

综上，DGCC共同使用可通过提高抗氧化酶的活性，刺激成纤维细胞活力，增强胶原蛋白合成能力等，延缓皮肤衰老过程，发挥抗氧化作用。DGCC对衰老动物某些指标具有良好改善作用，与中医美容所强调的容貌肌肤与气血盛衰的密切关系相一致。DGCC的组方及基质在皮肤抗氧化过程中哪些成分起主要作用，抑或是各成分间协同作用的结果，有待进一步深入研究。

（致谢：感谢首都医科大学中医药学院中药系陈忻教授对本文实验结果的分析指导和帮助！）

[参考文献]

[1]陆 绮. 含“中药活肤油”护肤品研制、实验及试用[J].中国化妆品,2000,11(6)：22-24.

[2]邵 翔,张宗玉.胶原与老化[J].老年学杂志，1992,12(4):246-248.

[3]Song X,Baomm,Lidd,et al.Adancd glycatiominD galactose induced mouse aging model[J].Mech Aging Dev,1999,108(3):239-251.

[4]WangZ,LiDD,LiangYY,et al.Activation of astrocytes by advanced glycation end products: cytokines induction end products:cytokines induction and nitric oxide release[J].Acta Pharmacol Sin,2002,23(11):974-980.

[收稿日期]2007-06-06[修回日期]2007-09-30

注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”