bcr/abl融合基因与慢性粒细胞白血病急变

摘要：目的 探讨bcr/abl融合基因的表达在CML急变中的意义。方法 采用荧光定量逆转录多聚酶链反应（FQ-PCR）技术，对9例CML患者急变前后的血或骨髓进行bcr/abl检测。结果 CML患者从慢性期到急变期往往伴随着bcr/ablmRNA水平的明显升高。结论 bcr/abl是CML发病的分子基础，定量检测bcr/abl融合基因对于CML急变的诊断，疗效观察及预后有重要意义。

关键词：bcr/abl融合基因；PCR；CML；急变

慢性粒细胞白血病（CML）是一种起源于造血干细胞的血液系统恶性疾病，具有特征性的Ph染色体（philadelphia chromosome），形成的bcr/abl融合基因编码的具有异常的酪氨酸激酶活性的P210bcr/abl融合蛋白与CML的发病有关。根据其临床病程可分为慢性期（CP）、加速期（AP）、急变期（BP），BP是CML的终末阶段，患者除死于其他非本病原因外，最终都会发展到急变期，以细胞的增殖率增加，分化障碍、对当前治疗耐受且伴有克隆演化为特征[1]。现普遍认为，CML的急变涉及多基因多调控的异常。本实验采用（FQ-PCR）技术，对9例CML-BP患者急变前后的bcr/ablmRNA的水平检测，结合其他相关实验室数据分析，以探讨bcr/abl融合基因的表达在CML-BP的诊断与预后判断中的意义。

1资料与方法

1.1 一般资料 所有9例患者均来自本院血液科2011年6月～2014年6月收治的CML患者，其中男性5例，女性4例，平均年龄45.5岁。确诊CML不同时间后出现急性变的临床表现。通过临床表现，血象，骨髓象及组织化学染色确诊CML-BP。

1.2 bcr/abl融合基因检测 采用FQ-PCR方法定量检测CML-BP患者前后bcr/abl融合基因。标本采集为新鲜骨髓3ml或静脉血5ml，以EDTA抗凝。

1.3 外周血及骨髓图片镜检[2]

1.4 结果处理 CML患者前后细胞形态学改变及bcr/ablmRNA的水平比较

2结果

2.1 外周血涂片结果 CML-CP：白细胞数增高，主要为中性中、晚幼和杆状核粒细胞，原始细胞（I型+Ⅱ型）≤5%～10%，嗜酸、嗜碱粒细胞增多，可有少量有核红细胞。

CML-BP：原始粒细胞（I型+Ⅱ型）（或原淋+幼淋、或原单+幼单）在外周血≥20%；外周血中原始粒+早幼粒细胞≥30%。

2.2 骨髓涂片结果 CML-CP：增生明显--极度活跃，以粒系增生为主，中、晚幼粒和杆状核粒细胞增多，原始细胞（1型+Ⅱ型）≤10%。

CML-BP：原始粒细胞（I型+Ⅱ型）（或原淋+幼淋、或原单+幼单）在骨髓中≥20%；骨髓中原始粒+早幼粒细胞≥50%。

2.3 bcr/ablmRNA检测结果 CML-CP：（2～4）*106拷贝/ml，平均2.85*106拷贝/ml；

CML-BP：（6～20）*106拷贝/ml，平均10.66*106拷贝/ml。

3讨论

慢性粒细胞白血病（CML）呈现典型的费城（Ph'）染色体，即9q34的C-ABL原癌基因与22q11的BCR基因融合而成t（9；22），转录并翻译成具有高酪氨酸激酶活性的bcr/abl融合蛋白（P210）。CML的发生与该P210蛋白的高酪氨酸蛋白激酶活性密切相关。CML急变通常有三种情况：急性髓样变、急性淋巴细胞变、急性巨噬细胞变。

本实验表明bcr/abl基因表达水平与CML的急变有关。CML患者从慢性期发展到急性期，往往伴随着bcr/ablmRNA水平的明显升高，bcr/abl基因的表达状况和CML细胞的成熟度呈负相关，而且这一分子生物学改变可发生于细胞形态学变化之前[3]。另有实验表明：bcr/abl是一种抑制凋亡的基因，能通过抑制细胞凋亡，而使细胞数量增加[4]，基因组的内在不稳定性也随之增加，这样细胞就容易发生第二次突变，从而使CML想急性期发展。

另外，p53、Rb、p16这些抑癌基因的分子改变在CML分别向不同的急变方式进展是起着重要作用，而且每一种抑癌基因单独发生突变时可驱使CML向各自定系细胞发生急变[5]。

另外大量研究表明，DNA的修复损伤与细胞生物学改变（凋亡受阻、分化障碍、耐药发生等）在CML急变中都起着重要作用。

综上所述：CML是一种异质性疾病，其急变涉及多方面的改变。在分子水平，涉及癌基因、抑癌基因以及DNA修复功能等的异常；在细胞水平，涉及恶性白血病细胞的凋亡受阻、分化障碍以及耐药发生等。而bcr/abl融合基因的大量表达和由此引起的继发性基因突变在CML急变中起主要作用，加强bcr/ablmRNA的检测可为CML-BP早期诊断和治疗提供有力证据。

参考文献：

[1]Thevle J，Kvasnicka HM，Schmiu-Graeff A，et al.Bone Marrow Hiotopathology Predicting Blast Cnsis in Chronic Myeloid Leukemia[J].Acia Hacmatol，2001，105（1）：241-246.

[2]陆道培，童春容.慢性粒细胞白血病的诊断和疗效标准.张之南主编.科学出版社，1998；219-227.

[3]bcr2abl chimeric mRNA expression in tumor cells of patients with chronic myeloid leukemia precedes disease progression[J].Blood，1995 ，86 ：2371-2378.

[4]Bedi A，Zehnbauer B ，Barber J，et al. Inhibition of apoptosis by bcr2abl in chronic myeloid leukemia[J].Blood ，1994 ，83 ：2038-2044.

[5]Serra A et al[J].Br J Haematol，1995，91（3）：625-629.编辑/许言