胃肠间质瘤的免疫组化及基因突变分析

[摘要] 目的探讨胃肠间质瘤的免疫表型及c-kit和血小板源性生长受体α（PDGFRA）基因突变状态。方法应用免疫组化SP法检测110例CIST中Dog-1、CD117、CD34、SMA和S100的表达情况，应用直接测序法检测8例CIST中c-kit及PDCFRA基因的突变状态。结果110例GIST中Dog-1、CD117、CD34、SMA、S100的阳性率分别为92.7%、93.6%、79.1%、44.5%、8.2%。8例CIST中c-kit突变率75%，PDCFRA突变率100%。结论免疫组化可区分大部分CIST病例，c-kit及PDCFRA突变检测对于Dog-1、CD117阴性病例有重要的鉴别诊断价值，并对靶向药物的应用有重要意义。

[关键词] 胃肠间质瘤；免疫组化；c-kit；血小板源性生长受体α基因

[中图分类号] R735

[文献标识码] A

[文章编号] 1674-0742（2015）07（b）-0008-02

胃肠间质瘤（gastrointestinal stromal tumors，CISTs）是消化道最常见的间叶源性肿瘤，组织学上由梭形细胞、上皮样细胞、偶或多形性细胞排列成束状或弥漫状，由突变的c-kit或PDGFRA基因驱动，可见于消化道的任何位置。过去，多数CISTs被诊断为平滑肌或神经源性肿瘤，1983年Mazur等首次提出CISTs的概念。目前，CISTs的诊断依赖于结合组织形态学、CD117和DOG1免疫组化检测以及c-kit和PDCFRA基因突变的检测。该研究回顾性分析2013年1月-2015年1月收集的南京中医药大学附属医院的110例CISTs的临床病理特点，并运用免疫组化方法检测Dog-l、CD117、CD34、SMA、Sl00的表达，其中8例包含c-kit、PDGFRA基因突变检测结果，探讨免疫组化结合基因检测对CISTs的诊疗价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集南京中医药大学附属医院白2013年1月-2015年1月经手术或内镜下切除的资料完整、诊断明确的原发性GISTs患者组织标本110例。

1.2 免疫组化检测

所有标本均经10%甲醉固定，常规石蜡包埋，切片。免疫组化采用sP两步法，试剂均购白福州迈新生物技术开发有限公司。参照产品说明书进行实验，常规设置阳性和阴性对照。结果判定：阳性表达部位定位准确，Dog-1、CD117、CD34阳性细胞数平均≥10%为阳性。

1.3 基因突变检测

按照试剂盒（OMEGA，USA）说明提取石蜡组织中的基因组DNA，运用合适的引物PCR（聚合酶链式反应）扩增c-kit基因外显子9、11、13、17和PDCFRA基因外显子12、18。PCR产物经3%琼脂糖凝胶电泳确定后，用ABI 3500测序仪行序列分析。应用SeqScape v2.7软件判断基因突变情况。

2 结果

2.1 临床及病理特征

110例患者中，男56例，女54例。年龄22～89岁，中位年龄59岁。肿瘤发生部位：胃74例（67.3%），小肠2l例（19.1%），结直肠6例（5.5%），食管6例（5.5%），胃肠外（腹膜后、盆腔）3例（2.7%）。根据文献将肿瘤行危险度分级：极低组47例（42.7%），低组25例（22.7%），中等组10例（9.1%），高组28例（25.5%）。肿块最大直径范围0.3～20cm，平均直径4.6cm。110例患者中梭形细胞型92例（83.6%），上皮样型7例（6.4%），混合细胞型11例（10%）。

2.2 免疫组化结果

110例中CD117、Dog-l、CD34、SMA、Sl00的阳性例数分别为102（92.7%）、103（93.6%）、87（79.1%）、49（44.5%）、9（8.2%）（表1）。CD117、Dog-1、CD34大部分为弥漫性表达。8例CD117阴性病例中，7例Dog-l阳性。SMA、Sl00大部分为局部或局灶阳性。

2.3 基因检测结果

8例GIST（中等风险1例，高风险7例；胃4例，小肠3例，直肠1例）行c-kit、PDCFRA基因突变检测，总体突变率100%（8/8）。其中c-kit突变率75%，PDGFRA突变率100%（表2）。c-kit突变结果提示4例应用伊马替尼可能有积极疗效，2例可能产生耐药或敏感性降低，2例疗效不明确。PDGFRA检测结果对伊马替尼疗效预测尚需要进一步临床观察。8例GIST中，6例CD117阳性。其中一例CD117、Dog-l双阴性，c-kit第9外显子插入突变。3讨论

GISTs是消化道最常见的间叶源性肿瘤，在中国，估计年发病率约为10-20/100万，其中10%～30%为恶性。本研究中，中高等风险组占34.6%。CIST可发生于消化道任何部位，部分患者可发生于消化道外。该研究中，胃部发生率最高（67.3%），小肠其次（19.1%）。

GISTs具有非定向分化特征，因不同瘤体的组织分化程度存在差异，故其表现出的形态学以及组织学特征也不同。该研究中梭形细胞型占83.6%，上皮样型占6.4%，混合细胞型占10%。在组织学上，GISTs与其他间叶源性肿瘤相似，难以与平滑肌肿瘤、神经纤维瘤等鉴别。免疫组化诊断以往依赖CD117、CD34的表达。近年来，随着研究的进展，DOC1已成为GISTs诊断的重要分子标记物。在该研究的110个病例中，CD117、Dog-1、CD34的阳性率分别为92.7%、93.6%、79.1%，在8例CD117阴性的病例中，7例Dog-1阳性。CD117、Dog-l、CD34三者联合应用可区分出绝大部分的GISTs。

国内学者研究显示，伊马替尼辅助治疗在中高危GIST患者中获益。因此，中高风险病人应常规行c-kit、PDCFRA基因检测以筛选是否适用靶向治疗。该组38例中高风险病例中有21.1%行基因检测，c-kit突变率75%，PDGFRA突变率100%。一例CD117、Dog-1双阴性GIST存在c-kit第9外显子突变。C-kit突变结果提示4例应用靶向药物可能有积极疗效，1例可能产生耐药，1例敏感性降低，2例野生型疗效不明确。PDGFRA突变对伊马替尼疗效预测尚需要临床进一步观察积累。

GISTs的发病机制、生物学行为复杂，临床诊疗存在难点。常规染色联合免疫组化可提高GISTs的诊断准确率，在免疫组化无法确诊的情况下，行c-kit、PDCFRA基因检测有助于GISTs的诊断，并为靶向治疗提供参考。