维药老鼠瓜中主要硫苷的提取及抗风湿作用

[摘要] 目的：对维药老鼠瓜中的硫苷进行提取分离，研究它对类风湿性关节炎大鼠的影响。方法：提取分离老鼠瓜中的硫苷， Freund’s 完全佐剂诱导法建立风湿性关节炎大鼠模型，设立正常组、模型组、雷公藤组、硫苷低、中、高剂量组(25，50，100 mg/kg) ，测量各组大鼠继发侧足厚度，进行疼痛评分和多发性关节炎指数评分。结果：本文制备了高纯度的硫苷结晶，经光谱鉴定确证为白花菜苷（glucocapparin）。与模型组相比，硫苷组大鼠佐剂性关节炎继发病变显著受抑制(P＜0.05)。结论：硫苷对大鼠类风湿性关节炎有良好的治疗作用。

[关键词] 老鼠瓜；硫苷；白花菜；大鼠；佐剂性关节炎

[中图分类号] R593.22 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）02（c）-034-02

Extraction and anti-rheumatism effect of glucosinolates in the Capparis spinosa L.

JIANG Li-Juan1，MEI Li-Wan・ABDRYM 1*，HajiAkber・AISA2

(1.School of Pharmaceutical Sciences， Xinjiang Medical University， Urumqi 830054，China; 2.Xinjiang Technical Institute of Physics and Chemistry， Chinese Academy of Sciences， Urumqi 830011， China)

[Abstract] Objective:Extraction and separation of the glucosinolates from the Capparis spinosa L， discuss the effect of glucosinolates on adjuvant arthritis rats.Methods:The dry seed power was extracted with boiling MeOH， a glucocapparin was obtained by the recrystallization. Rats were randomly divided into the normal group and the model group， the small， medium， large dosages of glucosinolates group (25， 50，100 mg/kg)，Except for the rats in the normal group， animals were modeled to adjuvant arthritis with freund’s complete adjuvant. The arthritis index (AI)， the pain response andthe parameter of paws were recorded. Results:UV1，1H-NNR， 13C-NNR was set up to identify the structure. At last we got the crystallization of glucocapparin. Compared with the model group， glucosinolates was shown to exert a dramatic inhibitory effect on secondary reaction of Freund’s adjuvant arthritis of rats.Conclusion:Glucosinolates has a remarkable treatment effect on AA rats.

[Key words] Capparis spinosa L.; Glucosinolates; Glucocapparin; Rat;Adjuvant arthritis

老鼠瓜(Capparis spinosa L.)为白花菜科山柑属植物,又名槌果藤、刺山柑、野西瓜、钩瓜，在我国主要分布在新疆、甘肃和[1]。其味辛苦，性温，具有祛风、散寒、除湿、止痛、调经、消肿的作用，维吾尔医用老鼠瓜治疗痛风和风湿性关节炎[2]。硫苷（glucosinolates，LG）是老鼠瓜主要的化学成分[3，4]，本文从老鼠瓜种子中提取分离硫苷类成分，考察了该组分对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)的治疗作用。

1材料与方法

1.1实验动物与分组

Wistar 雄性大鼠[由新疆医科大学实验动物中心提供，动物质量合格证号：SCXK(新)2003-0001]60只，体重(180±20) g，随机分为6组：正常组，模型组，雷公藤组，LG高、中、低剂量组，每组10只。

1.2仪器及试剂

完全弗氏佐剂（CFA，Sigm公司）；雷公藤多苷片（福建汇天生物药业有限公司，批号070102）；老鼠瓜种子于2005年8月采集于新疆阿克苏地区。甲醇和乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

SHIMADZU LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)，SHIMADZU SPD-M20A紫外检测器 (日本岛津公司)，电子分析天平（德国Sartorius公司），KQ-20KDE高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），752型紫外分光光度计（上海仪器厂），INOVA-600型磁共振仪（美国VARIAN公司），Waters-600高效液相色谱仪（Waters公司），METFER AC．100型电子天平； 外径千分尺（上海量具刃具厂）；HSGF254硅胶板(青岛海洋化工厂)。

1.3方法

1.3.1 LG的提取根据文献[5]的方法，干燥的老鼠瓜种子1 000 g，于沸水浴中处理5 min。粉碎之后用1 500 ml 70％甲醇水溶液加热回流提取两次，合并提取液并过滤，滤液浓缩（500 ml），加入10 ml 0.5 mol/L的Pb(Ac)2-Ba(Ac)2溶液，放置后过滤，滤液浓缩至浸膏状。加入30％甲醇50 ml，加热使之溶解，在0℃以下放置，得到粗提物结晶0.82 g。用30％甲醇重结晶即得到针状甲基硫苷结晶0.55 g。

1.3.2硫苷对AA 大鼠关节炎的治疗作用

1.3.2.1 AA大鼠模型的建立与给药方法正常组每只大鼠右后足跖皮内注射0.1 ml生理盐水，其余组每只大鼠右后足跖皮内注射0.1ml CFA 致炎造模，各组动物致炎后18 d开始给药，每日1次， 每次1 ml，连续12 d。参照1.3.1方法，提取硫苷粗提物结晶5.0 g，用蒸馏水溶解为25、50、100 mg/ml的硫苷溶液，置冰箱内保存。雷公藤组每天10 mg/kg；LG低、中、高剂量组每天各25、50、100 mg/kg；正常组和模型组给予等量生理盐水。

