静注人免疫球蛋白(pH4)的稳定性研究

时间:2022-09-17 09:38:28

静注人免疫球蛋白(pH4)的稳定性研究

【摘要】 目的 考察静注人免疫球蛋白(pH4)的稳定性。方法 对三批静注人免疫球蛋白(pH4)进行2~8℃条件下为期3年的长期稳定性试验, 对考察的制品依照《中华人民共和国药典》2005年版二部中附录XIX C药物稳定性试验指导原则及《中华人民共和国药典》2010年版二部中附录XIX C原料药及药物制剂稳定性试验指导原则进行检测。结果 在长期稳定性试验过程中, 可见异物, 纯度、pH值、IgG含量、蛋白质含量、分子大小分布等均无明显的变化趋势。结论 静注人免疫球蛋白(pH4)稳定性良好, 在进行3年长期稳定性试验后, 其质量仍符合《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求。

【关键词】 静注人免疫球蛋白(pH4);质量;稳定性

以健康人血浆为原料, 采用先进的生物工程技术或分离技术制备的静注人免疫球蛋白, 是治疗原发性免疫缺乏症、继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病(如川崎病、特发性血小板减少性紫癜)的有效药物, 有着其它药品不可替代的作用[1]。近年来, 随着静注人免疫球蛋白的需求量不断增加, 其稳定性也倍受各制药企业及广大用户的关注。本公司生产规格为5% 1.25g/25 ml静注人免疫球蛋白(pH4)的液体剂型已有多年, 原批准的有效期为2年。为确定静注人免疫球蛋白(pH4)的稳定性, 保证制品在最有效情况下使用, 实验中采用长期稳定性试验对其进行了全面质量检测, 以观察制品的各项质量指标的变化情况, 为延长其有效期提供试验依据。

1 材料与方法

1. 1 材料 3批静注人免疫球蛋白(pH4)制品, 为江西博雅生物制药股份有限公司于2009年生产。白喉抗体诊断试剂由中国食品药品检定研究院提供, 抗-HBs标准品由中国食品药品检定研究院提供, 抗-HBs检测试剂盒购买于北京北方生物技术研究所, 其他试剂均为国产分析纯。

1. 2 主要仪器 智能放免γ测量仪(SN-695A)购自上海核所日环光电仪器有限公司;高效液相色谱仪购自日本岛津公司;凯氏定氮仪购自 Foss公司;全自动电泳仪(Genios)购于INTERLAB公司;澄明度检测仪购于天津大学精密仪器厂。

1. 3 方法

1. 3. 1 稳定性试验 抽取的3批静注人免疫球蛋白(pH4)制品, 在保存前按照2005版《中国药典》三部标准进行全面质量检测。再取足够量样品置于2~8℃条件下进行为期3年(2009年~2011年)的长期试验。按长期试验 0、3、6、9、12、18、24、36个月试验点对样品进行质量检测。其中第0、12、24和36个月为所有项目全部进行质量检查, 其他试验点为重点项目检测。第0个月的首次全检项目完全参照《中华人民共和国药典》2005年版三部《静注人免疫球蛋白(pH4)》中成品检定的所有检测项目, 第12、24和36个月全检项目完全参照《中华人民共和国药典》2010年版三部《静注人免疫球蛋白(pH4)》中成品检定的所有检测项目。重点检测项目包括外观、可见异物、pH值、IgG含量(因2010版药典中无IgG含量检测项目, 故第12个月将此项检测项目改为蛋白质含量)和无菌检查等5项质量指标。

1. 3. 2 IgG含量检测 采用紫外-可见分光光度法(见2005版《中国药典》三部附录Ⅺ K)。

1. 3. 3 蛋白质含量检测 采用凯氏定氮法(见2010版《中国药典》三部附录ⅥB第一法)。结果计算:蛋白质含量(g/L) =(总氮-非蛋白氮)×6.25×10-1。

1. 3. 4 pH值检测 将待检品蛋白质用生理氯化钠溶液稀释至质量浓度为10 g/L, 第0个月至第9个月检测按2005版《中国药典》三部附录VA方法测定其pH值;第12个月至第36个月检测按2010版《中国药典》三部附录VA方法测定其pH值。

1. 3. 5 其他项目的检测 外观、可见异物、无菌检查、分子大小分布、PKA、抗-HBs、白喉抗体、抗补体活性、异常毒性检查、热稳定性试验、热原检查等质量指标均采用《中国药典》三部收录的标准分析方法。

2 结果与分析

2. 1 重点检测项目的稳定性试验结果 3批静注人免疫球蛋白(pH4)制品在2~8℃条件下保存3年, 重点考察项目中的外观检查、无菌检查、可见异物在长期稳定性试验期间无任何变化, 且均符合《中国药典》的规定要求。用t检验对保存前及保存第36个月检测的pH值、蛋白质含量、IgG含量进行分析, 三批产品的pH值从0个月~36个月保持在4.0~4.2;蛋白质含量保持在55g/L~59g/L;从0个月~9个月3批产品的IgG含量维持在4.9%~5.3%, 3项指标的数据变化无统计学意义(P>0.05)。因2010版药典中无IgG含量检测项目, 故第12个月将IgG含量检测项目改为蛋白质含量检测, 蛋白质含量一般情况下会高于IgG含量0.5%左右。

2. 2 首检与末检的结果对比 将0个月时全项检定(首检)结果与2~8℃条件下保存36个月后的检测(末检)结果进行对比, 外观、可见异物、装量、热稳定性、无菌检查、异常毒性检查、热原检查等检测项目无任何变化, 且均符合《中国药典》的规定要求。从表1可知:pH值、PKA含量、抗补体活性这3项指标的数据变化差异无统计学意义, 3批制品的纯度、分子大小分布、每瓶抗-HBs的总效价均有下降的趋势, 而糖含量有微小的上升, 每瓶白喉抗体总效价却有明显的增加, 但仍符合《中国药典》的要求标准。

3 讨论

实验结果显示, 静注人免疫球蛋白(pH4) 具有良好的稳定性, 在进行3年长期稳定性试验后, 其各项质量指标仍符合《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求。3批制品的分子大小分布在2~8℃条件下保存3年后均有缓慢的下降趋势, 分析图谱发现, 该下降趋势主要是因为部分单体裂解成小分子杂蛋白所致。第36个月, 制品中的IgG单体及二聚体含量之和为98.2%, 优于药典标准的IgG单体及二聚体含量之和 96%[2], 因此, 产品在运输及贮存过程符合 2~8℃冷链保藏的要求时, 36个月内制品是安全、有效。

参考文献

[1] 周海云.静注人免疫球蛋白的研究与应用.微生物学免疫学进展.2009,37(4):70-73.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.三部.2010版.北京:中国医药科技出版社,2010:233.

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