标本溶血对ELISA法检测25―OH维生素D3的影响

2019-09-14 版权声明 举报文章

摘要:目的 分析标本溶血对ELISA法检测25-OH维生素D3的影响,以评估溶血标本血浆25-OH维生素D3结果的准确性。方法 将正常标本分为两份,利用物理震荡法制备一份溶血标本,用ELISA竞争法分别检测溶血标本和正常标本血浆25-OH维生素D3水平,比较两组结果的差异;并检测溶血标本游离血红蛋白,分析游离血红蛋白与25-OH维生素D3偏倚的相关性。结果 溶血标本血浆25-OH维生素D3结果显著降低,其血浆游离血红蛋白与25-OH维生素D3偏倚呈正相关。结论 标本溶血影响25-OH维生素D3的检测,检测结果差异与溶血程度呈正相关,临床工作中碰到溶血标本应通知重抽标本检测。

关键词:溶血;ELISA;25羟维生素D

维生素D(Vitamin D,VD)是胆固醇在紫外线作用下转换生成的一种人体必需的脂溶性维生素,在调节机体钙、磷代谢方面发挥着非常重要的作用。近年来,维生素D又被发现与细胞增殖与分化以及免疫功能有着密切的联系。25羟维生素D3(25-OH Vitamin D3,25-OHD3)是维生素D在人体内的主要循环活性形式。临床上常常检测血液中25-OHD3水平,用于评估维生素D的营养状况、诊断儿童VD缺乏以及调整口服维生素D的用量等。目前检测25-OHD3主要方法有色谱法、化学发光法和酶联免疫吸附试验(ELISA),其中ELISA检测25-OHD3由于操作简单、标本用量少、成本低廉以及实用范围广而成为临床上检测25-OHD3最常用的方法。本文主要探讨标本溶血对ELISA法检测25-OHD3水平的影响,以评价溶血标本25-OHD3结果的可靠性。

1资料与方法

1.1一般资料 本院2015年7月~10月儿童保健科、儿科门诊及住院检测25-OHD3的儿童42例,年龄为2岁~6岁,男童15例,女童27例,剔除脂血和黄疸标本。

1.2试剂与仪器 25-OHD3检测ELISA试剂盒为广州菲康生物技术有限公司生产,批号为:B15307;游离血红蛋白检测试剂盒购自北京瑞尔达生物科技有限公司;洗板机和酶标仪均由雷杜公司提供;真空采血管和抗凝剂有湖北金杏科技发展有限公司提供。

1.3标本采集与处理 真空采血法采集研究对象肘静脉血,EDTA-K2抗凝,摇匀,分成两管,一管用于制备溶血标本,然后以4 000 r/min离心5 min分离血浆,不能及时检测的血浆标本置于-20℃冷藏,避免反复冻融。

1.4方法

1.4.1溶血标本的制作 将分出的一管EDTA-K2抗凝血,利用物理震荡方法制备溶血标本。

1.4.2将正常标本和制作的溶血标本离心,取血浆用于检测。

1.4.3按照试剂盒说明书的操作步骤检测溶血标本血浆游离血红蛋白。

1.4.4按照ELISA试剂盒操作步骤同时检测正常标本和溶血标本血浆25-OHD3,每个样本均做平行孔,取均值。高值和低值质控均在控。

1.5统计学方法 用SPSS 17.0软件进行统计分析,计量资料用x±s表示,两配对样本之间的比较采用配对t检验;两组数据之间的相关性采用Pearson直线相关分析。

2结果

2.1正常标本与溶血标本血浆25-OHD 3水平的差异 溶血标本血浆25-OHD3水平(57.6±22.3)nmol/L明显低于正常标本(65.4±19.1)nmol/L,差异具有有统计学意义(t=23.134,P

2.2血浆游离血红蛋白与25-OHD 3偏倚的相关性 偏倚Bias=(正常标本血浆25-OHD 3-溶血标本血浆25-OHD 3)/正常标本血浆25-OHD3×100%。将溶血标本血浆游离血红蛋白与偏倚进行相关分析,结果表明,二者之间呈显著正相关(r=0.6692,P

图1 游离血红蛋白与25-OHD3偏倚的相关性

3讨论

维生素D在体内经肝脏和肾脏代谢后生成1,25-二羟维生素D,后者是维生素D在体内的活性形式,是该磷代谢的的主要调节因子之一,促进钙的吸收是其主要功能之一。研究表明,维生素D在缺钙、佝偻病发生之前数月就已经开始缺乏,因此,定期测定体25-OHD3是预防佝偻病发生的重要措施。Belderbos ME等研究表明[1],低脐带血25-OHD3的婴儿在1年之内更加容易发生病毒性的呼吸道感染。曲辉等也发现[2],体内维生素D不足的儿童更加容易发生反复的呼吸道感染。不难推测,定期测定婴儿与儿童血浆中25-OHD3,及时补充及处理,对提高儿童免疫功能及预防呼吸道感染也有着重要的临床意义。目前,测定25-OHD3的方法主要有色谱法和免疫学方法。临床上用的较多的是ELISA测定25-OHD3。ELISA是结合抗原抗体反应的特异性和酶催化的敏感性建立起来的便捷、经济的免疫学方法,操作简便,实用范围广,但是影响因素较多。不少学者已报道[3-5],溶血可干扰ELISA检测乙肝表面抗原和艾滋抗体的检测,造成假阳性的结果。本研究中,溶血标本血浆25-OHD3明显低于正常标本,而且在一定的溶血程度范围内,检测受干扰的程度与标本中游离血红蛋白呈正相关,说明溶血越厉害,25-OHD3检测值越低。这可用游离血红蛋白吸附于反应孔来解释:本研究检测25-OHD3采用的是竞争法,颜色越深,25-OHD3值越低,因此,当游离血红蛋白吸附于反应孔时,催化TMB产生颜色反应,导致颜色加深,结果是导致检测结果降低。因此,我们在临床检测25-OHD3的工作中,如碰到溶血标本,应该通知临床重抽标本,对于没法重抽的"让步检验"标本,应与临床进行沟通,告知溶血对结果的影响,以免对临床诊断和治疗效果产生不良的影响。

参考文献:

[1]Belderbos ME,Houben ML,Wilbrink B,et al.Cord blood vitamin D deficiency is associated with respiratory syncytial virus bronchiolitis[J].Pediatrics,2011,127(6):e1513-e1520.

[2]曲辉,康凯,付姝丽,等.血清维生素D水平与儿童反复呼吸道感染的关系[J].实用儿科临床杂志,2012,2(22):1738-1739.

[3]何星,黄小明.溶血标本在ELISA二步法中对HBsAg测定结果的影响[J].中国输血杂志,2013,26(9):900-902.

[4]薛俊太,邓翠华,王惟,等.溶血标本在ELISA一步法和二步法中对HBVM测定结果的影响[J].检验医学与临床,2009,6(14):1126-1127.

[5]岳展伊.溶血对ELISA检测HIV抗体影响的临床分析[J].中外医疗,2010,2:34.编辑/丁一

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