三七茜草复方干预置Cu-IUD家兔出血副反应的拆方实验研究

摘 要:目的:对三七茜草复方进行拆方实验研究。方法:建立置Cu-IUD家兔的动物模型,观察三七茜草复方及三七、茜草单独对置Cu-IUD家兔的血液流变学、子宫内膜表浅微血管总数、以及6-K-PGF1α、TXB2、t-PA活性的影响。结果:三七茜草复方及三七、茜草均能减少置器后家兔子宫内膜浅血管数以及降低红细胞比容和低切、中切、高切下全血比黏度及血浆比黏度的作用,同时均能使家兔子宫匀浆6-K-PGF1α/TXB2比值和t-PA活性明显降低,但单用三七或茜草,效果不如复方。结论:三七茜草复方具有改善前列腺素的平衡失调,纤溶系统,血液流变学的异常等病理变化的作用,三七、茜草是其组成的必要药味。

关键词:宫环出血;三七;茜草;6-K-PGF1α;TXB2;t-PA

中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)04-0726-03

Experimental Research to Decompose the SQ

Complex Prescription Treating the Uterine Bleeding of Cu-IUD-Wearing Rabbits

TAN Zhaoyang, YOU Zhaoling,FU Lingmei, YIN Xianghua

(Hunan University of Chinese Medicine, Changsha,410208,Hunan,China)

Abstract:Objective: To decompose the SQ complex prescription which was composed of Radix notoginseng and Radix rubiae. Methods:An animal model of Cu-IUD-wearing rabbits was established and was given SQ complex prescription, Radix notoginseng or Radix rubiae alone. Hemorheology markers, endometrium microvessel count, 6-K-PGF1α, TXB2, and t-PA were studied. Results:SQ complex prescription, Radix notoginseng and Radix rubiae all could reduce the endometrium microvessel count, degrade the erythrocrit, the blood viscosity at low, medium and high shear rate and the plasma viscosity of Cu-IUD-wearing rabbits, decrease the ratio of 6-K-P/TXB2 and t-PA activity obviously. But the effects of Radix notoginseng or Radix rubiae were weaker than that of SQ. Conclusion: SQ complex prescription can improve the disequilibrium of prostaglandin, plasminogen system, hemorheology etc. pathological changes. Radix notoginseng and Radix rubiae were necessary ingredients in it.

Key words:endometrorrhagia caused by IUD-wearing; Radix notoginseng,Radix rubiae; 6-K-PGF1α;TXB2;t-PA

收稿日期:2009-11-19

基金项目:国家中医药管理局新药开发专项基金项目(D1X046B)

作者简介:谭朝阳(1970-),男,湖南郴州人,副教授,博士,主要从事中药制剂与质量的研究。

通讯作者:尤昭玲(1949-),女,湖南湘潭人,教授,博士研究生导师,主要从事妇科血症防治的研究。

宫内节育器(intrauterine device,IUD)具有避孕效果好、安全、简便、经济、长效及取器后不影响生育的特点,因此,广泛被育龄妇女接受和采用。但置器后所致的经期延长、月经量多等子宫异常出血反应是困扰置器者的主要问题,亦是影响其续用率的主要原因。中医对本病病因病机的认识己基本趋于一致[1],其病因病机多认为是环卧胞宫,冲任两脉及胞脉胞络为金刃所伤,脉络受损,血溢脉外,局部气血失和,脉络瘀阻,血不归经而妄行。“瘀”是本病症结所在,并贯穿病变始终,故以活血化瘀法组成三七茜草(SQ)复方进行防治,取得了较好的临床效果。为了阐明其作用机理及寻找有效成分,以置Cu-IUD家兔为动物模型进行拆方实验研究,探讨复方及三七、茜草单独作用对置Cu-IUD家兔的血液流变学、前列腺素的平衡失调,纤溶系统等的影响。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1药物(1)三七:加水煎煮2次,每次1h,滤过,滤液浓缩成每mL 含0.175g生药的溶液。(2)茜草:加水煎煮两次,每次1h,滤过,滤液浓缩成每mL 含0.7g生药的溶液。(3)SQ复方:取三七、茜草,加水煎煮2次,每次1小时,滤过,滤液浓缩成每mL 含三七0.175g、茜草0.7g的溶液。(4)吲哚美辛肠溶片:镇江吉贝尔药业有限公司生产,25mg/片,批号20020224。碾碎溶于蒸馏水中,药物溶液为0.44mg/mL。(5)注射用青霉素钠(兽用),华北制药股份有限公司生产,批号002021431。(6)戊巴比妥钠,进口分装,中国医药(集团)上海化学试剂公司出品,用蒸馏水配成2%溶液。

