HPLC法测定吡格列酮二甲双胍片中盐酸吡格列酮的有关物质

摘　要：目的：建立吡格列酮二甲双胍片中盐酸吡格列酮有关物质的高效液相色谱方法。 方法：采用为依利特C18色谱柱（250×4.6mm, 5μm）；以水-乙腈-乙酸=550：450：1.2（用氨试液调节pH值至5.8）作为流动相；检测波长为225nm。结果：三批样品（BE1101、BE1102、BE1103）盐酸吡格列酮单个杂质（%）分别为0.15、0.14、0.14；有关物质（%）分别为0.22、0.21、0.21。结论：采用HPLC法测定盐酸吡格列酮有关物质方法简便，结果准确可靠，二甲双胍无干扰。

关键词：吡格列酮二甲双胍片　盐酸吡格列酮　有关物质　高效液相色谱方法

盐酸吡格列酮(pioglitazone HC1)／盐酸二甲双胍(meformin HC1)片是日本武田制药株式会社研制开发的一种新型用于治疗Ⅱ型糖尿病的复方口服制剂。并于2005年8月获得FDA批准上市，商品名为ACTOplus。本文对吡格列酮二甲双胍片进行了研究，本品规格为每片含盐酸二甲双胍500mg，吡格列酮15mg。对于盐酸吡格列酮有关物质的测定，在制剂中盐酸吡格列酮含量仅为盐酸二甲双胍的3.3%，其有关物质测定干扰极大，试验难度较大。经过反复试验，利用起在乙腈中溶解度的显著差异，消除了盐酸二甲双胍的干扰，成功的对盐酸吡格列酮有关物质进行了测定。

一、仪器与试剂

Agilent 1100高效液相色谱仪。

吡格列酮二甲双胍片（BE1101、BE1102、BE1103）（由杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司提供）；乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；乙酸为分析纯；氨水为分析纯；水为纯化水。

二、方法与结果

1.色谱条件

色谱柱：依利特C18，250×4.6mm, 5μm；以水-乙腈-醋酸=550：450：1.2（用氨试液调节pH值至5.8）作为流动相；检测波长为225nm。

2.测定方法

避光操作。取本品细粉适量（约相当于吡格列酮5mg），置10ml量瓶中，精密加入乙腈10ml，密塞，超声使盐酸吡格列酮溶解，滤过作为供试品溶液；精密量取上述溶液1 ml于100ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl注入液相色谱仪。

3.专属性试验

取本品（约相当于吡格列酮 5mg）分别用6mol/L盐酸2ml水浴加热4.5小时，6 mol/L氢氧化钠2ml水浴加热5分钟， 30％过氧化氢2ml水浴加热1小时，破坏后，中和，至10ml的量瓶，加乙腈稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5 ml于10ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取光照（4500±500LX）4天、高温（170℃烘烤40分钟）破坏样品按有关物质检查法各进样10μl。结果能分离酸、碱、氧化、光照、高温破坏的降解物，能有效地控制药品中盐酸吡格列酮质量。

4.最低检出量

通过逐级降低浓度，进样测定，以信噪比S/N>3计，最低检出浓度为20ng/ml，最低检出量为0.4ng。

5.辅料及盐酸二甲双胍的干扰

取处方量的除盐酸吡格列酮之外的空白样品，同法操作，结果出现的空白样品峰与主峰能完全分离，说明空白样品对有关物质的检测无干扰。

6.溶液稳定性

取样品按照2.2.2方法检测,分别在0、2、4、6、8、10、12、14小时进样检测，比较检测结果，结果样品在水中13小时内稳定，有关物质RSD3.21%。

7.样品的检查

三批样品（BE1101、BE1102、BE1103）按上述色谱系统测定盐酸吡格列酮有关物质，结果单个杂质（%）分别为0.021、0.20、0.20；有关物质（%）分别为0.28、0.27、0.27。

三、讨论

本文利用起在乙腈中溶解度的显著差异，消除了盐酸二甲双胍的干扰，成功的对相对于盐酸二甲双胍含量只有3.3%的盐酸吡格列酮有关物质进行了测定。提供了在复方制剂中低含量组分有关物质测定的方法研究参考。