HPLC法测定鼻敏清丸胶囊中木兰脂素的含量

作者：李坚，周杰，刘志雄，许冬冬，赖科英

【摘要】 目的 建立鼻敏清丸胶囊中木兰脂素的含量测定方法。方法　采用hplc法：色谱柱为diamonsil c18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈?四氢呋喃?水(体积比42∶2∶56)；流速为1.0 ml/min；柱温为35 ℃；检测波长为278 nm。结果　木兰脂素的质量浓度在1.856～46.40 μg/ml范围内呈良好线性关系，平均回收率为98.34%，rsd为1.53%。结论　本方法准确可靠、重现性好，可用于鼻敏清丸胶囊的质量控制。

【关键词】 hplc法；鼻敏清丸胶囊；木兰脂素；含量测定

abstract:objective to establish an hplc method for the assay of magnolin in biminqingwan capsules. methods the analytical column was diamonsil c18 (250 mm×4.6 mm，0.5 μm). the mobile phase consisted of ch3cn?c4h8o?h2o(42∶2∶56). the flow rate was 1.0 ml/min and column temperature at 35 ℃. the detection wavelength was 278 nm. results the magnolin linearity range was 1.856-46.40 μg/ml. the average recovery was 98.34%, and the rsd was 1.53%. conclusion this method was simple, accurate and can be used for the quality control of biminqingwan capsules.

key words:hplc; biminqingwan capsules; magnolin; content determination

鼻敏清丸胶囊由辛夷、广藿香、苍耳子、等组成，具有提高机体抗病能力，增强消炎、抗菌作用，去瘀生新，迅速改善鼻腔内各组织之新陈代谢及血液循环，排除鼻腔内积液、浓涕之功效，临床用于 治疗 急慢性鼻炎、过敏性鼻炎、前额胀痛、嗅觉减退及讲话带有鼻音等症状［1］。有关该制剂质量控制方面的研究尚未见 文献 报道。辛夷为方中君药之一，有散风寒、通鼻窍的作用，而木兰脂素为其主要有效成分，具有抗炎、抗过敏作用［2］。本实验在 参考 文献［3-5］的基础上，采用hplc法测定鼻敏清丸胶囊中木兰脂素的含量，为进一步提高该制剂的质量标准提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪lc?10atvp泵、scl?10avp系统控制器、 spd?10avp紫外?可见检测器、cto?10asvp柱温箱、sil?20a自动进样器、lcsolution工作站、auw200d十万分之一 电子 天平（日本岛津）。dl?360a超声波清洗器［上海之信仪器有限公司，功率250 w，频率(35±5%) khz］。

1.2 试药与试剂

鼻敏清丸胶囊（香港北京制药厂提供，批号h1210、h0211、g0102）；鼻敏清丸胶囊阴性样品（香港北京制药厂提供）；木兰脂素对照品（ 中国 药品生物制品检定所，批号为110882?200605）；乙腈和四氢呋喃均为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性试验

色谱柱为diamonsil c18柱（250 mm×4.6 mm，

5 μm）， 流动相为乙腈?四氢呋喃?水 （体积比42∶2∶56）， 检测波长为278 nm， 流速为1.0 ml/min； 柱温为35 ℃。理论板数按木兰脂素峰 计算 ，应不低于9 000，拖尾因子为1.01，保留时间约为17.48 min，木兰脂素与其它组分的分离度大于1.5（为2.0），阴性样品不干扰样品测定，色谱图见图1。

2.2 标准曲线的制备

精密称取经五氧化二磷干燥的木兰脂素对照品18.56 mg，置100 ml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（质量浓度为185.6 μg/ml）。分别精密吸取对照品贮备液0.1、0.3、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件，取不同质量浓度对照品溶液各20 μl注入液相色谱仪中进行测定，以对照品的峰面积（a）为纵坐标，对照品质量浓度（c）为横坐标，绘制标准曲线，求得木兰脂素回归方程：a=12161c+10151，r=0.999 9，线性范围：1.856～46.40 μg/ml。

