山桐子幼根离体培养技术研究

摘 要：以山桐子（Idesia polycarpa）的幼根为外植体，采用改良的MS培养基（除钙盐外，其余大量元素用MS的2/3量）附加不同浓度激素组合研究山桐子离体培养技术。结果表明，以改良的MS+TDZ0.02mg・L-1（单位下同）+ NAA0.5+6-BA0.1诱导愈伤组织为最佳；以改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA1.0进行芽的分化与增殖为最佳；以改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.0进行壮苗培养为最佳；在1/2MS+NAA0.8+IBA0.3培养基上生根，最终再生成完整植株。

关键词：山桐子；幼根；组织培养

中图分类号 S79 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）03-04-22-02

山桐子（Idesia polycarpa）是重要的经济林树木，具有很好的开发价值和应用前景。笔者于2013年对山桐子进行了组织培养与快繁研究，以期为促进山桐子的规模化生产提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料 试验于2013年在湖北生态工程职业技术学院植物组织培养室进行，材料选自山桐子种子萌发15d的无菌苗离体幼根。

1.2 外植体消毒 消毒处理前，将选好的幼根切成3～5mm大小，然后用流水冲洗30min。把处理好的幼根在超净工作台上用70%的酒精溶液浸泡30s，无菌水冲洗3～5次，然后转移至0.1%的HgCl2溶液中，浸泡消毒5～8min，最后用无菌水冲洗3～5次，接种到培养基上进行培养。

1.3 愈伤组织的诱导 将消毒好的外植体分别接种到以下8种培养基，每个处理20瓶，重复3次。每3d观察1次，30d统计愈伤组织诱导率。每处理接种10个外植体，3次重复。8种培养基如下：（1）改良的MS（除钙盐外，其余大量元素用MS的2/3量，以下同此）+TDZ0.02mg・L -1（单位下同）+2，4-D0.3；（2）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.5；（3）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D1.0；（4）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.5+6-BA0.1；（5）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.3+6-BA0.3；（6）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.3+6-BA0.1；（7）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.5+6-BA0.1；（8）改良的MS +TDZ0.02+NAA0.5+6-BA0.3。以上培养基含3%食用白糖、0.7%琼脂，pH5.8～6.0。培养温度25～28℃，光照12h・d-1，光强40μmol・m-2・s-1。

1.4 芽的分化与增殖 将生长良好的愈伤组织块切成5mm×5mm大小在无菌条件下转接到下列4种新鲜的分化培养基中，每个处理20瓶，重复3次。每3d观察芽的分化、增殖以及生长状况，并统计芽的分化率和增殖系数，记录生长状况。4种培养基如下：（1）改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA1.5；（2）改良的MS+TDZ0.08+NAA0.1+6-BA1.5；（3）改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA2.0；（4）改良的MS+TDZ0.08+NAA0.1+6-BA2.0。以上培养基均含3%食用白糖、0.7%琼脂，pH5.8～6.0。培养温度25～28℃，光照12h・d-1，光强40μmol・m-2・s-1。

1.5 壮苗培养 将上述培养的芽苗切割分别接种在以下4种培养基上培养。每处理接种20瓶，每瓶接种15苗，培养容器为350mL罐头瓶，每个处理重复3次。接种后20d，从各处理中随机抽取10瓶试管苗测定株高、叶数、单株重量等生理指标。4种培养基如下：（1）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA0.6；（2）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA0.8；（3）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.0；（4）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.2。以上培养基均含3%食用白糖、0.7%琼脂，pH5.8～6.0。培养温度25～28℃，光照12h・d-1，光强40μmol・m-2・s-1。

1.6 生根培养 将高2～3cm的无根芽苗分别接种在以下4种生根培养基上培养。每处理接种20瓶，每个处理重复3次。20d后调查生根数、根长，生根率等指标。4种培养基如下：（1）1/2MS+NAA0.5+IBA1.0；（2）1/2MS+ NAA0.8+IBA0.1；（3）1/2MS+NAA0.8+IBA0.3；（4）1/2MS +NAA0.8+IBA0.5。以上培养基含2%食用白糖、0.7%琼脂，pH5.8～6.0。培养温度25～28℃，光照12h・d-1，光强40μmol・m-2・s-1。

2 结果与分析

2.1 不同激素组合对愈伤组织诱导的影响 设计的8种愈伤组织诱导培养基均能诱导愈伤组织产生，但不同培养基的出愈率和愈伤组织状态有所不同。统计表明，愈伤组织诱导率最高的是（7）培养基（79.3%），（4）培养基次之（66.8%），（1）、（2）、（3）培养基培养效果不理想（出愈率都低于50%）。由此可知，山桐子对生长素种类有一定的选择性，NAA的效果比2，4-D好，添加低浓度的6-BA对山桐子愈伤组织的诱导有重要影响。有研究表明，低浓度的6-BA（0.1mg・L-1）水平下，愈伤组织诱导率变化趋势随生长素浓度的递增而增加，反之而减少。

2.2 不同激素组合对芽的分化与增殖的影响 20d后4种培养基上都有侧芽发生并正常生长。培养基（1）上增殖较少；培养基（4）上虽然增殖多，但芽苗细弱有部分玻璃苗；培养基（2）、（3）上增殖都较好，但培养基（3）上芽苗形态生长更正常，其侧芽30d增殖达4.6倍，芽苗生长快而整齐。

2.3 不同激素组合对壮苗培养的影响 4种培养基都能进行壮苗培养。但培养基（1）、（2）和（4）上的芽苗基部愈伤组织较大，培养基（3）更适合壮苗培养，30d芽苗生长平均高度达3.6cm以上，且苗茎粗壮，此种培养基上的芽苗非常适宜生根培养。

2.4 不同激素组合对生根培养的影响 20d后4种培养基均有不定根产生，其生根率无明显差异，但生根量有差异。40d统计结果是培养基（3）较好，平均每试管苗生根4～7条，且生根均匀整齐，生根率达87%以上。

3 结论与讨论

在植物愈伤组织诱导中，虽然对NAA的利用不是很多，但NAA对愈伤组织的诱导也有很重要的作用。林娅等研究表明，NAA诱导愈伤组织的效果优于2，4-D，NAA与任何细胞分裂素类物质结合使用，愈伤组织的诱导率都为100%。龙雯虹等对萝卜愈伤组织的诱导研究也指出，不同的生长素对萝卜愈伤组织的诱导效果为：NAA>2，4-D>IBA。本研究结果表明，通过使用NAA，添加极微量TDZ（具有生长素和细胞分裂素双重作用）和微量6-BA，诱导山桐子的愈伤组织效果优于2，4-D。

在对山桐子芽的分化与增殖研究中，所选的最佳培养基单独对分化、增殖两个过程来讲并不是最佳，而是从经济角度和缩短培养时间而言的。

参考文献

[1]蒋泽平，梁珍海，吴纲，等. 山桐子的组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯，2006，42（5）：908-909.

[2]蒋泽平，梁珍海，刘根林，等.山桐子茎段离体培养技术研究[J].中国农学通报，2006，22（12）：393-398.

[3]周宜君，周生闯，刘玉，等.植物生长调节剂对植物愈伤组织的诱导与分化的影响[J].中央民族大学学报：自然科学版，2007，16（1）：23-28.

[4]林娅，郑玉梅，刘青林.影响月季愈伤组织诱导和分化的因素[J].分子植物育种，2006，4（2）：223-227.

[5]龙雯虹，许彬，张丽萍，等.萝卜诱导愈伤组织的影响因素[J].西南农业大学学报，2006，28（1）：131-134.

（责编：张宏民）