紫外分光光度法测定骨伤康复外洗颗粒中大黄总蒽醌含量

[摘要] 目的:提高骨伤康复外洗颗粒的质量标准。方法:采用紫外分光光度法在509 nm波长处测定大黄总蒽醌的含量。结果:大黄素浓度在2.88～28.80 μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均加样回收率为99.30%,RSD=1.91%(n=5)。结论:本方法专属性强,快速,准确,适用于该制剂的质量控制。

[关键词] 大黄总蒽醌;含量测定;分光光度法;骨伤康复外洗颗粒

[中图分类号] R927.2[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210(2010)06(c)-061-03

Content determination of total anthraquinone in Gushangkangfu Wash-out Granules by UV spectrophotometry

KE Yingchuan, WU Wenkang

(The Traditional Chinese Medical Hospital of DongGuan, DongGuan 523106, China)

[Abstract] Objective: To improve the quality standards of Gushangkangfu Wash-out Granules. Methods: The determination of total anthraquinone by VU spectrophotometry at 509 nm. Results: The calibration cure of the absorbency (A) was linear with the concentration (C) of emodin in the range of 2.88-28.80 μg/mg (r=0.999 3), the average recovery was 99.30% with a RSD of 1.91% (n=5). Conclusions: The method was specific, fast, accurate. It could be used as an quality control method of Gushangkangfu Wash-out Granules.

[Key words] Total anthraquinone; Content determination; UV spectrophotometry; Gushangkangfu Wash-out Granules

骨伤康复外洗颗粒主要有大黄、黄柏、泽兰、侧柏叶、制马钱子等药材组成,临床主要用于伤筋伤骨,关节脱位中后期,筋骨不利,关节活动功能障碍等疾病,疗效显著。目前该制剂质量标准已建立薄层色谱法鉴别,为更有效地控制该制剂的质量,保证临床用药效果,对其进行含量测定研究。利用大黄蒽醌类化合物能与醋酸镁反应显色的原理,以显色剂为空白,采用紫外分光光度法,不水解、不分离、直接测定制剂中大黄总蒽醌的含量[1],结果令人满意,现报道如下:

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV-3010紫外分光光度计(日立公司);FA1104N型电子分析天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);TDL-50B型台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 试药

大黄素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:710756-200110);骨伤康复外洗颗粒(本院);阴性对照物(自备);乙醇,醋酸镁等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 取大黄素3.6 mg,精密称定,置25 ml量瓶中,加乙醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 取骨伤康复外洗颗粒适量,研细,称取1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加乙醇20 ml,超声处理20 min,放置1 min,将上清液移至50 ml量瓶中,再反复提取3次,每次用乙醇约10 ml,将残渣用乙醇洗涤至乙醇溶液为无色,洗液与提取液合并置量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,滤过(或离心),取续滤液(或上清液)作为供试品溶液。

2.1.3 阴性对照溶液的制备按全方比例称取除大黄以外其他药材,按处方制备工艺制得阴性样品,按“2.1.2”项下方法制得缺大黄阴性溶液。

2.2 测定波长的选择

精密吸取大黄素对照品溶液3 ml,置25 ml量瓶中,加乙醇2 ml,加1%醋酸镁乙醇溶液,稀释至刻度,摇匀,放置,显色3 min,以相应的试液为空白,在400～700 nm范围内扫描测定吸收光谱,结果大黄素对照品溶液显色后在509 nm波长处有最大吸收。笔者选择509 nm为检测波长。

2.3 标准曲线的绘制

精密吸取对照品溶液(0.144 mg/ml)0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,分别置25 ml量瓶中,加乙醇2 ml,加1%醋酸镁乙醇溶液稀释至刻度,摇匀,放置,显色30 min,分别于509 nm处测定吸光度,记录数据。结果以大黄素对照品浓度(μg/ml)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,并进行线性回归,得到回归方程:C=0.034 6A+0.050 4(r=0.999 3),结果表明,大黄素在2.88～28.80 μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.4 阴性干扰试验

分别精密吸取大黄素对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液,各3 ml,依照上述条件方法进行测定。结果大黄素对照品溶液在509 nm波长处有最大吸收,供试品溶液在相同的波长处有较大吸收,阴性对照品溶液在相同波长处无干扰峰。见图1。

图 1 紫外吸收光谱图

(A.对照溶液;B.供试品溶液;C.阴性对照溶液)

Tab.1 UV spectrophotometry

(A.Reference substance; B.Sample; C.Negative sample)

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液(0.144 mg/ml)3 ml,依法操作,连续测定6次,记录其吸光度,计算RSD值,结果对照品的吸光度RSD

