圣安泰牌百力康片的潜在致突变性分析

[摘要]目的 ？ 为了研究复方生物黄酮（圣安泰牌百力康片）的潜在致突变性。 方法 ？ 我们对该产品进行了Ames实验、小鼠骨髓细胞微核实验和小鼠畸形实验。 结果 ？ Ames实验，小鼠骨髓细胞微核实验，小鼠畸形实验等结果均为阴性，均未见毒性改变。 结论 ？ 复方生物黄酮在服用剂量内未见致突变性。？？？

[关键词] 复方生物黄酮 Ames实验

中图分类号：R33.2 文献标识码：A 文章编号：

随着生命科学的不断发展 ，人们对生物黄酮有了广泛的研究，发现黄酮类化合物具有良好的抗氧化性能和清除自由基的能力；具有抗肿瘤作用；植物雌激素样作用；减少体内胆固醇的合成，降糖作用和降低血清胆固醇浓度和对心脑血管的保护作用；对细胞免疫功能和非特异性免疫功能均有提高作用。生物黄酮的种类众多，其来源不同，所发挥的生物活性也不同。根据传统中医理论以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成的复方生物黄酮，可以更好的发挥黄酮的提高免疫作用，尽管这些主要原料均来源于“既食又药”的物质，但是关于复方成分的致突变性研究较少。为了研究复方生物黄酮（圣安泰牌百力康片）可能对人体造成的潜在致突变性，我们对该产品进行了Ames实验、小鼠骨髓微核实验和小鼠畸形实验，以期为今后开发利用我国“既食又药”的医药宝库提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 样品复方生物黄酮的商品名称为圣安泰牌百力康片，由哈尔滨圣安泰生物科技有限公司提供。样品以枸杞、黄芪、银杏叶为主要原料，辅以其他辅料制成，功效成分为总黄酮。

1.2 材料昆明种小白鼠（批准证号：医动字第09-2-7号），购自黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心。TA97a、TA98、TA100和TA102四种菌株引自美国加州大学Ames实验室。

1.3 方法

1.3.1 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验（Ames实验）？ TA97a、TA98、TA100和TA102 四种菌株引自美国加州大学Ames实验室。经菌株特性鉴定均符合实验要求。活化系统为PCB-五氯诱导的雄性Wistar大鼠肝s-9液。按1：9加入辅助因子（Ames 1983年配方）配成10% s-9混合液，经阳性诱变剂活性鉴定符合实验要求。实验样品经XAD-11树脂柱过滤及洗脱预处理，最后以DMSO为溶剂，剂量设计分别为5mg/皿、1mg/皿、0.2mg/皿、0.04mg/皿和0.008mg/皿受试物。除上述5个剂量组外，又设未处理对照组、溶剂对照组（DMSO）和阳性对照组[加s-9用2-AF（TA102用1，8-二羟蒽醌），不加s-9用DEXON（TA100用叠氮钠）]。采用平板渗入法进行实验。在保温的顶层培养基中依次加入测试菌株新鲜增菌液0.1ml，混匀；加受试物或对照物0.1ml[需活化时加入10% s-9混合液0.5ml（含s-9 5μl）]，再混匀，迅速倾入底层培养基上，转动平皿使顶层培养基均匀分布在底层上，平放固化，37℃培养48h观察结果。每个剂量平行做了3皿，并重复一次，最后以3皿平均值报告实验结果。

1.3.2 小鼠骨髓细胞微核实验？ 昆明种小白鼠，体重25～30g，共50只，在本实验室适应环境7天后，随机分成5组，每组10只，雌雄各半。高剂量组剂量为10g/kg bw；中剂量组为5g/kg Bw；低剂量组为2.5g/kg bw；阴性对照组经口灌胃蒸馏水；阳性对照组灌胃给予环磷酰胺，剂量为40.0mg/kg bw。按20ml/kg bw灌胃容积进行灌胃。采用30h给受试物法，即二次给受试物间隔24h，第二次给受试物后6h颈椎脱臼处死小鼠，取股骨，常规制片。显微镜双盲法阅片，每只小鼠观察1000个嗜多染红细胞（PCE），记录有微核的嗜多染红细胞数， 计算 出微核率。每只动物计数200个嗜多染红细胞，观察嗜多染红细胞与成熟红细胞比值。

1.3.3 小鼠畸形实验？ 昆明种小白鼠25只，体重25～30g；随机分成5组，每组5只。设3个剂量组，剂量设计同小鼠骨髓微核实验，即高剂量组为10g/kg bw，中剂量组为5g/kg bw，低剂量组为2.5g/kg bw。阴性对照组给予蒸馏水，阳性对照组给予环磷酰胺，剂量为40mg/kg bw。所有各组均按20ml/kg bw容积灌胃，每日1次，连续5天。各组动物均于首次投入检样后35天处死。按常规方法制片，固定，2%伊红溶液染色，每只小鼠镜检1000个完整，计算畸形率。

2 结果

2.1 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验（Ames实验）？ 圣安泰牌百力康片二次Ames。？？？

实验结果表明，受检样品对Ames各实验菌株在加与不加活化系统条件下均呈阴性结果，即鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶实验为突变阴性结果。

2.2 ？ 小鼠骨髓细胞微核实验？？？？ 对实验结果进行泊松分布检验，结果两个性别小鼠除阳性对照组外，各剂量组微核率与阴性对照组相比均无统计学差异（ P >0.05），亦无剂量效应关系，说明受试物小鼠骨髓细胞微核实验为阴性结果。此外，各组动物PCE/RBC值经方差分析差异无显著性，说明各组动物均未见到细胞毒性作用。

2.3 小鼠畸形实验

各组小鼠均可见到一定数量的畸形，除阳性对照组外各实验组小鼠的畸形与阴性对照组相比，均没有超过2倍，且无剂量效应关系，亦无统计学意义，说明受试物对小鼠畸形发生率无影响。

3 讨论

复方生物黄酮的主要来源为枸杞、银杏叶和黄芪。研究证实这几种成分未见致突变毒性结果。枸杞的Ames实验（TA97、TA98、TA100、TA1024个菌株）结果为无论加S9与不加S9回变菌落数均未超过空白对照的两倍。雌性和雄性动物的微核率分别为1.6‰与1.2‰，与阴性对照组微核率相比，差异不显著。小鼠畸形实验畸形率均在正常范围内，与阴性对照组畸形率相比，差异无统计学意义。对银杏叶的遗传毒性实验研究也未见致突变作用，目前尚未见黄芪的突变性研究。本文在急性毒性实验的基础上进行了复方生物黄酮的Ames实验、小鼠畸形实验和小鼠畸形实验，结果表明复方生物黄酮对Ames各实验菌株在加与不加活化系统条件下均呈阴性结果。各剂量组微核率与阴性对照组相比均无统计学差异（ P >0.05），亦无剂量效应关系，说明受试物小鼠骨髓细胞微核实验为阴性结果。各组小鼠均可见到一定数量的畸形，除阳性对照组外，各实验组小鼠的畸形与阴性对照组相比，均没有超过2倍，且无剂量效应关系，亦无统计学意义，说明受试物对小鼠畸形发生率无影响。总之，本研究结果说明实验剂量的复方生物黄酮没有致突变性。

参考文献：

1、王舒然，谢友祥，栗新年，复方生物黄酮的致突变实验研究，论文网，2013.07