蒙成药德都红花-7味散长期毒性试验研究

摘 要：目的：观察大鼠长期口服德都红花-7味散产生的毒性反应，为临床提供安全用药依据。方法：取wister大鼠，按体重随机分为空白对照组和德都红花-7味散低剂量组（1.34g·kg-1·d-1）、高剂量组（5.36g·kg-1·d-1），连续灌胃给药6个月，观察实验动物外观体征、体重、给药后的反应；检测血常规、凝血四项、血液生化指标；计算脏器指数，常规对主要脏器做he染色，观察组织形态学改变。结果：连续灌胃给药6个月和停药1个月后，给药组与空白对照组比较外观体征、行为活动、体重、脏器系数、血常规分析、凝血四项均无明显改变。生化检测中给药六个月后德都红花-7味散高剂量组ALT、AST、CRE与空白对照组比较明显下降，P＜0.05；停药后1个月生化检测CRE仍低于空白对照组，P＜0.05，其它检测项目均无明显改变。组织病理学检查各脏器均未发现明显的病理改变。结论：德都红花-7味散在临床剂量的120倍，即5.36g/kg内给予大鼠长期灌胃给药较安全，为临床用药提供了安全性依据。

关键词：蒙成药；德都红花-7味散；大鼠；长期毒性试验

中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717(2011)12-2761-04

Study on the Long-term Toxic Effect of Deduhonghua-7 Powder

HAN Zhiqiang1，BA Tudeligen1，GAO Yufeng1,QING Yu1, NA Risu2，MU Qi2

(1. Affliated Hospital of Inner Mongolia University for the Nationalities, Tongliao 028007, Inner Mongolia, China；

2.Mongolia Medical College of Inner Mongolia University for the Nationalities，Tongliao 028000, Inner Mongolia, China)

Abstract:Objective:To evaluate the long-term toxicity of Deduhonghua-7 powder on rats and to provide the scientific basis for its clinical usage.Methods: Wistar rats were randomly divided into control group and Deduhonghua-7 powder low dose group(1.34g·kg-1·d-1)、high dose group(5.36g·kg-1·d-1)，the rats were consecutively drenched Deduhong hua-7 powder for 6 months. The appearance of signs、body weight and reaction were observed after administration；blood、coagulation、blood biochemical indicators were tested organ index of the animals were calculated；conventional staining of HE dyed on major organs and histological changes were observed.Result: Consecutively medication for 6 months and 1 month after drug discontinuance, treated group compared with control group, there were no significant changes on appearance of the signs, behavior, body weight, organ coefficient, blood analysis, coagulation. Treated group compared with control group, ALT、AST、CRE in Deduhonghua-7powder high dose group was decreased obviously after administration for 6 months (P＜0.05). 1 month after drug withdrawal, CRE still lower than that in the control group (P＜005). There was no significant change in the other test items. Histopathological examination of the organs had no significant pathological changes.Conclusion: It is safer to take Deduhonghua-7powder under the 120 times of the clinical dose that is 5.36g/kg on rats providing the scientific basis for its clinical usage.

Key words:Mongolian medicine; Deduhonghua-7powder; Rat; Long-term toxicity test

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收稿日期：2011-07-17

作者简介：韩志强（1980-），男（蒙古族），内蒙古赤峰人，医师，硕士，研究方向：临床药理实验研究。德都红花-7味散载于公元18世纪撰写的蒙医名著《通瓦嘎吉德》\[1\]，是蒙医治疗肝热病的主要制剂，具有解毒、清肝血热、调理体素、祛黄之功效，临床主要用于新旧肝病、肝肿大、肝损伤、肝血增盛、目及皮肤发黄。德都红花—7味散对CCI4所致小鼠急性肝损伤及肝纤维化和二甲基亚硝胺所致慢性肝损伤具有明显的降酶保肝、抗纤维化作用；临床疗效观察表明对慢性乙型肝炎主要症状、体征及肝功能的改善有显著疗效；急性毒性试验未观察到明显毒性反应\[2-4\]。临床上需要长期服用，为观察其长期口服是否有毒性反应，进行了本实验研究。

1 实验材料

1.1 实验动物 Wister大鼠，5周龄，体重（120±20）g，雌雄各半，由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(吉)2007-0003。

1.2 实验药物 德都红花-7味散由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供。

1.3 试剂 天冬氨酸氨基转移酶（ALT）、丙氨酸氨基转换酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB），总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、肌酐（GRE）、血糖（GLU）均由中生北控生物科技股份有限公司生产，批号均为201004，凝血四项试剂盒，由美国-菲舍尔诊断-太平洋凝血制品公司生产，批号V38660。

