足少阳胆经推拿对亚急性衰老大鼠胸腺一氧化氮的影响

作者：庞军，甘炜，唐宏亮，芦?，莫巧明，刘振威，王开龙，李建敏

【摘要】 目的为研究推拿抗衰老的机理，采用推拿及艾灸亚急性衰老大鼠足少阳胆经，研究对大鼠胸腺指数及胸腺no、sod的影响。方法利用d-半乳糖制作亚急性衰老大鼠模型。将32只普通级sd大鼠随机平均分为4组：空白对照组、衰老模型组、推拿组、艾灸组。采用硝酸还原酶法测定大鼠胸腺no、sod的含量并测定大鼠胸腺指数。结果推拿组和艾灸组大鼠胸腺指数较衰老模型组高;衰老模型组胸腺no含量较空白对照组明显上升，胸腺sod含量较空白对照组明显降低;推拿组与艾灸组胸腺no含量较衰老模型组明显下降，胸腺sod含量较衰老模型组明显升高。结论no与衰老之间有一定的相关性，衰老时胸腺no浓度升高，推拿具有延缓衰老的作用。

【关键词】 推拿; 衰老; 大鼠; 胸腺一氧化氮

过去研究的较早、较多的是自由基对机体的不利影响，认为自由基是有害无益的，近10年来的众多研究证明，自由基对健康的作用具有双重性。生物体内的氧自由基有其特殊的生理意义，低浓度自由基为维持健康所必须，过量自由基则对于不饱和脂肪酸、蛋白质分子、核酸分子、细胞外可溶性成分以及膜脂质等具有十分有害的破坏性作用。近年来，人们逐渐认识到，除氧自由基外，体内还存在另一种非常重要的一氧化氮(no)自由基，其在体内发生自由基反应，在机体的衰老变化中起一定作用，若体内no生成不足，则no介导的生理过程无法完成，而过量的no则会通过与蛋白质、脂肪、核酸生物分子的相互作用损伤机体组织，破坏细胞和机体稳态，对机体产生毒性。在以往的研究报道中，鲜有推拿抗衰老的文章，更未见推拿延缓衰老研究涉及此方面的报道。本研究通过对亚急性衰老大鼠进行足少阳胆经推拿及艾灸，观察干预前后各组大鼠胸腺no含量的变化，探讨报道推拿抗衰老的作用。

1 材料与方法

1.1 动物分组与造模动物选用广西中医学院实验动物中心提供的sd大鼠32只，普通级，12周龄，体质量(220±20)g，雌雄各半，实验条件下，饲养适应一周后，称重，随机分为4组，即：空白对照组、衰老模型组、推拿组、艾灸组，每组8只，进行编号。各组大鼠苦味酸标记后，同环境雌雄分笼饲养，每4只为1笼，正常喂水及同等定量给食。造模采用d-半乳糖颈背部皮下注射致亚急性衰老大鼠模型，用生理盐水稀释成d-半乳糖溶液，按照125mg/kg的比例颈背部皮下注射，定期根据大鼠体质量变化响应调整剂量，造模持续到实验结束。空白对照组不造模。

1.2 治疗方法自造模开始，推拿组根据《实验针灸学》[1]取大鼠双侧环跳穴、阳陵泉穴及两穴之间的区域。操作者事先在电子天平上持自制练习至每次按压力度为220～260 g，助手抓取固定大鼠，待大鼠安静下来后，用自制以2.156～2.548 n的力度按压所选定区域，按压方法为按5 s，松3 s，每侧选取区域每次操作时间为90 s。艾灸组取大鼠双侧环跳穴、阳陵泉穴及两穴之间的区域，局部皮肤剪去被毛，抓取方法同推拿组。艾灸操作者待大鼠安静下来后，一手持水温计使其底端的液泡位于选取区域旁边，另一手持自制香烟型艾条(直径约0.8 cm)，距穴位2 cm处悬灸，待水温计读数为40～42℃时开始计时，每侧选取区域每次操作时间为90 s。空白对照组和衰老模型组不进行推拿和艾灸治疗，但亦经过抓取、固定等过程。以上各组动物每周连续处理6 d，休息1d。实验历经12周。