1.1.2动物及实验条件健康普通级日本大耳白兔56只,雌性未孕,兔龄6～8月,体重2.5kg～3.5kg,由湖南中医学院实验动物中心提供。证书编号:医动字20-003。单笼饲养,每笼1只;实验室温度(25±1)℃左右,相对湿度(65±5)%,通风、清洁,饲料、给水充分,安静。

1.1.3主要仪器和试剂 (1)宫内节育器(TCu220),天津市医疗器械厂生产,型号32mm,批号20020114。(2)olympus光学显微镜。(3)LBY-N6型血液流变仪,北京普利生公司生产。(4)GC-1200型全自动γ计数器,安徽中国科技大学中佳公司。(5)美国bloradmodel550型酶标仪,MLCROELATFREADER。(6)6-酮-前列环素PGF1α(6-K-PGF1α)和血栓素B2(TXB2)放射免疫试剂盒,购自中国人民总医院放免研究所,批号为20020510。(7)t-PA活性试剂盒,购自上海太阳生物技术公司,批号020420。

1.2实验方法

1.2.1实验分组雌性未孕日本大耳白兔56只,称重后编号,按体重分层,再按随机数目表法分为7个组:三七组、茜草组、SQ复方组、吲哚美辛对照组、模型组、空白对照组、假手术组,每组8只。

1.2.2造模方法参照采用文献[2]的造模方法,根据家兔双角子宫的生理结构,将IUD剪去T形的上半部分,取其下端带一小孔的棒状部分(含5节铜环,全长约2cm)备用。除空白对照组8只及假手术组8只外,其余40只家兔在2%戊巴比妥钠(50mg/kg)静脉麻醉下行无菌剖腹术。先固定四肢,去毛剖腹,暴露子宫角,在右侧子宫距阴道3.5cm处作一直径2mm的切口,朝阴道方向插入改造后的IUD并将其固定于子宫壁上,缝合切口,假手术组家兔用同样的方法麻醉,剖腹,在右侧子宫作切口但不放置IUD,术后每只动物分别肌注青霉素80万U抗感染,所有动物均在同样环境下采用同样饲料分笼饲养30天。

1.2.3给药方法造模后第31天开始分别给药:模型组、假手术组、空白对照组给予8mL/(kg•d)蒸馏水灌胃;三七组、茜草组、SQ复方组、吲哚美辛对照组分别按4.082g/(kg•d)、1.54g/(kg•d)、2.208g/(kg•d)、0.0035g/(kg•d)灌胃,灌胃体积为8mL/(kg•d)。各组均连续用药7天。

1.2.4标本采集及检测

(1)各组动物于末次灌胃后2 h,用25%乌来糖按4 mL/kg耳缘静脉麻醉。采用心脏穿刺取血,肝素抗凝和枸橼酸钠抗凝,进行血液流变学各项指标的检测。①取肝素抗凝血1mL,加入锥盘仪中,测全血比低、中、高切变率;②取肝素抗凝血离心后的血浆1mL,加入LBY-N6型血液流变仪中,自动测出血浆比黏度;③取肝素抗凝全血1mL,加入红细胞比容管中,3000 r/min离心30 min,然后观察红细胞比容的结果;④采用魏氏法取枸橼酸钠抗凝血1mL,放入垂直血沉管中,在室温18～25℃条件下,1h后观察血沉结果。(2)抽血结束后用空气栓塞法处死动物,迅速剖腹取Cu-IUD接触处子宫组织,未置器家兔取右侧相应部位子宫,10%甲醛固定后,HE染色,石腊包埋切片,光镜观察子宫内膜表浅微血管的变化,分别计数5个100倍视野下子宫内膜表浅微血管总数。(3)取IUD接触处子宫组织200mg,未置器动物取右侧相应部位子宫组织200mg,用眼科剪剪成小碎块,再加入4.5mL生理盐水和0.5mL无水乙醇(1∶9),倒入玻璃匀浆器,按1500r/min研磨8min,使组织匀浆化,制成4%的组织匀浆,将匀浆以3500r/min离心15min,取上清液-70℃保存。采用放射免疫试剂盒测定6-K-PGF1α和TXB2。(4)取IUD接触处子宫组织0.5g,未置器动物取右侧相应部位子宫组织0.5g,用眼科剪剪成小碎块,加入5mL生理盐水,倒入玻璃匀浆器,按1500r/min研磨8min,使组织匀浆化,制成10%的组织匀浆,将匀浆以3500r/min离心15min,取上清液-70℃保存。采用ELISA测定t-PA。