1.3.2.2继发侧足厚度测定用千分尺测量AA 大鼠继发侧足厚度，从第一天给药前开始测量，每两天1次[7]。

1.3.2.3关节炎指数(arthritis index，AI)AA 大鼠全身关节病变按5级评分法评价，根据未注射佐剂的其余3只肢体的病变程度累积积分，计算出AI。0分：无红肿；1分: 小趾关节红肿；2分:趾关节和足趾肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4 分：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。把各个关节的积分累积起来，即为每只大鼠的AI。从第一天给药前开始观察并记录全身关节病变程度，每两天1次[7]。

1.3.2.4疼痛实验评分将大鼠装进固定器内，后腿及尾部伸出筒外，稳定几分钟后向脚掌侧缓慢屈曲左侧踝关节，每隔5 s进行1次，共5次。屈关节时大鼠出现嘶叫或短促而明显的缩腿反应评1分，无反应为0分，每只大鼠疼痛反应为0～5分。从第一天给药前开始评分，每两天1次[8]。

1.4统计学处理

采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，组间比较用t检验，结果用x±s表示。

2结果

2.1 LG的结构鉴定

该结晶易溶于水，不溶于有机溶剂，与浓盐酸共热可产生硫化氢气体。紫外光谱图为单峰，最大吸收峰为223.8 nm，对应分子中S-C=N结构的硫苷特征紫外吸收波长。13C-NNR(D2O)δ16.6 d (C-8)，59.2 d (C-1)，67.7 d (C-3)，70.3 d (C-5)，75.6 d (C-4)，78.5 d (C-2)，80.2 d (C-6)，161.1 d (C-7)。1H-NNR(D2O)δ=4.89-4.19(1H，d，葡萄糖环上与硫原子相连的CH)，δ=3.27-3.75(6H，m，葡萄糖环上的CH)，δ=2.24(3H，S，-CH3)，δ=4.62为H2O峰。以上数据与文献[6]对比，确定为白花菜苷。

2.2硫苷对AA 大鼠关节炎的治疗作用

FCA致炎后第18 天，经胃灌服LG和雷公藤治疗，AA 大鼠全身症状明显改善。表现为活动增多，食欲增强，体重增加，体毛平滑较有光泽，继发性关节肿胀明显减轻，耳部红斑、尾根部结节发生率显著减少。与模型组比较，硫苷组对AA 大鼠继发性足跖肿胀、关节炎指数及疼痛反应均具有抑制作用(P＜0.05 或P＜0.01)，其中高、中剂量LG效果与雷公藤相近(P＞0.05)。结果见表1～3。

3讨论

类风湿性关节炎是一种以慢性多发性关节炎为主要表现的全身性自身免疫性疾病。大鼠佐剂性关节炎动物模型是用FCA免疫敏感种系大鼠所诱发的一种发病机制和病理特征与人类类风湿性关节炎相似的动物多发性关节炎模型。

国外对老鼠瓜的药理研究证明，老鼠瓜的水提液具有抗菌、杀虫、保肝、抗炎、抗氧化、降血糖、降血脂的作用。在新疆，老鼠瓜治疗痛风和风湿性关节炎的作用已经得到了广泛的认可。但是对于老鼠瓜发挥药理作用的机制，目前还没有相关的研究报道。本研究结果表明，高、中、低剂量硫苷灌胃治疗，均能改善AA 大鼠关节及关节外炎性症状，使关节肿胀程度和关节炎炎性指数显著下降，严重程度明显减轻。另外，本实验发现不同剂量硫苷灌胃治疗，AA大鼠的大体症状相似，关节肿胀程度和关节炎指数无明显差异。实验结果表明老鼠瓜中的硫苷具有良好的抗风湿性应用前景。

[参考文献]

[1]新疆植物志编辑委员会.新疆植物志[M].第2卷第2分册.乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社，1995.35.

[2]刘勇民.维吾尔药志[M].下册.乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社，1999.868.

[3]Matthaus B，zcan M.Glucosinolate composites of young shoots and flower buds of capers (capparis species) growing wild in Turkey[J].Agric FoodChem，2002， 50(25):732.

[4]MATTHAUS B，zcan M. Glucosinolates and Fatty Acid， Sterol，and Tocopherol Composition of Seed Oils from Capparis spinosa Var.spinosa and Capparis ovata Desf. Var.canescens(Coss.) Heywood[J]. J.Agric Food Chem，2005，53:7136.

[5]袁丽凤，郭伟强，王志刚. 油菜籽中4-戊烯基硫代葡萄糖苷的分离、提纯及结构鉴定[J].分析化学研究简报，2004，32（11）:1513.

[6]Ahmed ZF,Rizk AM,Hammouda FM,et al.Glucosinolates of Egyptian Capparis species[J].Phytochemistry，1972,11:251.

[7]徐淑云，卞如濂，陈修,等.药理实验方法学[M].第3版.北京:人民卫生出版社，2002.913.

[8]Pezet S，Onteniente B，Jullien J，et al.Differential regulation of NGF receptors in primary sensory neurons by adjuvant-induced arthritis in the rat[J]. Pain，2001，90 (122)：113-125.

(收稿日期：2007-11-21)

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