毛细管柱气相色谱法测定七氟烷的有关物质

[摘要] 目的 建立毛细管气相色谱法测定七氟烷的有关物质。 方法 本文采用毛细管气相色谱法，程序升温，FID检测器，色谱柱为DM-624毛细管柱（以6%氰丙苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定相；75 m×0.53 mm，3.0 μm），对七氟烷合成工艺中存在的已知杂质戊氟异丙基氟甲醚和己氟异丙基甲基醚及未知杂质都进行了很好的分离和测定。 结果 七氟烷杂质含量测定的线性范围为0.14~0.72 μg/mL，回归方程：Y = 4.269X-0.041 3（r = 0.999 6）。最低检测限为6.272 ng，精密度RSD为1.88%。 结论 本法专属性强，灵敏度高，结果准确，可用于七氟烷的有关物质检查。

[关键词] 七氟烷；有关物质；气相色谱法

[中图分类号] O657.71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）02（a）-0119-02

Determination of related substances of sevoflurane by capillary gas chromatography

WANG Yue1 LIU Shuyang2 LI Yinfeng2 JIN Chaodong2

1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China; 2.The Center of Forecasting and Analysis, Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China

[Abstract] Objective To establish a method for determination of related substances of sevoflurane by capillary gas chromatography. Methods The determination was performed on a DM-624 capillary column (coated with cross-linked 6% Polycyanopropylphenylsiloxane and 94% Polydimethylsiloxane, 75 m×0.53 mm, 3.0 μm), using temperature programming, with FID detector. The known impurities and unknown impurities in the synthesis process of sevoflurane were separated very well. Results There was a linear relationship in the concentration range of 0.14-0.72 μg/mL, the regression equation was Y = 4.269X-0.041 3 (r = 0.999 6） with the correlation coefficient of 0.999 6. The limit of detection was 6.272 ng and the relative standard deviation (RSD) value for precision was 1.88%. Conclusion This method is validated to be specific, accurate and suitable for the measurements of sevoflurane and its related substances.

[Key words] Sevoflurane; Related substances; GC

七氟烷是一种较新的吸入，1968年由Regan合成，1971年Willin等最先报道并于1975年对其理化性质、药理作用及毒理学进行了评价，1992年使用于日本，1995年经美国FDA批准在美国上市。吸入型麻醉剂[1-3]能通过呼吸有效地调节血中浓度，并能迅速被“洗出”，而七氟烷对心血管系统的影响比异氟烷小；不引起过敏反应，对眼黏膜刺激轻微，麻醉深度易调节等，是一种非常优良、具有较多理想特性的新型吸入型麻醉剂[4]。目前国内使用的七氟烷多为进口，为保证药品质量，针对国内厂家的生产工艺，建立了毛细管气相色谱法测定七氟烷的有关物质，并对测定条件进行了系统的考察。

1 仪器与试药

Agilent Technologies 6890N气相色谱仪，FID检测器，七氟烷对照品（批号：090228），三批样品（天津市智康科技有限公司，批号：090301、090302、090303），戊氟异丙基氟甲醚、己氟异丙基甲基醚均为USP对照品，1，2-二氯乙烷、二甲氧基甲烷均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱Dikma Technologies DM-624（75 m×0.53 mm，3.0 μm）；柱温：程序升温（初始温度45℃，保持1 min，再以5℃/min的升温速率升至120℃，保持1 min，再以10℃/min的升温速率升至200℃，保持3 min）；载气：氮气（恒流：4.00 mL/min）；进样口温度：230℃；检测器温度：250℃；进样量：2 μL。

在上述色谱条件下，按七氟烷峰计算理论板数应不低于5 000，七氟烷峰与内标物质峰的分离度应大于2。

2.2 分离度试验

分别取戊氟异丙基氟甲醚对照品和己氟异丙基甲基醚对照品适量，用1，2-二氯乙烷溶解，按上述色谱条件下分别测定，戊氟异丙基氟甲醚的保留时间为13.394 min，己氟异丙基氟甲醚为13.873 min。在对照品中加入少量以上两种杂质对照品，以二甲氧基甲烷为内标，进样测定，记录色谱图。结果显示，戊氟异丙基氟甲醚的保留时间为13.503 min，己氟异丙基氟甲醚为13.859 min，七氟烷为14.465 min，内标为15.971 min，上述各峰分离度良好。见图1。

图1 七氟烷分离度试验色谱图

2.3 线性关系考察

取两个5 mL量瓶，加入部分1，2-二氯乙烷溶剂，精密称量七氟烷对照品（批号：090228）和二甲氧基甲烷各50 μL分别置于量瓶中，用1，2-二氯乙烷溶剂溶解并稀释至刻度，得对照品储备液和内标储备液。精密量取对照品储备液100、150、250、400、500 μL，分别置10 mL量瓶中（先加入1，2-二氯乙烷适量），各加入内标储备液250 μL并用1，2-二氯乙烷溶剂稀释至刻度，摇匀，对照品溶液浓度分别为0.10、0.15、0.25、0.40、0.50 μL/mL；内标溶液浓度为0.25 μL/mL。

