HIV/HBV/HCV共感染者CD4+\CD8+T淋巴细胞计数的对比分析

[摘要] 目的 研究HIV/HBV/HCV共感染者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞计数变化，探讨共感染对HIV感染进程及患者机体免疫功能的影响。 方法 对75例HIV共感染样本进行外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞计数测定并进行分析。 结果 4组的CD4+T淋巴细胞计数比较差异无统计学意义（P＞0.05）；4组的CD8+T淋巴细胞计数及CD4+/CD8+比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 共感染会影响患者外周血CD8+T淋巴细胞计数及CD4+/CD8+比值，HIV/HBV/HCV三重感染患者的CD8+T淋巴细胞计数较其他组高。

[关键词] HIV；HBV；HCV；共感染；CD4；CD8

[中图分类号] R512.91[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）03（c）-0103-03

Comparative analysis of CD4+,CD8+ T lymphocyte count in co-infected patient with HIV/HBV/HCV

CHEN Shang-liang1 LI Jia-qi2 LI Jie-ming1 YU Wen-chao1 LU Shao-fen1 LUO Huai-xue1 XIAO Su-liu2

1.Blood Center of Zhaoqing City in Guangdong Province,Zhaoqing526020,China;2.Yangchun Prison Hospital in Guangdong Province,Yangchun529600,China

[Abstract] Objective To study the change of of CD4+,CD8+ T lymphocyte count in co-infected patient with HIV/HBV/HCV and to investigate the influence of co-infection on HIV infection process and the immune function of patient.Methods 75 peripheral blood samples with HIV co-infection were selected,CD4+,CD8+ T lymphocyte count was tested and analysed.Results CD4+ T lymphocyte count in four groups was compared,with no statistical difference(P＞0.05).CD8+ T lymphocyte count and CD4+/CD8+ ratio in four groups was compared respectively,with statistical difference(P＜0.05).Conclusion Peripheral blood CD8+ T lymphocyte count and CD4+/CD8+ ratio are changed in co-infected patient,CD8+ T lymphocyte count of HIV/HBV/HCV co-infected group is highter than other three groups.

[Key words] HIV;HBV;HCV;Co-infection;CD4;CD8

艾滋病是一种严重危害人类健康的传染病，目前该病已波及全球200多个国家和地区，感染者总数已超6000万，主要传播途径包括性接触、输血、不洁注射等。HIV病毒进入人体后，主要攻击的靶标为CD4+T淋巴细胞。CD4+T淋巴细胞的快速下降可迅速导致T淋巴细胞免疫功能缺陷，同时会对CD8等亚群T淋巴细胞造成不同程度损害，导致严重的机会感染及恶性肿瘤的发生，最终使HIV感染者死亡。有文献研究表明，HIV感染者经常合并其他病原体感染，尤其与肝炎病毒共感染，但共感染的后果并非一致[1]。HBV或HCV共感染可增加HIV感染者的死亡率，GBV-C病毒血症对HIV感染有积极的作用[2]，可以延缓HIV感染的疾病进程，但可以确定，HIV共感染疾病进程与人体免疫状态紧密相连，故测定HIV感染者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞计数，在一定程度上可以判断其进程与预后。本研究测定不同共感染模式HIV感染者的CD4+、CD8+T淋巴细胞计数，探讨共感染对HIV感染进程以及患者机体免疫功能的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取广东省某监狱在押人员为研究对象，均为男性，年龄20～48岁，共获取76份HIV感染者的样本，其中1例样本量不足，无法进行外周血T淋巴细胞计数，最终75份样本纳入研究，根据HIV共感染检测结果，将其分为4组，A组为HIV感染，B组为HIV/HBV感染，C组为HIV/HCV感染，D组为HIV/HBV/HCV感染。A组12例，平均年龄（35.6±1.5）岁；B组7例，平均年龄（33.7±1.2）岁；C组49例，平均年龄（33.8±0.8）岁；D组9例，平均年龄（31.8±0.6）岁。4组的年龄比较差异无统计学意义（P=0.967），具有可比性。

1.2 试剂与仪器

Tecan EVO全自动加样仪（瑞士Tecan集团公司），BEP Ⅲ全自动酶免分析仪（德国西门子公司），流式细胞计数仪（BD公司）；HIV抗原抗体检测试剂盒（法国伯乐），HCV抗体检测试剂盒（北京万泰生物药业股份有限公司），HBsAg检测试剂盒（生物梅里埃），单克隆抗体：鼠抗人CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE三色标记及同型的IgG1-PC5/IgG1-FITC/IgG-PE（BD公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 血清学检测对所有在押人员采用ELISA进行HIV初筛，初筛阳性送HIV确证实验室确证；HCV抗体、HBsAg检测采用ELISA检测。

1.3.2 外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞检测静脉采血5 ml，肝素抗凝，离心分离得外周淋巴细胞悬液，调整细胞浓度至105个/ml使用，取样100 μl，加入三色标记的鼠抗人CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，同时设立同型对照，室温避光孵育30 min，上流式细胞仪检测。计算CD4+、CD8+T淋巴细胞绝对数及CD4+/CD8+比值。

1.4 统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析和处理，计量资料以x±s表示，采用F检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

