晚期乳腺癌患者化疗前后血清Th1/Th2细胞因子变化趋势及意义

[摘要] 目的 了解晚期乳腺癌患者化疗中Th1/Th2细胞因子的变化趋势，探讨Th1/Th2的变化与化疗近期效果的关系。 方法 使用流式微阵列术检测乳腺癌患者化疗前1周内、第一疗程第20天、第二疗程第20天、第四疗程第20天Th1（IL-2、TNF、IFN-γ）/Th2（IL-4、IL-6、IL-10）细胞因子的浓度，同时采用RECIST标准评价化疗近期疗效。 结果 126例乳腺癌患者化疗有效率为59.52%。化疗有效患者中血清Th1类细胞因子浓度逐渐升高，其中IL-2、TNF的增高程度有统计学意义（P=0.005和0.001）。Th2类细胞因子在化疗过程中均逐渐下降，其中IL-4、IL-6的下降程度有统计学意义（P=0.01和0.001）。化疗无效病例中，血清Th1类细胞因子未见上升趋势。而Th2类细胞因子则随着化疗的进行均呈现升高趋势，其中IL-4、IL-6升高的程度有统计学意义（P=0.001和0.005）。 结论 晚期乳腺癌患者存在Th1/Th2失衡，无效化疗会促进Th1/Th2失衡，而有效化疗可逆转Th1/Th2失衡。

[关键词] 晚期乳腺癌；Th1/Th2细胞因子；化疗

[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）09-0022-03

近年来辅T淋巴细胞1（helper T lymphocyte 1，Th1）/辅T淋巴细胞2（helper T lymphocyte 2，Th2）细胞比例变化与肿瘤免疫的关系已越来越受到人们的重视。已知Th1类细胞因子包括IL-2、TNF、IFN-γ等，主要参与细胞免疫；Th2类细胞因子包括IL-4、IL-6、IL-10等，主要与体液免疫有关。细胞免疫是抗肿瘤免疫的主要机制，体液免疫仅在某些情况下起协同作用。Th1/Th2相互调节，相互制约，处于一种动态平衡。如果Th1和Th2极化发生偏移，容易诱发病理改变[1]。本研究应用流式细胞仪检测乳腺癌患者化疗前及化疗中血清Th1/Th2细胞因子的水平，了解化疗中Th1/Th2的变化趋势，探讨Th1/Th2的变化与化疗近期效果的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料

2010年1月～2013年6月我院初诊复发转移性乳腺癌病例共157例，所有病例均经组织病理学检查后确诊。其中126例患者接受了2个疗程以上的化疗。126例患者的中位年龄55（39～78）岁，年龄≥60岁的占40.2%。骨转移56例（44.44%），肺转移33例（26.19%），肝转移28例（22.22%），多发转移34例（26.98%）。在治疗前1周内，第一疗程第20天、第二疗程第20天、第四疗程第20天采全血2 mL检测Th1（IL-2、TNF、IFN-γ）/Th2（IL-4、IL-6、IL-10）细胞因子的浓度。

1.2 检测方法

1.2.1 主要试剂和仪器 试剂为人细胞因子（IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ）重组蛋白冻干粉（BD公司）。实验仪器为FACS Calibur型流式细胞仪（BD公司）。

1.2.2 检测步骤 首先按操作规程制作Th1/Th2细胞因子标准品和捕获微球，之后将这些试剂和待测样品加入相应的试管准备孵育和检测。为了校准流式细胞仪和定量待测样品，每次试验都要求同时设置标准组和质控组。①加入50 μL连续稀释的标准液到各标准管；②加入50 μL各种待测样品到相应待测管；③室温下避光孵育3 h；④每管加1 mL洗涤缓冲液并离心，200×g，5 min；⑤小心吸出各检测管中的上清，弃去；⑥每管加300 μL洗涤液，重悬微球沉淀物；⑦振荡试管，立即上流式细胞仪检测、分析。

1.3 化疗方案及评价方法

所有患者均为一线化疗，卡培他滨（1.0 g/m2，bid，d1～14）+多西他赛（75 mg/m2，d1）方案化疗47例（37.30%），吉西他滨（1000 mg/m2，d1、d8）+紫杉醇（175 mg/m2，d1）方案化疗34例（26.98%），单药多西他赛（75 mg/m2，d1）方案化疗20例（15.87%），紫杉醇（175 mg/m2，d1）+卡铂（AUC=6，d1）方案化疗25例（19.84%）。疗效参照RECIST实体瘤疗效标准进行评价，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）、进展（PD），有效率（RR）=CR+PR，每两周期评价一次疗效。

1.4 统计学方法

应用SPSS17.0软件包进行统计学分析，Th1/Th2细胞因子浓度用均数±标准差（x±s）表示。细胞因子化疗前后的比较采用重测数据的方差分析，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

126例患者共接受542个疗程化疗，中位治疗4个疗程。化疗总体有效率为59.52%，其中CR 5例，占3.97%；PR 70例，占55.56%；SD 35例，占27.78%；PD 16例，占12.70%。

