时间：2022-09-22 08:23:40
支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病，研究已经证实Th1/ Th2 细胞亚群的失衡是哮喘发病的核心环节[1]，Th2 优势分化免疫应答释放Th2型细胞因子增多导致嗜酸粒细胞性气道炎症是哮喘特征性病理改变之一成为共识[2]，胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin，TSLP）近来被认为能调节Th2型细胞因子如IL-4的合成及表达从而在Th1/Th2平衡中对Th2 优势分化免疫应答起到调控作用， 是免疫调控通路中的一个重要节点分子[3]，我们在前期对哮喘模型小鼠TSLPmRNA及Th2型细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的研究中观察到哮喘模型组TSLPmRNA相对表达量及IL-4水平均显著升高， IL-5、IL-13水平也升高，也提示TSLP可能是哮喘发生机制中重要的调控分子。但对于TSLP上游的调控分子的研究甚少，特别是基因层面的，鉴于微型RNA（Micro RNA，miRNA）参与细胞增殖、分化等功能的调节，近来在哮喘发病机制及作用受到关注[4，5]。
1 资料与方法
1.1一般资料 2012年7月～2013年3月在本院呼吸科门诊及呼吸内科病房诊治的符合纳入标准的哮喘患者12例，作为哮喘组，男7例，女5例，平均年龄（32.54±12.18）岁，平均病程（5.78±2.65）年；急性发作期6例，慢性缓解期6例。另外选取自愿接受检查、近4w内无呼吸道感染、无吸烟史，胸部X线、肺功能正常健康人12例，作为对照组，男8例，女4例，平均年龄（36.22±10.23）岁；两组患者性别、年龄，差异无统计学意义（P>0.05）。本研究得到研究对象的知情同意。
1.2纳入标准 符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组的支气管哮喘防治指南的诊断标准无吸烟史或至少戒烟 2年以上，近4w内无呼吸道感染史和激素等哮喘药物使用史。
1.3排除标准 支气管哮喘重度患者和哮喘持续状态者；合并变应性鼻炎者；合并有心血管、 肝、肾、内分泌或造血系统等严重原发病及精神病患者；妊娠期或哺乳期妇女；口服激素患者；茶碱类制剂过敏患者。
1.4方法
1.4.1血液标本采集与处理 抽取各受试者空腹外周静脉血 10ml，加入EDTA1mL抗凝，淋巴细胞分层液密度梯度离心（4℃，2000r・min-1，5min）。 分离出血浆及外周血单个核细胞，-70℃保存待测。
1.4.2肺泡灌洗液采集与处理 经纤维支气管镜收取支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）， 纤支镜顶端楔入右肺中叶开口处， 从活检口分3次注入37℃无菌生理盐水，50ml/次， 负压吸引回收灌洗液， 回收约20ml/次， 3次共约回收60ml，回收液经双层纱布过滤，离心（4℃，1500r・min-1，10min），用细胞沉降管将离心沉淀细胞直接均匀地平铺于载玻片上，自然风干，常规HE染色，在镜下进行分离计数。
1.4.3miRNA-126表达检测 采用RT-PCR 法检测外周血淋巴细胞miRNA-126 的表达，Trizol一步法提取总 RNA，氯仿和异丙醇抽提。紫外分光光度仪和琼脂糖电泳鉴定 RNA的浓度和纯度，取10μl根据逆转录试剂盒说明逆转录合成 cDNA，-70℃ 冻存备用。取5μl逆转录产物进行 PCR扩增反应，以通用引物为内对照。
1.4.4TSLP、IL-4、IL-5和IL-13的检测 ELISA法检测BALF中的TSLP和血浆IL-4、IL-5和IL-13的水平，按照试剂盒说明书进行操作。
1.5统计学处理 采用 SPSS12.0 软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示， 两组间比较采用独立样本 t检验， P
2 结果
BALF细胞总数和分类计数 和对照组比较，哮喘组中性粒细胞比率升高，差异有统计学意义（P
3 讨论
本研究显示，miRNA-126在哮喘组高表达，和对照组比较，表达倍数显著升高（P
参考文献：
[1]Ray A， Cohn L. Altering the Th1/ Th2 balance as a therapeutic strategy in asthmatic diseases [J] . Curr Opin Investig Drugs， 2000， 1（4）： 442-448
[2]Rautajoki KJ， Kylaniemi MK， Raghav SK， et al. An insight into molecular mechanisms of human T helper cell differentiation [J]. Ann Med， 2008，40（5）：322-335
[3]Mou Z， Xia J， Tan Y， et al. Overexpression of thymic stromal lymphopoietin in allergic rhinitis[J]. Acta Otolaryngol， 2009 ，129（3）：297-301
[4]Foster PS， Plank M， Collison A， et al . The emerging role of microRNAs in regulating immune and inflammatory responses in the lung[J]. Immunol Rev， 2013，253（1）：198-215
[5] Greene CM， Gaughan KP. microRNAs in asthma： potential therapeutic targets[J].
Curr Opin Pulm Med，2013，19（1）：66-72
[6]Liu YJ， Soumelis V， Watanabe N， et al. TSLP： an epithelial cell cytokine that regulates T cell differentiation by conditioning dendritic cell maturation[J]. Annu Rev Immunol， 2007，25：193-219.