Kai1在皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义

【摘要】目的：探讨Kai1在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学S-P法和核酸分子原位杂交技术分别检测10例正常皮肤、30例皮肤SCC中Kai1、Kai1 mRNA的表达；利用计算机图像分析系统采集、分析图像，并对数据进行统计学处理。 结果：Kai1、Kai1 mRNA在正常皮肤中均呈强阳性或阳性表达，在SCC中均呈弱阳性或阴性表达。两者在SCC中的表达均明显低于正常皮肤，差异均有统计学意义(P

【关键词】Kai1；Kai1 mRNA；鳞状细胞癌

Kail基因是近年来发现的一种新的肿瘤转移抑制基因，主要存在于细胞和其他组织表面，属于跨膜4超家族成员，具有介导细胞与细胞外基质的相互作用，牵涉到细胞融合作用、黏附、迁徙到凋亡、细胞形态学改变的生物学过程，其下调与许多肿瘤发生、发展及转移密切相关。我们采用免疫组织化学、原位杂交技术分别检测Kai1蛋白及其mRNA在皮肤SCC和正常皮肤组织中的表达，探讨Kai1与皮肤SCC发生、发展的关系。

1材料与方法

1.1实验标本标本来源于2006年1月至20010年12月遵义医学院第五附属（珠海）医院和中山大学附属第五医院病理科的存档病例，均经HE染色，光镜观察、确诊。SCC 30例（高分化25 例，中分化4例，低分化1例），其中男24例，女6例；部位：头皮2例，面部14例，下肢7例，7例;年龄36～84岁，平均63．03岁。患者术前均未行放射治疗和化学治疗。正常皮肤组织10例，取自临床手术切除的带有正常皮肤组织的病变标本。所有蜡块以4μm厚度连续进行切片。

1.2主要试剂兔抗人Kai1多克隆抗体、Kai1 mRNA寡核苷酸探针原位杂交试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司。S-P免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。

1.3实验方法

1.3.1免疫组化染色（S-P法） 以前列腺组织为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，Kai1根据产品要求和预试结果确定为1:100，用专用抗体稀释液稀释。切片常规脱蜡至水，微波抗原修复，操作步骤按试剂盒说明书进行，经DAB显色，苏木素复染，脱水、透明，中性树胶封片，显微镜下观察，拍照。

1.3.2原位杂交(ISH)以滴加不含探针的预杂交液作为阴性对照，以前列腺组织为阳性对照，切片经65℃烘烤过夜，操作步骤按原位杂交试剂盒说明书进行，每张切片滴加20μl含Kai1 mRNA寡核苷酸探针的杂交液，40℃杂交过夜，DAB显色，苏木素复染，脱水干燥、透明，中性树胶封片，显微镜下观察，拍照。

1.4免疫标记结果判断Kai1蛋白和Kai1 mRNA以细胞质和细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性等级判定采用半定量积分法，包括综合染色程度和阳性细胞百分数两个方面，根据每张切片的阳性细胞百分数及着色深浅计分: 在400倍视野下，每张切片随机观察5个不同的视野，每视野计数100个细胞，分别记录每个视野阳性细胞数量并计算其算术平均值：阳性细胞数≤5%为0分，6% ~25%为1分，26%~50%为2分，51% ~75%为3分，＞75%为4分; 阳性强度:无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。然后根据二者记分相加判断阳性等级：0~1分为阴性，2~3分为弱阳性，4~5分为阳性，6~7分为强阳性。应用显微图像分析系统分别检测阳性染色的表达水平(阳性面积)及其表达强度(光密度)。

1.5统计学方法运用SPSS 13.0 统计软件包，数据均以表示，对结果进行t检验和相关分析，以P＜0.05有统计学意义。

2结果

2.1Kai1蛋白和Kai1 mRNA的表达Kai1蛋白和Kai1 mRNA在正常皮肤表皮组织中的表达均呈强阳性或阳性；在SCC组织中的表达分布：在高分化SCC的角化珠中呈阳性，而在其周边的癌细胞以及中分化SCC及低分化SCC中均呈弱阳性或阴性表达（结果如图1-4）。Kai1蛋白和Kai1 mRNA在皮肤SCC中的表达水平和表达强度均明显低于正常皮肤组，差异均有统计学意义（结果如表1）。