1.3 指标的测定实验结束，空白对照组、衰老模型组、推拿组、艾灸组所有大鼠采用1%的戊巴比妥钠1～2 ml腹腔注射麻醉大鼠，固定，取胸腺剥离，生理盐水冲洗，滤纸吸干，电子天平称重，胸腺重量(mg)除以体质量(g)为胸腺指数。剪下一叶胸腺，加入预冷的生理盐水制成10%组织匀浆，检测胸腺中no浓度及超氧化物歧化酶(sod)活力，具体步骤均按测试盒说明进行(均由南京建成生物工程公司提供);另一叶胸腺迅速投入4%多聚甲醛中固定4～6 h，梯度酒精由低到高脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋，组织切片于光学显微镜下镜检，观察胸腺组织细胞形态学的变化。

1.4 数据处理所有实验数据均采用spss11.0版软件进行处理、分析。计量资料数据以±s表示，组间比较，方差齐者采用t检验，方差不齐者采用秩和检验，以p<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胸腺指数结果见表1表1 足少阳胆经推拿对亚急性衰老大鼠胸腺指数的影响表1结果显示，衰老模型组与空白对照组比较，胸腺指数呈下降趋势，推拿组、艾灸组胸腺指数低于空白对照组，高于衰老模型组。但各组大鼠胸腺、脾脏指数差异均无统计学意义(p?0.01)。说明大鼠在持续注射d-半乳糖后胸腺有一定程度的萎缩，推拿和艾灸都能提升胸腺指数，延缓胸腺萎缩。

2.2 胸腺sod、no的变化结果见表2。

由表2可知，衰老模型组胸腺no与空白对照组、推拿组、艾灸组比较明显升高(p?0.05)，胸腺sod明显降低(p?0.05)，说明衰老模型组胸腺清除自由基能力降低，自由基对机体损害作用增强。推拿组和艾灸组胸腺sod、no与空白对照组比较有明显的升高(p?0.05)，说明推拿和艾灸能加强机体内源性抗氧化能力，增强机体代谢自由基的能力，使机体的氧化/抗氧化系统的状态趋向于空白对照组。推拿组与艾灸组胸腺sod、no的值之间无明显差异(p?0.05)，说明推拿和艾灸这两种方法在影响胸腺sod、no方面没有显著差别。

表2 足少阳胆经推拿对亚急性衰老大鼠胸腺sod、no的影响(±s)

