Tween―20在免疫组化染色中的应用体会

【摘 要】目的：探讨表面活性剂Tween-20对免疫组化制片的影响。方法：使用加入 Tween-20的PBS缓冲液以及未加入Tween-20的PBS缓冲液分别对免疫组化切片进行冲洗，观察染色结果，并复习相关文献。结果：PBS-Tween-20缓冲液冲洗的免疫组化切片抗体用量偏少，无需用吸水纸擦拭，非特异性染色减少。结论：应用PBS-Tween-20缓冲液冲洗免疫组化切片，不仅节省抗体的用量，节约医疗成本，并且使组织切片清洁得更干净，避免了非特异性染色的发生，值得推广。

【关键词】Tween-20；免疫组化；非特异性染色

表面活性剂Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物，亲水性强，为一种非离子型去污剂，能增加乳剂的稳定性。也可作 2006―2012年龙里县流行性腮腺炎疫情资料分析 神经阻滞联合甲钴胺注射液治疗带状疱疹后神经痛效果观察 保定市2004～2011年急性弛缓性麻痹病例监测系统运转情况分析 早产儿经下肢置入PICC20例的方法探讨 129例2型糖尿病患者合并恶性消化道肿瘤临床分析 绝经后妇女取宫内节育器92例临床分析 高血压性脑出血156例临床分析 蒙古族老年人慢性房颤（AF）319例抗凝治疗分析 浅谈产后出血的原因及防治措施 80例老年口腔修复临床分析 不育不孕症夫妇生殖道分泌物衣原体和支原体检测结果分析 头静脉修剪高位重建动静脉内瘘11例 老年获得性肺炎的临床特点及预后分析 2012年昆明市五华区居民死亡原因分析 探讨钞票对健康促进的影响 呼吸内科感染常见病原菌与相关因素 南宁市吴圩镇健康人丙氨酸氨基转移酶参考值的制订 老年恶性骨肿瘤54例误诊原因分析 带状疱疹病人的健康教育方式及效果评价 承┮┪锏脑鋈芗痢＞匝榉⑾置庖咦榛讨屑尤肓ween-20的PBS缓冲液冲洗切片，能够使切片更清洁，非特异性染色减少。本文对分别经过PBS-Tween-20缓冲液及PBS缓冲液冲洗的免疫组化切片进行对照，并将应用体会介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料

PBS磷酸盐缓冲液（0.01mol/L，PH7.2-7.4）、Tween-20、500ml容量瓶、

吸水纸，均购自福建迈新试剂有限公司。

1.2 方法

取500ml已配制好的PBS磷酸盐缓冲液置容量瓶中，加入250μl Tween-20，充分混匀，待用。现将经抗原修复后的组织切片分成3组（A、B、C）放入蒸馏水中备用。

A组：常规PBS磷酸盐缓冲液冲洗后，专用免疫组化油笔划圈。

B组：PBS-Tween-20缓冲液冲洗后，专用免疫组化油笔划圈。

C组：专用免疫组化油笔划圈后，PBS-Tween-20缓冲液冲洗。

将3组处理过的切片进行同样的免疫组化后续操作。

2 结果

A组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏多，无需用吸水纸擦拭，同时还有个别组织边缘干燥，发生了边缘效应。

B组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏少，但每次滴加抗体前均需用吸水纸擦拭，未发生组织边缘干燥。

C 组 在抗体孵育过程中，抗体用量偏少，无需用吸水纸擦拭，未发生组织边缘干燥。

3 讨论

本实验室免疫组化染色标本例数多，量大，半个工作日出片，由于一抗、二抗的孵育时间以及显色时间比较固定，这就要求在操作过程中尽量减少操作时间，并且尽可能地降低非特异性染色。A组虽然免疫组化油笔的使用节省了时间，但只能防止滴加的试剂不向四周流失，如果组织偏大就无法保证一次性将滴加的试剂完全覆盖整个组织，只有增加抗体用量将组织全部覆盖，抗体用量偏多，并且可能导致抗体覆盖不均，增加边缘效应、非特异性染色等。B组PBS-Tween-20缓冲液冲洗后，玻片上含有Tween-20，用吸水纸擦拭后使用免疫组化油笔划的圈不能与玻片充分结合，再次冲洗后划痕被Tween-20溶解，不能保持完整性，需用吸水纸另外擦拭干水分，耽误时间。相比之下C组划圈后和玻片充分结合，再用PBS-Tween-20缓冲液冲洗，划痕不被溶解，将其倾斜在吸水纸上，划痕能保持完整性，不用吸水纸另外擦拭，节省不少时间。

Tween-20为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸脂和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸脂的混合物。由于其分子中有较多的亲水性基团（聚氧乙烯基），故亲水性强，具有乳化、扩散、增溶、稳定等性能，是一种常用的非离子性去垢剂和表面活性剂，对人体无害、无刺激性，常用为医药品的乳化剂、扩散剂和稳定剂。用其多次冲洗能够均匀覆盖整张切片，如同在切片上增加了一层液体膜，不会使组织和切片空白区形成明显的分界线，在离组织边缘

该方法在本实验室已使用1年余，与不加Tween-20的PBS缓冲液做过多次对照实验，发现Tween-20对免疫组化染色结果无影响，可以放心使用。且PBS-Tween-20缓冲液配制方法简单，2000ml每包的PBS加入1ml的Tween-20，浓度不太高，价格也便宜，同时各种抗体的价格昂贵，这样节省了抗体的用量，节约医疗成本，值得推广。

参考文献：

[1] 周晓鸽.免疫组化染色过程中存在的问题及对策[J].诊断病理学杂志，2004，1（4），211-213.

[2] 何小艳，吴宁等.防止免疫组化切片干燥的新方法[J].诊断病理学杂志，2011，5（18），389.