用上述色谱条件对标准溶液进行测定，各进样2 μL，记录样品与内标峰面积。以浓度为横坐标，样品和内标物峰面积比为纵坐标，回归方程：Y = 4.269X - 0.041 3，r = 0.999 6。

2.4 最低检测限

取线性范围测定项下的对照品溶液，稀释至0.002 5 μL/mL，进样2 μL，经测定在选定的色谱条件下，七氟烷的最低检测限为7.96 ng（S/N=3）。

2.5 定量限

取线性范围测定项下的对照品溶液，稀释至0.012 5 μL/mL，进样2 μL，重复进样6次，七氟烷与二甲氧基甲烷的峰面积比的相对标准偏差（RSD）为5.41%。

2.6 进样精密度试验

精密吸取含对照品和内标物0.25 μL/mL的溶液2 μL注入气相色谱仪，重复进样6次，七氟烷与二甲氧基甲烷的峰面积比的相对标准偏差（RSD）为1.88%。

2.7 校正因子测定

取1，2-二氯乙烷适量，置于两个5 mL量瓶中，精密称定，用微量注射器分别加入对照品和二甲氧基甲烷（内标物）各50 μL，精密称定，用1，2-二氯乙烷稀释至刻度，摇匀，用微量注射器各取250 μL置同一10 mL量瓶中，用1，2-二氯乙烷定容，摇匀。量取2 μL，注入气相色谱仪，平行进样4次，平均校正因子为0.56，七氟烷与内标物峰面积比的相对标准偏差（RSD）为3.1%。

计算公式：校正因子=■，其中A为峰面积，W为质量。

2.8 有关物质的测定

精密量取七氟烷三批样品（090301、090302、090303）50 mL于不同量瓶中，精密量取内标溶液12.5 μL分别加入样品中，称重，得样品测定溶液（含内标0.25 μL/mL），将各批样品溶液依上述色谱条件测定，每批平行测定2次，记录色谱图。见图2。根据峰面积按下面公式计算杂质含量。色谱图中如有杂质峰，主成分按自身对照法计算，各杂质峰面积总和与内标的峰面积比，不得大于对照液主峰与内标的峰面积比（1%）。另一已知杂质己氟异丙基甲基醚含量极小，在各批样品中峰面积均小于1，样品中所有杂质含量均不大于0.005 0%。根据上述方法测定3批样品的有关物质，结果见表1。

计算公式：含量W（%）=■×100%，其中，140.9为换算得出的有关物质质量（μg/g）的换算系数，f为平均校正因子，A为峰面积。

由表1可见，各样品中未知杂质总含量均小于0.005 0%，单个最大挥发性杂质含量小于0.002 5%，含已知杂质戊氟异丙基氟甲醚小于0.002 5%，己氟异丙基氟甲醚含量小于0.005 0%。以上各批样品含量测定符合要求。

3 讨论

3.1 程序升温条件

分别考察了起始温度为40、45、60、100℃和流速2、4、8、10 mL/min对保留时间的影响，发现起始温度对保留时间的影响小于流速对其的影响，流速越慢，分离效果越好，在考虑保留时间和分离效果两者后，选用流速4 mL/min，起始温度45℃；并尝试不同的升温程序以保证主峰与各个杂质峰的分离效果，得出最优条件。

3.2 色谱柱的选择

分别考察了DB-624（30 m）和DM-624（75 m）的毛细管柱，通过改变流速和升温速度，比较各条件下的分离度，DB-624不能分离主峰前的两个已知杂质峰，而DM-624分离度较好，主峰保留时间为14.4 min，内标峰为15.9 min，戊氟异丙基氟甲醚为13.4 min，己氟异丙基氟甲醚为13.8 min，其他未知杂质峰分别为12.8、13.2、13.6、15.1、15.5、16.9、18.1、18.4、19.5、20.6 min。

3.3 杂质的分离

戊氟异丙基氟甲醚虽未被证实对人体有毒性，但其已被实验证实可使大鼠肾中毒，使其近曲小管单个细胞坏死并扩散。另据报道，戊氟异丙基氟甲醚作用于非人类灵长类动物体内8 h，会使其肾小管单个细胞退化及坏死，故实现戊氟异丙基氟甲醚与七氟烷主峰的分离并控制其含量是很有必要的；而己氟异丙基甲基醚对人体的毒性尽管未见报道，但作为已知杂质，本方法对其进行了很好的分离。

[参考文献]

[1] 姬梅，于布为.七氟烷用于承认麻醉诱导的临床观察[J].上海医学，2007，12（30）：11.

[2] Hut BA，Mazze RI，Cook TL，et al. Thremorcgulatory defect in rats during anesthesia[J].Anesth，1977，（56）：9.

[3] Bernard MR，John CL. The method of inducing anesthesia by administering an anesthetically effective amount of the compound fluoromethyl1，1，1，3，3，3-hexafluoro-2-propylether [P]. US：3，683.

[4] Bernard M.Regan，John C. Longstreet Fluorinated ether [P].US：689.

（收稿日期：2011-10-24 本文编辑：卫 轲）