猪流行性腹泻病的临床症状和检测技术的研究

一、猪流行性腹泻病的临床症状

1.猪流行性腹泻主要临床症状

PED最明显的症状是水样腹泻，在PED广泛流行和母猪群大多有免疫力的国家或地区的种猪场中，新生仔猪很少暴发PED。易感种猪群暴发本病时，发病率和死亡率差异很大，在有的种猪场，所有年龄的猪只均感染发病，发病率高达100%，此时该病与猪传染性胃肠炎（TGE）极为相似，只是传播速度较慢和哺乳仔猪病死率稍低。1周龄内仔猪常常腹泻3d―4d后因脱水而死，病死率平均为50%，但有时高达80%，日龄较大的仔猪约一周后康复。暴发过急性腹泻的猪场，在断奶后2周―3周可能出现持续性腹泻，新引进的猪只也可能相继发病。近几年来，在日本和韩国均有新生仔猪急性PED的暴发并出现高的致死率（Sueyoshi eta1，1995）。在欧洲一些猪场，断奶猪和成年猪经常发生严重的腹泻，而哺乳仔猪，尤其是无母源抗体的哺乳仔猪不发生或仅发生轻微腹泻，发病率很低，对于这种现象至今仍未能做出很好的解释。有人曾对几株PEDV分离株对仔猪的毒力差异进行了测定，但未能发现异常。多渠道来源的混养架子猪或育肥期间猪只暴发急性PED时，临床表现几乎一样，所有的猪只在一周内均表现腹泻，食欲稍减退，精神沉郁，粪便呈现水样。在育肥后期，PEDV感染引起的腹泻比猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的腹泻猪只的腹泻要严重，但大多数猪只在7d～10d后康复，病死率仅为1%---3%，且这种死亡常见于腹泻早期或发生腹泻之前，剖检病死猪常见背部肌肉坏死。应激敏感的猪只发生PED时死亡率很高。一般来说，PEDV在架子猪和育肥猪的肠道内比在新生仔猪的肠道内更易增殖，因此，育肥猪对该病毒易感性更高，一旦发病，发病率常高达100%。cTGEV相比，PEDV在封闭的种猪场内以及同一育肥猪群内或不同的育肥猪群间的传播较慢，在几个独立猪舍的种猪场和育肥猪场中，通常需要4周～6周病毒才能感染不同猪舍的猪群，甚至有的猪舍的猪群不出现感染（Carvajaleta1.，1995b）。

2.猪流行性腹泻的病理变化

PEDV在自然感染和实验感染的仔猪中均能引起肉眼可见的病变（Pospischil eta1，1981；Hwang eta1，1994），主要表现为：小肠膨胀，内充满大量黄色液体。在接毒后24h，仔猪的小肠绒毛出现组织学变化，主要表现为：小肠绒毛上皮细胞空泡化、脱落，绒毛变短，这个组织学变化恰恰与仔猪腹泻发生的时间相吻合。Ducatelle等（1981）从组织化学角度进行了研究，发现PEDV感染猪小肠中酶的活性明显下降。Pospischil等（1981）和Sueyochi等（1995）认为PEDV的病理变化与猪传染性胃肠炎（TGE）的极为相似，在结肠，未能观察到组织病理学变化。超微结构变化主要发生于小肠细胞细胞浆中（Horvathet a1.，1981），可见细胞器减少，出现电子半透明区，接着微绒毛和末端网状结构消失，部分胞浆突入肠腔内，肠细胞变平，紧密连接消失，脱落进入肠腔，可见肠细胞内的病毒是通过内质网膜以出芽方式形成的（Ducatelleetal.，1981b）。在结肠，含病毒的肠细胞出现一些细胞病变，但末见细胞脱落。

二、猪流行性腹泻检测技术研究进展

目前，与传统的病毒分离鉴定，免疫荧光、电镜检测、免疫组化法、中和试验等临床检测方法相比较，ELISA技术、RT-PCR、免疫胶体金快速诊断技术等具有易操作、快速、可同时检测大量样品的优点，在临床检测中被广泛推广。上世纪90年代初，Knuchel等从PEDV感染的Vero细胞的胞浆中提取S蛋白和N蛋白，并利用这两种蛋白建立了检测PEDV抗体的ELISA检测方法。Hou等利用大肠杆菌重组表达的N蛋白作为抗原建立的ELISA检测方法，与血清中和试验（SN）的重复率为88.3%，具有较高的特异性和敏感性。Oh等利用从PEDV感染的Vero细胞中提抽的病毒蛋白建立了ELISA检测方法，与血清中和试验（SN）比较，两者的符合率84.2%。Sozzi等利用单克隆抗体建立的检测PEDV的双抗体夹心ELISA与RT-PCR检测方法比较，腹泻粪样及肠道检测结果的符合率均为95%。Song等建立定量RT-PCR来测定感染PEDV猪只的排毒量。Jtmg等基于斑点杂交建立的鉴别诊断PEDV和TGEV的多重RT-PCR，比基于琼脂糖凝胶电泳的多重RT-PCR敏感高100--1000倍。韩国的Jtmg等建立的TGEV和PEDV多重巢式RT-PCR检测福尔马林固定的肠组织，与原位杂交试验结果一致，同时也对免疫组化、原位杂交、多重巢式RT-PCR这三种方法进行了比较，结果显示多重巢式RT-PCR的重复性最好。杨群等利用自己建立的TGEV和PEDV的多重RT-PCR检测方法，与韩国的TGEV和PEDV病毒抗原快速诊断试剂盒检测结果进行比较，发现该方法的特异性和敏感性更好。刘邓等建立了PEDV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法，能检测到10拷贝/ul的阳性质粒，比常规RT-PCR的敏感性高10倍。Park等发现PEDV经胰蛋白酶处理后有红细胞凝集反应，将成为快速检测PED的新方法。