可见分光光度法测定酱菜中亚硝酸钠含量

摘 要：本次实验目的是采用可见分光光度法来测定市场酱菜中的亚硝酸钠含量。采用的方式，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化反应后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的物质，于540nm处测定吸光度。此方法的优点在于操作简便、灵敏度高、稳定性好，适用于测量酱菜中亚硝酸盐的含量。

关键词：酱菜；亚硝酸盐；可见分光光度法

0 前言

人们在日常生活中最常见的一种腌制蔬菜就是酱菜，长期食用会对人体造成一定的危害，越来越多的检测实验室开始开展亚硝酸盐含量的检测项目，于是选择准确经济并且快速又操作简便的检测方法就显得十分重要[1]。

亚硝酸盐是国际公认的致癌物质，因为它具有防腐剂和增强风味的作用往往被添加到食品中，但是添加过量的量会损害人体。本文采纳可见分光光度法来测定市场中酱菜亚硝酸钠的含量，该方法具有操作简单、花费少、耗时短、线性关系好等诸多优点。

1 实验内容

1.1 实验步骤

1.1.1 原理

实验在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化反应，然后再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色物质，该紫色物质最大吸收波长为540nm，且色泽深浅与亚硝酸盐含量在一定范围内呈正比，通过与标准对照确定含量[2]。

1.2 实验药品与仪器

1.2.1 实验药品

乙酸锌溶液，批号（2016012）；亚铁氰化钾溶液，批号（2016074）；饱和硼砂溶液，批号（160120）；对氨基苯磺酸溶液，批号（20151124）；盐酸萘乙二胺溶液（2g/L），批号（20150922）；亚硝酸钠标准溶液（250μg/ml），批号（20160102）；亚硝酸钠标准使用液（5.0μg/ml），批号（20151222）。

1.2.2 实验仪器

使用该法所需的仪器有：可见分光光度计（上海美普达仪器有限公50006567），精密电子天平（上海美普达仪器有限公司7292838），硅胶干燥器，100ml容量瓶、500ml容量瓶，50ml具塞比色管。

1.3 样品预处理

实验前，称取被粉碎均匀的样品8.0克，置于50ml烧杯中，然后加入硼砂饱和溶液12.5ml，充分搅拌均匀，备用。在500ml的烧杯加入70℃的热水300ml，溶解上述备用的饱和溶液，再在80℃热水中水浴15分钟，然后慢慢放冷到与室温一样的温度，放冷，在搅拌的同时加入5ml的亚铁氰化钾溶液，充分摇匀后再加入乙酸锌溶液5ml，目的是为了使蛋白质沉淀，避免对实验的影响。静置半个小时，除去上层脂肪，然后过滤，除去初滤液，再放入500ml的容量瓶中，进行最后的定容。

1.4 样品的测定

吸取40ml的样品溶液放入50ml的具塞比色管中，加入2ml的对氨基苯磺酸（4g/L）溶液，充分摇匀。放置5分钟后，再加入lml的盐酸萘乙二胺（2g/L）溶液，添加纯化水至刻度线处，充分摇匀，室温下静置15分钟，然后置于波长540nm处测吸光度。与此同时，做空白试验。

2 结果与讨论

2.1 最大吸收波长的选择

在50ml的容量瓶中加入精密吸取的亚硝酸钠标准使用液（5.0μg/ml）2ml，然后再加入对氨基苯磺酸（4g/L）溶液2ml，摇匀，静置5分钟。5分钟后再分别加入乙二胺（2g/L）溶液1ml，加水至刻度线，轻轻摇匀，在25℃的环境下放置15分钟后，用lcm的比色皿在波长400到600nm处，用空白试剂作为参比，测定其吸光度，测量结果为0.22，0.32，0.47，0.61，0.5，结果显示亚硝酸盐的最大吸收波长是540nm。

2.2 最佳显色剂用量的确定

精密量取5μg/ml的亚硝酸钠标准溶液2ml，分别加入6只规格均为50ml的具塞比色管中。然后6只具塞比色管中再分别加入配制好了的对氨基苯磺酸溶液（4g/L）2ml，摇匀，静置5分钟，静置后逐个加入萘乙二胺溶（2g/L）0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml，加水至刻度，轻轻摇匀，在25℃的环境下静静的放置15分钟，在波长540nm处进行扫描，用空白试剂作为参比，测量结果为0.27，0.285，0.32，0.31，0.285，0.27。据此得出最佳显色剂用量为1ml。

2.3 最佳反应温度对吸光度的确定

精密量取5ug/ml的亚硝酸钠标准溶液2ml，分别加入6只规格均为50ml的具塞比色管中，然后6只具塞比色管中分别加入配制好了的对氨基苯磺酸溶液（4g/L）2ml，摇匀，静置5分钟，静置后再加入盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）1ml，加水到刻度线，摇匀，静置时间为15分钟，分别在环境温度为10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃下，在波长为540nm处进行测定，并且以空白试剂为参比，测量的结果为0.21，0.265，0.315，0.33，0.32，0.3，0.29。得出其最佳反应温度为25℃。

2.4 最佳反应时间的确定

精密量取5μg/ml的亚硝酸钠标准溶液2ml，分别加入6只规格为50ml的具塞比色管中。往50ml的具塞比色管中分别加入对氨基苯磺酸溶液（4g/L）2ml，轻轻摇匀，静置时间为3到5分钟，静置后再加入盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）1ml，加水到刻度线，轻轻摇匀，在温度环境为25℃的情况下分别静置5min、10min、15min、20min、25min、30min，在540nm处测定吸光度，以空白试剂为参比，测量结果为0.29，0.31，0.325，0.31，0.3，0.26。结果反映在15分钟时吸光度最大。

2.5 标准曲线的绘制

取9只相同规格为50mL具塞比色管，分别滴加亚硝酸钠标准使用液（5.0μg/ml）0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml。然后分别加入对氨基苯磺酸溶液（4g/L）2ml，轻摇，静置5分钟，静置过后再加入盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）1ml，加水到刻度线，摇匀，在25℃的环境下静置15分钟，在波长540nm处测定其吸光度，用空白试剂做对照实验，其测量的结果分别0.1，0.2，0.3，0.4，0.41，0.55，0.8，1。用测量结果制作标准曲线，如图1所示。

2.6 样品分析与结果

通过以上实验得出市场中售酱菜中亚硝酸钠含量的测定结果，见表1。

3 结论

经过对实验结果的研究，我们可以知道，使用可见分光光度法来测定酱菜中亚硝酸盐中的含量，这种方法的优点有测量结果准确、操作过程简单、省时省力、经济效益高、线性关系好、测量范围广。但是此方法有要求，只能在弱酸性的条件下进行，盐酸萘乙二胺是显色剂。

酱菜中的亚硝酸盐含量不得超过20mg/kg，这在我国的食品分析标准法中是有明确规定的。我们通过一系列的测量，发现市面中酱菜的亚硝酸盐含量是不高于20mg/kg。因此亚硝酸盐的含量指标是合格，是不会对人体造成伤害的。