2.3 供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品内容物约1.0 g，精密称定，置具塞圆底烧瓶中，精密加甲醇20 ml，密塞，称定重量，加热回流处理1 h ，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3 ml，加于中性氧化铝柱（100～200目，2 g ，内径10 mm ，湿法装柱，用甲醇预洗）上，用甲醇20 ml洗脱，收集洗脱液，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇均，用微孔滤膜0.45 μm过滤，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

取不含辛夷的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备。

2.5 精密度试验

取质量浓度为18.56 μg/ml的木兰脂素对照品溶液20 μl连续测定5次，记录峰面积并 计算 rsd为0.33%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液（批号h0211）在0、2、4、6、8、10、12 h分别进样20 μl，记录峰面积，结果木兰脂素峰面积的rsd为1.88%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批（批号h0211）样品6份，按样品提取法提取，测定，结果木兰脂素平均含量为1.102 mg/粒，rsd为1.85%，表明本方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

已知含量样品（批号h0211）约0.5 g，精密称取，共6份，精密加入木兰脂素对照品溶液8 ml（185.6 μg/ml），按“2.3”项方法制备样品，测定。结果木兰脂素平均回收率为98.34%，rsd为1.53%，见表1。表1 加样回收率试验结果（略）

2.9 样品含量测定

取3批品分别按“2.3”项下操作，制备不同批号的供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果见表2。表2 样品含量测定结果（略）

3 讨 论

3.1 检测波长的选择

取木兰脂素对照品溶液和供试品溶液，用甲醇做参比，用紫外可见分光光度计在210～400 nm波长范围进行扫描，结果二者均在278 nm处有最大吸收，与 中国 药典2005版的检测波长一致［1］，故选择278 nm为测定波长。

3.2 提取方法的考察

本品为复方中药制剂，化学成分复杂，为获得样品中木兰脂素的最佳提取方法，本实验对提取溶剂、提取方法和提取时间进行了考察。分别对采用乙酸乙酯、甲醇为提取溶剂，超声提取20、30、40 min及加热回流提取1、2 h，超声提取与加热回流提取的提取率进行了比较。结果表明，乙酸乙酯为溶剂时提取率较低，超声提取的提取率比加热回流提取的提取率低，加热回流1 h与2 h样品测得的含量无显著差异。因此，本文选择甲醇作为溶剂，提取方法为加热回流1 h。

3.3 流动相的选择

参考 相关 文献 ［1,3-5］试用了两种流动相系统：乙腈?水和乙腈?四氢呋喃?水。结果表明，乙腈?四氢呋喃?水流动相分离效果较好，进一步考察其比例后确定42∶2∶56（体积比）的分离效果最佳，可使木兰脂素与其它组分分离完全，且保留时间适中，分离度达1.5以上，峰形较好。

3.4 柱温的选择

对20、30、35、40 ℃等柱温进行了考察，结果35 ℃为最佳柱温。柱温过高时，木兰脂素峰保留时间变短，但分离效果较差；柱温过低时，柱效过低且分析时间周期过长。

本实验采用hplc法测定鼻敏清丸胶囊中木兰脂素的含量，操作简便，结果准确、可靠，精密度高，分离度好，可用于该制剂的质量控制。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［s］.北京：化学 工业 出版社，2005：30-31;111-112;126-127.

［2］李小莉，张永忠.木兰脂素抗炎抗过敏作用的实验研究［j］.中草药，2002，33（11）：1014-1015.

［3］于艳，韩毅.hplc法测定鼻炎灵丸中木兰脂素的含量［j］.中华 现代 中医学杂志，2007，3（1）：3-5.

［4］吕洁，孟祥军，邹春阳，等.hplc法测定鼻通宁滴剂中木兰脂素的含量［j］.辽宁中医药大学学报，2007，9（4）：159-160.

［5］王丽英，王勇敢.rp－hplc法测定辛芩口服液中木兰脂素的含量［j］.