1.4 仪器设备 CA-800全自动血球分析仪，日本。BS-200全自动生化分析仪，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。AUW120D电子天平，日本岛津制作所试验计测事业部。LDZ5-2低速离心机，北京京立离心机有限公司。YD-202AⅢ切片机，浙江省金华市益迪医疗设备厂。SYD-B（分体型）包埋机，沈阳誉德电子仪器有限公司。

2 方 法\[5\]

2.1 分组给药 取Wister大鼠60只，按体重随机分为空白对照组和德都红花-7味散低剂量组、高剂量组，每组各20只。实验动物在实验室适应观察1周，记录进食量，体重变化和一般状态。1周后空白对照组灌胃蒸馏水，德都红花-7味散低剂量组上午灌胃德都红花-7味散1.34g/kg、下午灌胃蒸馏水，德都红花-7味散高剂量组灌胃德都红花-7味散5.36g/kg，上下午各1次，均以1.5mL/100g，连续灌胃6个月。每周称体重1次，记录采食量，按体重调整剂量，每天观察实验动物外观体征、行为活动、粪便性状、给药后的反应。

2.2 样本的采集 末次给药后按体重随机抽取10只，剩余在停药后1个月，禁食16h，不禁水，称重，10%水合氯醛035mL/100g腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，2mL抗凝做血细胞常规分析；2mL抗凝3000r/min离心10min，取血浆分装-60℃保存，备凝血四项分析；剩余37℃温育30min血清淅出后，3000r/min离心10min，取血清进行血液生化检测。腹主动脉采血后，即刻解剖取心、肝、肾、脾、肺、肾上腺、胸腺、胃、（附睾）、卵巢、子宫等称重计算脏器指数，常规对心、肝、肾、脾、肺、胃、（附睾）、卵巢、子宫等各脏器在同一部位取组织固定于10%福尔马林溶液中，常规脱水、透明、浸蜡、固定、切片，做he染色，观察组织形态学改变。如果其他器官肉眼观察有病变，进一步作病理组织学检查。

2.3 检测方法 血清生化指标测定方法分别为：AST、ALT、ALP按IFCC推荐法，CRE按苦味酸法，BUN按脲酶连续监测法，TP按双缩脲法，ALB按溴甲酚绿法，GLU按GOD-PAP法，CHO用CHOD-PAP法、TG按GPO-PAP法、用BS-200全自动生化分析仪。CA-800血球分析仪分析全血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hgb）、血小板（PLT）。用C-2000凝血仪，检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶时间（TT）。

3 结 果

3.1 一般观察 各给药组大鼠与空白对照组相比，未出现活动、饮食、大便、皮毛光泽等任何异常。大鼠体重随周龄增长而增加，德都红花-7味散组体重的增长与空白对照组比较无明显差异。各给药组大鼠的进食量与空白对照组比较无显著性差异。停药1个后，未见任何异常。体重对照见表1。

从表1可见3组动物给药前观察1周间体重增长明显，给药后1个月到4个月体重明显增长，4到6个月期间体重没有明显区别，停药后1个月体重均有所增长，各时间段体重与空白对照组比较均无显著性差异。

3.2 德都红花-7味散长期毒性试验6个月和停药1个月血液常规分析结果 见表2。

从表2可见，给药6个月和停药1个月后，与空白对照组比较给药组WBC、RBC、Hgb、PLT均无明显改变，无显著性差异，P＞0.05。

3.3 德都红花-7味散长期毒性试验6个月和停药1个月生化指标检测结果 见表3。

量组ALT、AST、CRE与空白对照组比较明显降低，停药后1个月高剂量组CRE明显低于空白对照组，有显著性差异，P＜0.05。低剂量组和高剂量组其它项目与空白对照组比较无明显改变，无显著性差异，P＞0.05。