2.3 胸腺组织细胞形态学的变化

2.3.1 空白对照组皮质与髓质分界清晰，皮质染色深，胸腺细胞排列整齐，网状细胞较少，髓质染色浅，淋巴细胞较少而稀，上皮网状细胞较多而显著，可见胸腺小体。

2.3.2 衰老模型组胸腺组织中脂肪明显增加，局部出现纤维化，细胞排列紊乱，皮质与髓质界线难于区分，皮质较薄，胸腺细胞明显减少。

2.3.3 推拿组胸腺组织接近于空白对照组，皮质与髓质之间区分明显，皮质较厚，胸腺细胞数量明显增加。

2.3.4 艾灸组胸腺组织接近于空白对照组，皮质与髓质之间区分明显，皮质较厚，胸腺细胞数量明显增加。

3 讨论

3.1 推拿抗衰老的作用 衰老是指生物体在其生命的后期阶段所进行的全身性的、多方面的、十分复杂的、循序渐进的退化过程。祖国医学文献中虽然没有衰老的病名记载，但古籍中早已有延缓衰老的记载，为“不老”“增年”“延年”“养生”等[2]。最早有关延缓衰老的理论著作，则是《黄帝内经》。《内经》不但系统阐明了人体生、老、病、死的规律，而且还全面总结了有关延缓衰老的理论和方法。在描述人体衰老的原因和衰老征象特点方面，《内经》认为人体衰老与肾气虚衰、脾胃不足、阴阳失调有关。其中关于阴阳失调与衰老的认识，《素问·宝命全形论篇》说：“人生有形，不离阴阳”。《素问·生气通天论篇》说：“自古通天者，生之本，本于阴阳，阴平阳秘，精神乃治”。 说明人的生命活动是以体内阴阳为依据，而体内阴阳又必须与自然界阴阳变化相适应。阴阳平衡，体内外环境协调统一，人体才会健康无病，不易衰老，寿命得以延长。随着年龄增长，阴阳容易出现失衡，如《内经》说：“年四十，而阴阳自半也，起居衰矣”。孙思邈在《千金要方》也说：“人五十以上，阳气日衰。损与至，心力渐退，忘前失后，兴居怠惰”。这说明衰老和阴阳失调有密切的关系。

现代医学研究表明， no在衰老过程中起着很大的作用。no是体内重要的信使分子和神经递质，以自分泌和旁分泌形式作用于组织细胞，参与细胞间信号传递;它几乎对全身各系统都有影响，参与许多生理和病理过程，如学习、记忆、血管调节、免疫反应等。no对机体具有双重作用：当局部no浓度低于1μmol/l时,它可直接与许多分子结合而发挥生理功能，如促进血红蛋白释放氧气，增加组织供氧;但在病理情况下，局部no浓度升高，no就会发挥毒性作用，破坏线粒体正常功能，引起细胞凋亡[3]。也就是说，no对机体起双重作用，其作用不仅取决于no含量的多少，还取决于机体组织中各种自由基含量的多少。sod是一类重要的抗氧化金属酶，它广泛存在于生物体的各种组织中，可催化超氧阴离子歧化成和h2o，使生理情况下产生的某些自由基转变为非自由基或是使自由基的不成对电子通过gsh转移至o2，成为可被sod清除的o-而排除。防止自由基对机体的直接和间接损伤，调节机体内和no的水平。所以说sod的活性的高低反映出组织抗氧化的能力。

推拿疗法是通过手法作用于人体的经络、穴位、特定部位，以达到治病、防病作用的一种治疗方法，具有简便，易掌握，使用安全，无创伤，见效快，疗效好等特点，是一种自然疗法。用特定的推拿手法在机体上操作，使力直接作用于机体体表，能对机体产生一定的刺激及热效应，加速了气血的运行，起到疏通经络，行气活血的作用，从而能达到调和机体阴阳平衡的目的。古人早已阐述了通过推拿手法来调整机体阴阳的方法，《圣济总录》总结说：“大抵按摩法，每以开达抑遏为义，开达则壅蔽者以之发散;抑遏则骠悍者有所归宿。”中医的按摩手法所起的良性刺激作用，类似于生物物理疗法，具有调节阴阳平衡的效应。按摩人体特定部位，产生一系列生物物理变化，影响神经的兴奋性、神经纤维的传导速度和改变神经体液的调节效应，从而兴奋或抑制某一组织器官的功能，也就是起到平衡阴阳作用。实验证明[4，5]，推拿之所以能够抗衰老，是因为它能改变局部组织的血液供应、提高局部及全身的血流量，降低血粘度、改善血液流变学的性能，以达到温通经脉、调节脏腑、平衡阴阳的目的。其机理在于疏通经络，调整、增强机体局部货全身的传输机能，使体内的气、血、精、液得以正常运行，保持机体内外环境的动态平衡，以维持机体的正常生理功能，使之健康长寿。

