HPLC法测定益气温阳胶囊中阿魏酸的含量

作者：陈军，张小兵，李国强，黄少彬

【关键词】 益气温阳胶囊

摘要:目的 建立hplc测定益气温阳胶囊中的有效成分其他阿魏酸含量的方法。 方法 采用色谱柱为c18柱，流动相：甲醇水冰醋酸（体积比25∶75∶0.35），检测波长为320 nm。结果 阿魏酸在0.02~0.20 μg范围内与峰面积呈线性关系，胶囊中阿魏酸的平均回收率为98.8%，rsd=0.97%。结论 方法简便、稳定，能有效地控制该制剂的质量。

关键词:益气温阳胶囊；高效液相色谱法；阿魏酸

abstract: objective to establish a method for the determination of ferulic acid in yiqiwenyang capsules. method samples were extracted with ethyl acetate, and separated on a c18 column（5μm， 250 mm×4.6 mm） using methanol-wateracetic acid (25∶75∶035) as mobile phase. the detection wavelength was set at 320 nm. results the calibration curve of ferulic acid was linear in the range of 0.02~0.20 μg. the average recovery was 98.8% with rsd 0.97% (n=5). conclusions the method could be used for the quality control of yiqiwenyang capsules.

key words:yiqiwenyang capsules; hplc; ferulic acid

益气温阳胶囊系由黄芪、硫磺、当归、川芎等十三味药材加工提取制得的制剂，具有温阳益气，活血通络的功效。由于现行质量标准中没有建立含量测定方法，不利于制剂的质量控制。通过处方分析，我们选择了测定方中臣药当归、川芎的有效成分阿魏酸作为质量控制的指标。据文献报道，阿魏酸具有明显扩张冠状动脉血管、增加冠脉流量、抑制adp诱导的血小板凝聚、增强细胞吞噬功能的作用［1］。本文采用hplc法测定了阿魏酸的含量，为控制该产品的质量提供了依据。

1 仪器与试药

shimadzu spd－10a型高效液相色谱仪；hw-2000工作站。阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（0773－9910）；实验用水为重蒸馏水；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；益气温阳胶囊（广州市花城制药厂提供，批号20020501、20020803、20020902）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为hypersil bds c18 柱（5 μm， 250 mm×4.6 mm），流动相为甲醇水冰醋酸（ 25∶75∶0.35），流速：1.0 ml/min，检测波长为320 nm；柱温为室温。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇配制成每1 ml含阿魏酸0.01 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品30粒，倾出内容物，研细，取6 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙酸乙酯50 ml，水浴中避光加热回流至浸出溶液无色，放冷，取出，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至20 ml棕色瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适用性试验［2］

2.3.1 阴性对照液的制备

按处方量称取不含当归、川芎的各味药材，按工艺制成制剂,再按供试品溶液制备方法配制阴性对照液。

2.3.2 系统适用性

在上述色谱条件下，分别取阿魏酸对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液各10 μl测定，供试品阿魏酸与相邻杂质分离度大于1.5，阴性对照液在与阿魏酸对照品相同保留时间处未见色谱峰，认为不干扰测定。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。见图1。

2. 4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液（0.01 mg/ml）2.0、5.0、100、15.0、20.0 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值（a）为纵坐标，阿魏酸量（m）为横坐标进行线性回归。结果表明，峰面积与阿魏酸量呈良好线性关系，回归方程为a=4595350m+2129.27，r=0.9998，阿魏酸量在0.02～0.20 μg范围内与峰面积呈线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液（0.01 mg/ml），依法连续进样6次，每次10 μl，峰面积结果分别为466820、473352、467155、463808、471712、472915，平均值为469294，其rsd为0.83%。

2.6 稳定性试验

取同一批样品（批号：20020902 ）避光放置，在0、1、2、3、6、12 h分别进样10 μl，依法测定含量，结果rsd为1.12%，表明供试品在避光放置条件下12 h内较稳定。

2.7 回收率试验

采用加样回收法，精密称取已知含量的益气温阳胶囊，分别加入一定量的阿魏酸对照品溶液（0.01 mg/ml），按样品测定方法测定含量，结果见表1。表1 阿魏酸回收率测定结果（略）

2.8 样品含量测定

取对照品溶液（0.01 mg/ml）和供试品溶液，用045 μm微孔滤膜过滤,各进样10 μl，读取峰面积,按外标法计算含量，结果见表2。表2 3批益气温阳胶囊阿魏酸含量（略）

3 讨论

3.1 有关制剂中阿魏酸的高效液相测定方法已有多篇文献［3-4］ 报道。曾参照文献［4］的方法，采用甲醇冰酸酸(体积比45∶55) 为流动相，结果供试品中阿魏酸与相邻杂质分离度小于1.5。本文将流动相组成调整为甲醇水冰醋酸（体积比25∶75∶0.35），供试品中阿魏酸与相邻杂质分离度大于1.5，阿魏酸峰峰形较好。

3.2 阿魏酸对光不稳定，配成溶液后及样品的制备过程中注意避光，否则会引起阿魏酸的含量降低。

3.3 用高效液相色谱法测定阿魏酸的含量，使用简单的体系就达到分离测定的目的，方法稳定，结果准确，可作为本品的质量控制方法。

参考文献:

［1］郑虎占. 中药现代研究与应用（第一卷）［m］.北京：学苑出版社，1997：910.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［s］.化学工业出版社，2000：附录38-40.

［3］王宝.中成药质量标准与标准物质研究［m］.北京：中国医药科技出版社，1994： 439.

［4］刘义梅.hplc法测定复方银杏口服液中阿魏酸的含量［j］.中药材，2005，28（2）：147.