4组的CD4+T淋巴细胞计数比较差异无统计学意义（P＞0.05）；4组的CD8+T淋巴细胞计数及CD4+/CD8+比较差异有统计学意义（P＜0.05）（表1）。

表1 4组CD4+、CD8+T淋巴细胞计数及CD4+/CD8+的比较（x±s）

3 讨论

HIV病毒感染后通常表现为获得性免疫功能缺陷和机会性感染概率增大，外周血细胞计数表现为CD4+T淋巴细胞计数下降及CD4+/CD8+比例反转，主要机制是HIV病毒在抗原提呈细胞的辅助下，通过抗原提呈细胞-T淋巴细胞的模式，在体内蔓延感染CD4+T淋巴细胞，被感染的T淋巴细胞为自身免疫机制识别并被清除，导致CD4+T淋巴细胞数量下降，从而导致获得性免疫缺陷[3]。在临床实践中，测定HIV患者外周血CD4+T淋巴细胞计数及CD4+/CD8+比值，有助于判定患者的病情进展及疗效评价。HIV病毒感染者通常伴有其他病毒感染，如梅毒螺旋体、HCV病毒等肝炎病毒，使HIV患者的感染进程变得更加复杂，GBV-C与HIV的共感染是否能延缓HIV感染的进程，各家学者持有不同意见[4-6]。研究HIV共感染病毒之间的相互作用及其机制，是目前HIV感染研究的热点之一[7]。

本实验尝试研究常见病毒HBV、HCV与HIV共感染的特征，检测了75份共感染HIV患者的血清学指标及外周血T淋巴细胞亚群计数，结果显示，HIV、HIV/HBV、HIV/HCV、HIV/HBV/HCV感染组别间的CD4+T淋巴细胞计数差异无统计学意义，CD8+T淋巴细胞计数及CD4+/CD8+比值差异有统计学意义，与祝婷等[2]报道基本一致。本研究中的研究对象为监狱在押人员，主要感染途径是静脉注射，且年龄大多集中在中青年，年龄比较均一，可排除年龄因素对机体免疫功能的影响，比较适合评估共感染HIV患者的免疫功能状态。CD4+T淋巴细胞是免疫系统的重要辅助手段，主要表达于辅助T淋巴细胞，可参与辅助T淋巴细胞识别抗原的信号转导途径，同时CD4+是HIV的重要受体，也是HIV病毒攻击的主要对象，CD4+的数量与功能是判断HIV患者免疫功能的重要依据。正常人体的CD4+T淋巴细胞数量为500～1600个/ml，HIV患者可能出现不规则的下降，当降至200个/ml时，就可能导致机会性感染及恶性肿瘤，故临床已将CD4+T淋巴细胞的计数水平作为HIV治疗的重要指标。HIV病毒特异攻击CD4+T淋巴细胞，而HCV、HBV病毒等均没有此特性，故可以很好地解释各组CD4+T淋巴细胞计数无差异。

CD8+T淋巴细胞是细胞免疫的效应细胞，分泌多种细胞因子，最终通过细胞毒性T淋巴细胞效应杀死被感染的靶细胞，是机体抗HIV的最重要免疫细胞，其数量与功能同病毒量呈正相关。与HIV一样，HBV、HCV均为胞内感染寄生病毒，机体对其的清除主要依靠细胞免疫。HBV、HCV病毒等侵入人体内，刺激T淋巴细胞增殖分化，使静止T淋巴细胞转化为效应T淋巴细胞，释放多种细胞因子，通过细胞毒效应产生杀伤作用，清除被感染细胞。正常机体内各淋巴细胞亚群数量与比例保持一定平衡，是维持人体正常免疫防疫功能的条件。HIV感染后，患者外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞数量均显著降低，CD4+/CD8+倒置明显，且随着HIV感染加重，CD4+数量显著降低，CD4+/CD8+比值倒置更加显著，CD8+及CD3+T淋巴细胞数量降低。本研究表明，在HIV感染患者不同的共感染模式中，CD8+T淋巴细胞计数存在差异，在HIV/HBV/HCV三重共感染者中尤为明显，可推测是否由于HBV、HCV的存在，增强了机体的免疫应答，从而导致三重感染者比单纯感染者的CD8+T淋巴细胞计数更高。HIV/HBV/HCV共感染者体内，HBV、HCV是否会对HIV自然史产生影响，是否加速了HIV向艾滋病及其相关疾病的发生，目前尚存在很大争议[8]。K?rner等[9]研究认为HIV/HCV混合感染可能增加免疫激活，导致未经治疗的HIV感染者体内CD4+T淋巴细胞凋亡，使其更快速地进展为严重的免疫缺陷。同时有文献报道，病毒共感染对HIV感染者的免疫力影响，除了表现为CD4+、CD8+T淋巴细胞计数和功能异常外，还表现为对自然杀伤细胞数量和功能的影响，HCV/HIV病毒的共感染加剧了NK细胞的损害，从而影响HIV感染的进程和预后[10-13]。

由于研究对象来源局限，样本量尚未足够大，如HIV/HBV/HCV三重感染组仅有9例符合纳入研究，这些因素均会影响研究结果，为了使研究结果更可靠，后续研究应加大样本量的筛选，进一步研究HIV与HCV、HBV的相互作用机制，为将来更好地控制HIV/HBV/HCV感染提供更加充分的理论依据。

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（收稿日期：2014-02-20本文编辑：李亚聪）

[基金项目] 广东省肇庆市科技计划项目（2013E2815）

[作者简介] 陈尚良（1981-），男，硕士，主管技师，主要从事临床输血检验工作和输血安全研究