3.2 足少阳胆经与抗衰老的关系 经络是人体内经脉和络脉的总称，是人体气血运行的通路，它内属脏腑，外连肢节，通达表里，贯穿上下，象网络一样分布全身，将人体的脏腑组织器官各部分联系成一个统一协调而稳定的有机整体。具有“行血气而营阴阳，濡筋骨，利关节”之功能。《素问·阴阳离合论》将经络分为“太阳为开，阳明为阖，少阳为枢……”“太阴为开，厥阴为阖，少阴为枢……”。刘力红[6]教授认为：开合统百病，而开合的作用是由枢机的转动来维系，只有使枢机流畅了，开合二经才能正常运转，才能更好地促进人体气血的生长，保证气血的正常运行，维持人体基本生理活动，枢机对于整个机体来说真可谓触一发而动万机。由此可见枢经乃是人体经脉的关键之所在。枢经为少阳与少阴主司。少阳包括手少阳三焦和足少阳胆经。

在人体十二条正经中，胆经由于以下的特性得以突出它抗衰老的作用：①胆在五行为木，五季为春，春之机寓生长、升发、条达，显示欣欣向荣的生机，是阳气升发之始。李东垣认为，“胆者少阳春升之气，春气升则万化安，故胆气春升，则余脏从之，所以凡十一脏取决于胆”。这说明胆为阳气之始，胆气升即阳气升，而只有阳气充沛，才能促进气化功能，促使营血再生，从而达到阴平阳秘，恢复机体自稳系统的平衡状态。②《素问·阴阳应象大论》更是认为：“少火生气，少阳相火旺盛，则元气充足，精气持满”。“所奉其人寿”。相火根于肾，藏于肝胆，游于三焦。上焦心肺得少阳相火，则能行气血，调神志;中焦脾胃得此火，才能运化水谷精微;肝胆得此火，才能疏泄诸脏;下焦肾、膀胱得此火，才能藏精、调水液;大小肠得此火，才能传导，分泌清浊。由此可见，胆经的功能是全身脏腑生理功能正常运行的关键。③少阳胆经在人体之中，居半表半里，所以能奉心阳而下达，领肾气而上贯，外可通肌表，内可及脏腑，从而有握上下升降之机，掌内外出入之途的功能，乃是沟通内外，协调阴阳的关键，而阴阳平衡对人体保持青春，延缓衰老起着举足轻重的作用[7]。

3.3 足少阳胆经推拿抗衰老的展望在众多的中医衰老学说中有关经络与衰老的文章报道很少，在经络学说指导下运用经络推拿抗衰老的报道尚未见有。本实验通过对亚急性衰老大鼠足少阳胆经进行推拿、艾灸干预，可通过降低胸腺no浓度，提高sod活性，延缓免疫器官萎缩和功能退化，提高机体免疫力，从而达到延缓衰老的效果。通过本课题的研究可以进一步阐明经络推拿抗衰老的作用机理并丰富中医抗衰老的手段，填补经络推拿抗衰老的国内空白。而且，推拿作为一种自然疗法，没有药物的毒副作用，更是一种无创伤疗法，容易被患者接受，具有广阔的推广应用价值。

【参考文献】

[1] 林文注，王 佩.实验针灸学[m].上海：上海科学技术出版社，1999：285.

[2] 林 辰.试论《黄帝内经》的抗衰老思想[j].浙江中医杂志，2008，43(2)：71.

[3] 王怀颖，张秋燕，肖 锋.一氧化氮与衰老的研究[j].医学综述，2005，11(4)：302.

[4] 曾 斌.推拿抗衰老机理探讨[j].按摩与导引，1993，9(5)：10.

[5] 连宝领，肖 枫，曾佩生，等.背腰部推拿对老年肾虚患者抗衰老作用的临床观察[j].按摩与导引，2007，23(7)：5.

[6] 刘力红.思考中医，第2版[m].桂林：广西师范大学出版社，2003：113.

[7] 庞 军，唐宏亮，杨 扬，等.推拿足少阳胆经抗衰老思路探析[j].广西中医药，2007，30(5)：37.