2.6 稳定性试验

取同一份供试品溶液(批号:20090922)分别置0、1、2、3、4、6 h后,精密吸取供试品溶液3 ml,依法测定其吸光度,计算含量,并计算RSD值,结果大黄总蒽醌含量的RSD值为1.81%,表明样品溶液在6 h内基本稳定。

2.7重现性试验

取同一批(批号:20090922)骨伤康复外洗颗粒样品5份,每份约1 g,精密称定,依“2.1.2”项下方法制成供试品溶液,分别吸取3 ml,依法操作,测定其吸光度,计算含量及其RSD值,结果大黄总蒽醌平均含量为5.249 6 mg/g,RSD值为0.62%,表明该法重现性良好。

2.8 回收率试验

取同一批(批号:20090922)已知含量的骨伤康复外洗颗粒样品5份,每份约0.5 g,精密称定,分别精密加入质量浓度为2.64 mg/ml的对照品溶液1 ml,按“2.1.2”项下方法配制溶液,依法测定其吸光度,计算含量及大黄总蒽醌的回收率,统计出平均值及RSD值。结果大黄总蒽醌的平均回收率为99.30%,RSD值为1.91%,表明该方法准确度良好。结果见表1。

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2.9 样品含量测定

取3份骨伤康复外洗样品,依照“2.1.2”项下方法制成供试品溶液,在509 nm波长处测定其吸光度,代入回归方程,计算含量,结果见表2。

表 2 样品含量测定结果(n=5)

Tab.2 Content determination results of samples (n=5)

3 讨论

大黄所含蒽醌类成分一直被认为是其活性成分,并用于其质量控制及制剂工艺考察。据报道,大黄中蒽醌类成分含量测定的分析方法有高效液相色谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法、毛细管电泳法、胶束荧光法、重量法等。许舜军等[2]采用反相高效液相色谱法测定大黄药材中5种蒽醌类成分的含量;苏彦斌等[3]采用高效液相色谱法测定大败毒胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量;李敏等[4]建立大黄配方颗粒中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量测定方法,其方法简单快捷,能有效地控制大黄配方颗粒的质量。

本研究利用大黄蒽醌类化合物能与醋酸镁反应生成络合物的原理,以显色灵敏而稳定的特点,采用紫外分光光度法,不水解,不分离,直接测定该制剂中大黄总蒽醌的含量。

由于大黄游离蒽醌与结合蒽醌都能溶于乙醇,样品超声提取3次后,再用乙醇洗涤锥形瓶和残渣使洗涤液为无色,可以认为大黄总蒽醌基本提取完全[5]。参考文献[6-8]对制剂大黄配方颗粒总蒽醌含量测定进行方法学研究,并采用紫外分光光度法测定大黄总蒽醌含量。

本含量测定方法对供试品溶液的制备进行了索氏提取法,加热回流法和超声处理三种方法的对比,结果证实超声处理方法可行、安全、节约,3批样品含量测定结果及平均回收率表明本研究方法测定含量准确,重现性好,快速方便,初步制订本品中每克含大黄以大黄总蒽醌计不得少于5.0 mg作为骨伤康复外洗颗粒的含量测定标准。

[参考文献]

[1]刘腊娥,陈铖,陈立新.紫外分光光度法测定肛疾舒洗剂中大黄总蒽醌的含量[J].中国药业,2005,14(3):39-40.

[2]许舜军,李鸿燕.反相高效液相色谱法测定大黄药材中五种蒽醌类成分的含量[J].时珍国医国药,2006,17(7):1201-1202.

[3]苏彦斌,张凤荣.高效液相色谱法测定大败毒胶囊中大黄酸、大黄素和大黄酚的含量[J].中华临床医药杂志,2004,5(18):17-18.

[4]李敏,刘渝.HPLC法测定大黄配方颗粒中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量[J].现代中药研究与实践,2005,19(5):32-34.

[5]刘翠哲,王汝兴,等.测定大黄中总蒽醌含量的分光光度法改进[J].天津中医药,2004,21(4):335-336.

[6]李敏,刘渝.大黄配方颗粒总蒽醌含量测定的方法学研究[J].成都中医药大学学报,2006,29(1):47-50.

[7]刘丽,赵玉江,柳森国.HPLC法测定刺五加注射液中总异嗪皮啶的含量[J].中国现代医生,2007,45(9):52-53.

[8]林冬杰.中药退黄外洗液中大黄酸的含量测定[J].中国当代医药,2009, 16(4):42-43.

(收稿日期:2010-03-15)

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