消瘤平的抗肿瘤作用

摘要：目的研究中药复方消瘤平（XLP）提取液的抗肿瘤作用。方法于小鼠右前肢腋窝皮下接种肿瘤细胞后给药，观察药物对瘤重的影响；与化疗药物合用，观察XLP对化疗药物的增效和减毒作用；用MTT法观察XLP 对荷瘤鼠T细胞增生的影响；用血清药理学方法，观察XLP对几种肿瘤细胞生长的影响。结果XLP有抑制S180肿瘤的作用，对注射用环磷酰胺（CTX）、替加氟片（FT-207）治疗H22肿瘤有增效作用，对FT-207、CTX治疗荷S180小鼠所致的白细胞降低有抑制作用，可增强荷瘤小鼠T细胞增生能力，含药血清对多种肿瘤细胞有抑制作用。结论XLP有明显的抗肿瘤作用，对化疗药物有一定的增效减毒作用。

关键词：中药复方；消瘤平；抗肿瘤作用

中图分类号：R979.1文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)05-0020-04

Anti-tumor Activity of Xiaoliuping Extract

CAO Guang-sheng1，2*, JIAO Bo1, CHENG Yan-na1

(1. School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, Jinan 250012, China; 2. Jinan Institute for Drug Control, Jinan 250001, China)

Abstract：Objective To observe the anti-tumor activity of Xiaoliuping (XLP) Extract which was a compound preparation of traditional Chinese medicine. Methods The tumor cells were inoculated in the right front armpits of the mice, then the effect of XLP on the mass of tumor was observed; the synergism and attenuation effects of XLP with chemical anti-tumor agents in treating tumor-bearing mice were observed; the effects of XLP on T-cell proliferation were observed by the MTT method and the inhibitory effect of XLP on several tumor cells were observed by serum-pharmacological method. Results XLP could inhibit the S180 tumor cells, enhance the anti-tumor effects of CTX and FT-207 on H22-bearing mice, weaken the WBC-reducing effects of FT-207 and CTX on S180-bearing mice, and elevate the proliferation of T-cell of S180-bearing mice. The mice serum containing XLP showed the inhibitory effects on several tumor cells. ConclusionXLPhas a significant anti-tumor effect and it showed synergism and attenuation actions with anti-tumor agents.

Key words：compound preparation of traditional Chinese medicine; Xiaoliuping; anti-tumor effect

用中医中药治疗恶性肿瘤，越来越受到国内外研究者的重视。中药治疗是从整体着眼，辩证施治，扶正祛邪，通过提高机体免疫功能而抑制肿瘤。消瘤平（XLP）系由灵芝、卷柏、黄芪、白花蛇舌草等组成的中药复方，组方符合中医治疗肿瘤的“扶正固本、软坚散结、清热解毒”之治则，临床应用效果良好。本研究将此复方浸膏作为供试品，探讨了此药的抑瘤作用、对化疗药治疗荷瘤鼠的增效、减毒作用以及对荷瘤鼠T细胞活性的影响，并用血清药理学方法对其抗肿瘤作用进行了研究。

1材料

1.1药品与试剂

XLP浸膏（灵芝、黄芪、龟板三味药水煎提取，提取液浓缩，得液A；白花蛇舌草等其他14味药材先醇提，再浓缩醇提液，得液B；醇提后的药渣再用水提，水提液加等体积75 %乙醇进行醇沉，静置24 h，弃沉淀取上清液，浓缩，得液C。将A、B、C 3种液体混合浓缩成浸膏，其终浓度为每100 mL含生药85 g；替加氟片（FT-207，山东齐鲁兴华制药厂，批号：0211020）；注射用环磷酰胺（CTX，上海华联制药有限公司，批号：040311）；RPMI 1640培养基（Gibco）；新生牛血清、胎牛血清（杭州四季青公司）；噻唑蓝（MTT），ConA (Sigma)。

1.2主要仪器

CO2培养箱（美国Forma Scientific公司）；JHT-SDC超净工作台 （济南康宝净化设备有限公司）；RS-232C型酶标仪（上海分析仪器有限公司）。

1.3动物

昆明种小鼠、balb/c小鼠、Wistar大鼠，均购自山东大学实验动物中心，实验动物合格证号：SCXK鲁20030004；小鼠肉瘤S180细胞（腹水型）、小鼠肝癌细胞H22、人红白血病细胞K562及NKM细胞，均购自山东省医学科学院。

2方法与结果

2.1XLP对荷S180小鼠瘤重的影响[1]

常规无菌操作，抽取S180种鼠腹水（瘤细胞悬液），以无菌磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤，细胞计数，稀释至适宜浓度。取同一性别的balb/c小鼠，每只接种瘤液0.2 mL（约4×106个瘤细胞）于右前肢腋窝皮下。24 h后随机将小鼠分为5组，每组8只，分别为阴性对照组（蒸馏水组）、阳性对照组（FT-207组）和XLP低中高剂量组（给药剂量分别为4.3、8.5和17 g/kg）。每日灌胃给药1次（10:00），连续12 d。末次给药后24 h处死小鼠，剥取瘤块称重。依下式计算抑瘤率：抑瘤率＝（阴性对照组平均瘤重－用药组平均瘤重）/阴性对照组平均瘤重×100 %。结果见表1。

由表1可见，XLP各剂量组小鼠瘤重明显降低，与阴性对照组相比，差异有统计学意义，表明XLP有体内抑瘤作用。

2.2XLP对化疗药物CTX、FT-207治疗荷瘤鼠的增效作用[2]