在75例化疗有效的病例中，血清Th1类细胞因子IL-2、TNF和IFN-γ浓度在化疗过程中均逐渐升高，其中IL-2、TNF的增高程度有统计学意义（P=0.005和0.001）。与之相反的是，血清Th2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10在化疗过程中均逐渐下降，其中IL-4、IL-6的下降程度有统计学意义（P=0.01和0.001）。见表1。

在51例化疗无效病例中，血清Th1类细胞因子IL-2、TNF、IFN-γ随着化疗的进行均未见上升趋势，P值分别为0.80、0.81和0.86。而Th2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10则随着化疗的进行均呈现升高趋势，其中IL-4、IL-6升高的程度达到统计学意义（P=0.001和0.005）。见表2。

3 讨论

现已知，辅T细胞（helper T lymphocyte，Th）根据其功能不同分为Th1和Th2两个亚群。Th1主要通过分泌IL-2、TNF、IFN-γ、LT来介导细胞免疫和炎症反应，抗病毒、肿瘤和细胞内寄生菌感染，参与抑制物排斥；Th2主要通过分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13来促进B细胞增殖，产生抗体和超敏反应。肿瘤发生后，细胞免疫是抗肿瘤的主要方式，而体液免疫通常仅在某些情况下起协同作用[2]。研究表明以IL-2、IFN-γ介导的Th1为主的细胞免疫在清除肿瘤及获得记忆性细胞免疫中发挥重要作用[3]。一旦Th1/Th2细胞失衡，Th2细胞及其分泌的细胞因子IL-4、IL-10等占优势，则提示机体抗肿瘤反应受抑制，机体的抗肿瘤免疫将受到严重干扰[4]。

晚期肿瘤患者免疫功能处于抑制状态，调节性T细胞增多、效应T细胞减少、抗原提呈细胞功能低下。化疗药物易致淋巴细胞减少，且通过诱导凋亡杀死靶细胞，而凋亡的肿瘤细胞曾被认为不能有效激活免疫细胞，甚至能诱发免疫耐受，因此化疗之后机体的免疫功能低下。Beyer等研究[5]发现慢性淋巴细胞性白血病患者予以氟达拉滨治疗后，其体内Treg细胞数量明显减少；吉西他滨与奥沙利铂等联合治疗转移性结肠癌患者Tr细胞也明显减少[6]。因此我们认为，化疗可能使肿瘤组织内的APCs负载更多的肿瘤抗原，并给肿瘤内的CD8+T细胞提供协同刺激信号。有效的化疗能够导致肿瘤的减灭，从而改变效应T细胞与靶细胞的比例。一些化疗药，如多柔比星和甲氨蝶呤均具有上调Fas配体的转录作用[7]；还有些化疗药通过改变凋亡途径，导致不仅不会破坏机体免疫功能，反而有可能对免疫系统起到增益作用。

本研究75例乳腺癌患者化疗后有效的病例Th1类细胞因子IL-2、TNF、IFN-γ的浓度出现不同程度的升高，其中IL-2、TNF升高较化疗前比较差异有统计学意义（P < 0.05）；Th2类细胞因子的浓度出现明显降低，其中IL-4、IL-6降低程度较化疗前差异有统计学意义（P < 0.05），以上提示化疗有效病例患者的Th1类细胞因子整体升高、Th2类细胞因子整体下降的趋势。这种变化趋势使得治疗前失衡的Th1/Th2比例关系得到纠正。而51例化疗无效病例的Th1/Th2变化趋势与上述相比正相反，此种现象与马学真等[8]的研究基本一致，说明无效化疗对肿瘤负荷无改变，使得本已失衡的Th1/Th2比例关系进一步向Th2偏移；有效化疗后，降低了肿瘤负荷，减少了肿瘤源性的免疫抑制，促进Th2向Th1偏移，从而提高了患者的细胞免疫功能。

研究证实，晚期乳腺癌患者化疗前后细胞因子Th1/Th2发生了漂移，能否根据化疗前后Th1/Th2细胞因子变化特点，进行针对性的免疫治疗，以修复Th1/Th2类细胞因子的免疫失衡，这也是我们需要进一步研究的课题。

[参考文献]

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[2] Knutson KL，Disis ML. Tumor antigen specific T helper cells in cancer immunity and immunotherapy[J]. Cancer Immunol Immunother，2005，54（8）：721-728.

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[4] Agarwal A，Agrawal U，Verma S，et al. Serum Th1 and Th2 cytokine balance in patients of superficial transitional cell carcinoma of bladder pre- and post-intravesical combination immunotherapy[J]. Immunopharmacol Immunotoxicol，2010，32（2）：348-356.

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[6] Chapoval S，Dasgupta P，Dorsey NJ，et al. Regulation of the T helper cell type 2 （Th2）/T regulatory cell （Treg） balance by IL-4 and STAT6[J]. J Leukoc Biol，2010，87（6）：1011-1018.

[7] Yang S，Haluska FG. Treatment of melanoma with 5-fluorouracil or dacarbazine in vitro sensitizes cells to antigen-specific CTL lysis through perforin/granzyme- and Fas-mediated pathways[J]. J Immunol，2004，172（7）：4599-4608.

[8] 马学真，姚远，王斌. 晚期肺癌患者胸水及外周血Th1、Th2细胞功能的分析及意义[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志，2004，11（3）：212-214.

（收稿日期：2014-01-07）