2 实验结果

2.1 血液流变学结果

模型组与空白对照组比较红细胞比容值、全血比黏度(低切、中切、高切)及血浆比黏度的检测的数值明显增高(P

表1SQ复方拆方对置Cu-IUD家兔血液流变学的影响(n=8,±s)

注:与空白对照组比较,P

2.2子宫内膜表浅微血管总数测定结果

模型组家兔子宫内膜浅血管数明显增多,与未置器组(空白对照组、假手术组)比较具有显著性差异(P

表2SQ复方拆方对置Cu-IUD家兔子宫内膜浅表微血管数的影响(±s)

注:与空白对照组比较,P

2.36-K-PGF1α和TXB2测定结果

模型组家兔子宫匀浆6-k-PGF1α水平明显增高,TXB2水平明显降低,6-K-PGF1α/TXB2比值明显升高,空白对照组、假手术组与模型组相比较具有统计学意义(P

表3SQ复方拆方对置Cu-IUD家兔子宫匀浆前列腺素的影响(n=8,±s)

*注:与空白对照组比较,P

表4SQ复方拆方对置Cu-IUD

注:与空白对照组比较,P

2.4t-PA活性测定结果

模型组家兔子宫匀浆t-PA活性较空白对照组、假手术组明显增高(P

3讨 论

宫环出血发生的机理目前尚不十分明了,主要从子宫内膜的形态学及上皮细胞内酶活性的改变、浅表微血管及螺旋动脉的改变、前列腺素和溶酶体的变化,纤溶及凝血和抗凝血系统功能变化、内皮素的改变、子宫内膜局部受体的变化等方面进行探讨。多数研究认为置IUD后子宫内膜形态学改变,及子宫内膜组织型纤溶酶原激活物(t-PA)含量增加,前列腺素(PGs)系统平衡改变是导致置IUD后子宫异常出血的主要机制[1-3]。

本实验中置Cu-IUD家兔也发生了以下变化:在血液流变性异常方面表现为红细胞比容值、全血比黏度(低切、中切、高切)及血浆比黏度的数值明显增高。100倍光镜下观察置器组家兔子宫内膜浅血管数明显增多;在生化因素影响方面表现为子宫匀浆6-k-PGF1α水平明显增高,TXB2水平明显降低,6-k-PGF1α/TXB2比值明显升高,t-PA含量明显增高。

SQ复方由三七和茜草两味药组成,是在长期的临床实践中,经反复筛选而来的。三七善治各种出血症,其止血兼活血祛瘀之功。茜草生用既能活血化瘀,又能止血,炒用可凉血,止血,用于血热所致的各种血证,常用于治疗子宫的不规则出血,无论虚实皆可用之[4]。两药均具有止血和活血化瘀双重作用。

实验结果表明SQ复方及三七、茜草均能明显减少置器后家兔子宫内膜浅血管数,具有减少置Cu-IUD家兔子宫内膜的无菌性炎症作用,同时都有降低红细胞比容和低切、中切、高切下全血比黏度及血浆比黏度的作用,从而调节血液流变性。此外,SQ复方及三七、茜草均能使家兔子宫匀浆6-k-PGF1α/TXB2比值和t-PA活性明显降低,说明均能恢复前列腺素间的动态平衡,降低置IUD家兔子宫内膜局部纤溶活性,影响凝血过程而达到止血的作用,但单用三七或茜草,效果不如SQ复方。由此可见三七、茜草在组成活血化瘀方治疗宫环出血中均发挥了重要作用。

参考文献

[1]伍朝夏,黄翎.宫内节育器引起子宫异常出血的中西医发病机理及治疗的研究[J].陕西中医学院学报,2007,30(1):66-68.

[2]尤昭玲,付灵梅. 益气化瘀法对置CuIUD家兔子宫组织6-K-PGF1α和TXB2含量的影响[J].中国中医药科技,2000(5):322-323.

[3]许丽绵,欧阳惠卿.节育器引起子宫异常出血的机理研究和中医治疗进展[J]. 新中医,2001,23(9):74-75.

[4]沈映君.中药药理学[M].北京:人民卫生出版社,2000:610-613.