取接种8 d 的荷H22小鼠体内的腹水，用PBS洗净，细胞计数，稀释至适宜浓度，接种于小鼠右前肢腋下（4×106个瘤细胞/只）。24 h 后随机将动物分为9组，分别为阴性对照组（蒸馏水组），CTX 0.05 g/kg组，CTX+XLP的低、中、高剂量组（CTX的剂量均为0.05 g/kg），FT-207 0.03 g/kg组，FT-207 + XLP的低、中、高剂量组（FT-207的剂量均为0.03g/kg）。其中XLP、FT-207每日给药，CTX隔日给药，给药时间均在10:00，持续12 d。末次给药24 h 后处死小鼠，剥取瘤块称重。计算抑瘤率，并作比较，结果见表2。

由表2可见，合用XLP的各组小鼠，瘤重均低于单用CTX及FT-207者，且CTX+XLP高、中剂量组，FT-207+XLP低、中剂量组结果差异有统计学意义。表明XLP对CTX及FT-207治疗H22肿瘤有增效作用。

2.3XLP抑制FT-207、CTX治疗荷S180小鼠的降白细胞作用[2]

取小鼠接种S180腹水型瘤细胞，方法同2.1。24 h后随机分为9组，分组及各组给药方法同2.2（各组动物数量及给药剂量见表3）。末次给药后24 h，眼眶取血20μL，加入白细胞稀释液，混匀，静置后显微镜下计白细胞数。结果见表3（表中数据为视野中计得的白细胞数）。

由表3可见，各组荷瘤小鼠中，与单用FT-207、CTX组比较，合用高、中剂量XLP组小鼠白细胞数增加，差异有统计学意义。表明XLP对FT-207、CTX治疗S180肿瘤引起的小鼠白细胞降低有抑制作用。

2.4XLP对荷瘤鼠中ConA诱导的T细胞增生反应的影响[3]

小鼠接种S180 腹水型瘤细胞，方法同2.1。24 h后随机分为5组，分别为阴性对照组（蒸馏水），阳性对照组（FT-207 0.03g/kg），XLP低、中、高剂量组。每组10只，另设正常鼠组（小鼠不接种瘤液，给药同蒸馏水组）。每日10:00给药，共10 d。末次给药后24 h脱颈椎处死小鼠，常规制备脾细胞悬液（2×106 个/mL）。于96孔板中加脾细胞悬液200μL，再加入ConA（终浓度8μg/mL）。置37 ℃、5 %CO2细胞培养箱中孵育72 h取出，每孔加MTT10μL，继续培养4 h。离心，弃上清，每孔加二甲基亚砜（DMSO）150 mL，振荡使溶，用酶标仪测定吸光度（A）值（λ＝570 nm）。结果见表4。

由表4可见，荷瘤状态使小鼠T淋巴细胞增生能力减弱。XLP组小鼠脾细胞较阴性对照组增生能力增强（P

2.5含XLP血清对肿瘤细胞的抑制作用[4]

随机将大鼠分为4组（每组10只）：XLP高、中、低剂量组（剂量分别为17，8.5，4.3 g/kg），对照组（蒸馏水）。每日给药2次（10:00，14:00），共7次。各组大鼠于末次给药后1.5 h麻醉，手术剥离腹主动脉，取血并制备血清；灭活血清，过滤除菌，分装，－20℃保存备用。

取S180、H22、NKM及K562肿瘤细胞悬液100 μL（2×104个细胞），加入96孔板中，置37℃、5 %CO2、饱和水蒸汽细胞培养箱中培养24 h；加含药血清20μL，培养48 h；再加0.5 % MTT液15μL，继续培养4 h后，离心（NKM细胞贴壁，不需离心），去除上清，加DMSO 200μL，置恒温振荡器中振摇5 min，于酶标仪上570 nm波长处测A值，按下式计算各抑制率：抑制率＝（对照组平均A值－样品组平均A值）/对照组平均A值×100 %。实验结果见表5。

3讨论

中医药治疗癌肿有其自身的优势，组成方剂治疗肿瘤，可提高免疫力、增强体质、强化耐力、缓解毒性，从而抑制肿瘤、增强疗效。采用中西医结合治疗较单用化疗药物疗效好[5]。但是，此前国内中药抗肿瘤方面的研究，单方、药效研究多，而复方、机制研究少。

XLP中的灵芝含灵芝多糖及麦角甾醇等，黄芪含有苷类及多糖，白花蛇舌草含甾醇熊果酸、齐墩果酸，卷柏中含黄酮类，菝葜中含薯蓣皂苷元及多种皂苷及生物碱。该组方中这些主药的抗肿瘤作用或免疫调节作用已为广大学者所证实[6-10]。

本试验结果显示，XLP有较好的抑瘤作用，而其作用方式是多方面的。XLP对S180有较好的体内抑制作用，对化疗药物FT-207及CTX有一定的减毒增效作用。值得注意的是，在多数试验中，XLP的作用并非高剂量最强，而往往是中剂量；这也证实了中药尤其复方其作用剂量相关的模糊性。试验提示，该药可促进淋巴细胞增生，从而提高动物的整体免疫机能，这应是其抗肿瘤的机制之一（作者另有试验证实XLP对荷瘤鼠NK细胞、LAK细胞及IL-2、TNF-α等细胞因子均有促进作用）。含XLP血清对体外肿瘤细胞的增生有抑制作用，这种作用可能与药物本身或代谢产物的细胞毒作用有关，也可能与药物作用于机体而使之生成内源性抗肿瘤物质（如细胞因子等）有关，其具体的作用机制有待进一步研究。

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