3.4 德都红花-7味散长期毒性试验6个月和停药1个月脏器指数对

系统解剖主要脏器及病理组织学检查，各脏器的形态、大小、颜色均未发现肉眼可见的变化。给药 6个月，各给药组组重要脏器病理检查均无异常，见插页Ⅶ图1。

从表4可见给药6个月和停药1个月低剂量组和高剂量组脏器指数与空白对照组比较均无明显改变，无显著性差异，P＞0.05。

3.5 德都红花-7味散长期毒性试验6个月和停药1个月凝血四项检测结果 见表5。

表5 德都红花-7味散长期毒性试验6个月和停药1个月凝血

注：与空白对照组比较，*P＜0.05。从表5可见给药6个月和停药1个月低剂量组和高剂量组凝血四项与空白对照组比较均无明显改变，无显著性差异，P＞0.05。

4 讨 论

德都红花-7味散载于公元18世纪撰写的蒙医名著《通瓦嘎吉德》，是蒙医治疗肝热病的主要制剂，由红花、麻黄、石膏、川木通、紫花地丁、诃子、蓝盆花七种蒙药材组成，方中以清肝热、活血的红花为主，以麻黄清肝、止血；石膏药以清热、祛黄疸为辅。配以川木通、蓝盆花、紫花地丁以清肝热，诃子以解肝热、解毒，调理体素为佐使。具有解毒、清肝血热、调理体素、祛黄之功效，用于新旧肝病、肝肿大、肝损伤、肝血增盛、目及皮肤发黄，食欲不振等。

德都红花-7味散对急慢性肝损伤疗效确切。实验研究表明德都红花-7味散对CCI4和二甲基亚硝胺所致小鼠急慢性肝损害有明显降低ALT、AST、LDH升高的作用；临床疗效观察表明对慢性乙型肝炎主要症状、体征的疗效显著，有 HBsAg、HBeAg阴转及抗HBE阳转和降低 ALT作用，恢复 A/G均优于护肝片；急性毒性试验未观察到明显毒性反应，无动物死亡，测得最大耐受剂量MTD>60g/kg，相当于成人日用药量的1200倍以上\[2-4\]。

慢性肝炎病程长，反复发作，目前治疗主要根据患者具体情况，采取抗病毒、调整免疫、保护肝细胞、改善肝功能、抗纤维化等药物治疗及心理等治疗措施，药物治疗需要长时间用药，疗程达2～6个月。德都红花-7味散临床常用于新旧肝病、肝肿大、肝损伤（慢性肝炎，肝纤维化）等，需要长时间服用\[6\]。

本研究表明大鼠连续灌胃给药德都红花-7味散6个月和停药1个月后，给药组与空白对照组比较外观体征、行为活动、体重、脏器系数、血常规分析、凝血四项均无明显改变。生化检测中给药六个月后德都红花-7味散高剂量组ALT、AST、CRE与空白对照组比较明显下降，P＜0.05；停药后1个月生化检测CRE仍低于空白对照组，P＜0.05，其它检测项目均无明显改变，这可能与德都红花-7味散具有保肝作用的同时还有改善肾功能作用有关，其机理有待进一步研究。空白对照组AST检测结果6个月明显高于停药1个月、ALP明显高于停药后1个月，与文献报道不一致，而TG检测结果6个月明显低于停药1个月，与文献报道一致，可能与大鼠周龄有关\[7\]。病理学检查中心、肝、肾、脾、肺、胃、（附睾）、卵巢、子宫等各脏器均未发现有明显的病理改变。德都红花-7味散组方配伍合理，在临床剂量的120倍即5.36g/kg内给予大鼠长期灌胃给药较安全，为临床用药提供了安全性依据。

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收稿日期：2011-07-09

作者简介：王潇（1972），女，陕西咸阳人，助理研究员，硕士，研究方向：实验血液学。参考文献

\[1\] 吉格木德丹金扎木苏.通瓦嘎吉德\[M\]//傲特根毕力格，段关布扎布，仁庆稍.呼和浩特：内蒙古人民出版社，1997:179.

\[2\] 巴图德力根，白万福，白呼和巴拉，等.蒙成药为主综合治疗慢性乙型肝炎的临床研究［J］.辽宁中医杂志，2004，31（8）：650-651.

\[3\] 巴图德力根，白万福，王欢.两种蒙成药为主综合治疗慢性乙型肝炎疗效观察［J］.辽宁中医杂志，2005，32（5）：391-392.

\[4\] 巴图德力根,赵忠孝,张国文.蒙药德都红花-7味散对急性肝损害的保护作用及其急毒性药理试验［J］.辽宁中医杂志，2006；33（4）：494-495.

\[5\] 袁伯俊，廖明阳，李波.药物毒理学实验方法与技术\[M\].北京：化学工业出版社，2007：212.

\[6\] 中华医学会传染病与寄生虫病学分会.病毒性肝炎防治方案［S］.中华传染病杂志,200，19(1):59-62.

\[7\] 齐云，蔡润兰，王敏.新药长毒试验动物血液生化测定规范化研究系列之六—SPF级Wistar大鼠血液生化参考值的建立［J］.中国比较医学杂志，2006，16（4）：197-200.