表1 Kai1在鳞状细胞癌与正常皮肤中的表达

注：S代表阳性面积代数和/分析区域面积的平均值

G代表光密度

P

2.2Kai1蛋白和Kai1 mRNA表达的相关性经过相关性分析, Kai1蛋白与Kai1 mRNA在皮肤SCC中的表达成正相关(R=0.751，P

3讨论

皮肤鳞状细胞癌( squamous cell carcinoma，SCC) 是源于上皮组织角质形成细胞的恶性肿瘤，在我国的发病率居皮肤恶性肿瘤之首，占皮肤科恶性肿瘤的78.5％～90.9％[1]，并呈上升趋势，其发病机制仍不十分清楚。随着肿瘤分子生物学的研究进展，人们试图从分子水平揭示肿瘤发生发展的机制。目前，已有研究表明：p21、细胞周期蛋白激酶、肝素结合表皮生长因子样生长因子、肿瘤生长抑制因子、IL-1α、HSP27、HSP70、β-连环蛋白等与鳞状细胞癌癌的发生发展相关[2]。至今，尚没有Kai1与皮肤SCC相关性的研究报道。

Kai1基因是Dong[3]等于1995 年首次从人的染色体11p1112中分离出，是新发现的一个肿瘤转移抑制基因。Kail基因编码产物为267个氨基酸组成的蛋白质，具有4 个高度保守的跨膜疏水区域及1 个大的细胞外亲水区域，此亲水区域包含3个潜在N－糖基化位点。Kail蛋白质主要定位于细胞膜表面细胞与细胞连接处。因其在恶性肿瘤发生、发展和侵袭转移中的作用逐步受到广泛重视成为目前研究的热点。Kai1分布极其广泛，机体大多数组织均有表达，它的失活与一些肿瘤的发生发展及浸润有关。研究表明胰腺癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、肾癌、口腔癌、甲状腺癌、乳腺癌等肿瘤的进展与Kai1基因表达下降或缺失有明显相关性[4-7]，且其表达水平可以作为评价预后的一个重要指标。Kai1在人类侵袭和转移性肿瘤中表达下降，其分子基础尚不明确。有研究报道Kai1其结构为细胞膜糖蛋白，主要影响细胞间及细胞与细胞外基质间的信号传导，参与细胞增生的调节，在多种肿瘤中均有表达下调或缺如，其异常表达与肿瘤的发生发展密切相关。本研究显示，Kai1蛋白及其mRNA在皮肤鳞状细胞癌组织中，染色不均且散在分布，呈弱阳性或阴性表达；而在正常皮肤中染色均匀连续，弥漫分布，呈强阳性或阳性表达。它们在皮肤鳞状细胞癌的表达水平、表达强度均明显低于正常皮肤组织，差异有统计学意义。提示：Kai1蛋白及其mRNA低表达或缺失使细胞间的信号传导异常，从而调节细胞异常增生，可能在皮肤鳞状细胞癌发生发展的过程中发挥重要作用，其具体机制还有待于进一步研究。

参考文献

[1] 赵辨.临床皮肤病学[M].3版.南京：江苏科学技术出版社，2001：1106-1110．

[2] 孙建方.皮肤肿瘤的研究现状及存在问题[J].国际皮肤性病学杂志，2007，33(3)：127-128.

[3] DONG JT，LAMB PW，RINKER-SCHAEFER CW，et a1．KAI1，a metastasis suppressor gene for prostate cancer on human chromosome 11P11.2 [J].Science,1995,268(5)：884-886．

[4] 徐建华，郭晓钟，任丽楠，等. KAI1基因抗胰腺癌细胞转移的研究[J].中华消化杂志， 2004，24 (9): 541-543.

[5] 欧阳运薇，潘小玲，屈艺，等. KAI1基因对宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响[J].四川大学学报:医学版，2008，39(5) :753-756.

[6] Kim J H, Kim M A, Lee H S, et al. Comparative analysis of protein expressions in primary and metastatic gastric carcinomas [J]. Human Pathol, 2009, 40 (3) : 314 - 322.

[7] Kauffman E C, BarocasD A, Chen Y T, et al. Differential expression of KA I1 metastasis supp ressor protein in renal cell tumor histological subtypes[J]. J Urol, 2009, 181 (5) : 2305 - 2311.

作者简介：吴晓媚，女，(1976-)，广东珠海人，遵义医学院第五附属（珠海）医院病理科，主治医师

项目资助：广东省珠海市卫生局资助项目(№2011074)