枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼生产性能及消化酶活性的影响

摘要：为研究枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）对黄河鲤鱼（Cyprinus carpio）的生产性能、肠道及肝胰脏消化酶活性的影响，将黄河鲤鱼随机分为5组，分别饲喂含0（对照组）、0.1‰、0.2‰、0.3‰、0.4‰枯草芽孢杆菌的日粮，试验期为60 d。结果表明，鱼体摄食枯草芽孢杆菌后消化道的消化酶活性关系为：食糜>中肠组织>肝胰脏。黄河鲤鱼饲料中枯草芽孢杆菌（有效活菌数为2×109 CFU/g）的适宜添加量为0.2‰～0.3‰。

关键词：黄河鲤鱼（Cyprinus carpio）；枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）；生长性能；消化酶；活性

中图分类号：S948；S965.116 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）10-2380-03

随着水产养殖集约化程度不断提高，水体富营养化、农药残留、病原微生物抗药性等问题相继出现将严重影响食品安全。微生态制剂因具有无残毒、无抗药性、不污染环境等优点，并具有改善养殖动物消化道有益菌群、抑制或杀死有害菌[1]、提高动物免疫力[2]、促进动物生长及消化[3]、提高动物的健康水平等功能，在水产动物营养与饲料领域受到广泛关注。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是常用的微生态制剂，既可以改善水质[4]，又可以产生多种酶类[5]，并且能够产生芽孢而耐高温高压，在饲料加工过程很少失活，被广泛应用于水产饲料添加剂中。近年来，有关枯草芽孢杆菌应用于水产动物生产性能及消化酶活性的研究较多[6-9]，但目前尚未见到关于枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼（Cyprinus carpio）生长性能及消化酶活性影响的研究报道。本研究通过在黄河鲤鱼饲料中添加枯草芽孢杆菌，研究其对黄河鲤鱼的生长及消化酶活性的影响，以期为黄河鲤鱼健康养殖和枯草芽孢杆菌在黄河鲤鱼饲料中的合理利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与饲料

黄河鲤鱼购自河南省引种育种中心，初始体重为（25.27±0.27） g，分置于郑州牧业工程高等专科学校水产实验室容积为90 cm×45 cm×50 cm的15个玻璃水族箱中，水深30 cm。养殖系统为室内循环水系统，包括丝棉、砂滤、活性炭过滤等，流速为2～3 L/min，溶氧量、氨氮量和温度分别为（8.20±0.90） mg/L、（0.03±0.02） mg/L和22～24 ℃。饲料选用郑州启元饲料科技有限公司生产的鲤鱼全价配合颗粒饲料001#，不含枯草芽孢杆菌，其主要营养水平见表1。

1.2 试验方法

1.2.1 试验设计及饲养管理 黄河鲤鱼用基础饲料投喂驯化，以鱼体重的2.0%～2.5%投喂。每天投喂3次，8∶30、13∶30和18∶30各投喂一次，使其饱食而无饲料剩余。7 d驯化结束后，每个水族箱内选择健康、重量基本一致的试验鱼25尾，随机分为5组，其中Ⅰ组为对照组，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组为试验组，每组设3个重复，分别投喂在基础日粮中添加0.1‰、0.2‰、0.3‰、0.4‰枯草芽孢杆菌（无锡中顺生物技术有限公司产品，有效活菌数为2×109 CFU/g）的试验日粮，共计60 d。

1.2.2 生长性能指标的测定 试验结束后将黄河鲤鱼在玻璃水族箱中饥饿1 d，以减少肠道中食物残留对肠道消化酶活性的影响，对每尾鱼空腹称重。

增重率=[（末均重-初均重）/初均重]×100%；

饲料系数=饲料摄食量/（末均重-初均重）。

1.2.3 消化酶活性的测定 从每组每个水族箱中取3尾黄河鲤鱼，于冰盘上解剖，取出肠道和肝胰脏，剔除脂肪组织，用4 ℃预冷的去离子水冲洗，然后用滤纸轻轻吸干水分，放入-20 ℃冰箱中冷却保存，待检测消化酶活性。酶活性测定样品的制备参照文献[10]。酶粗提液蛋白质含量以牛血清白蛋白做标准，使用考马斯亮蓝法测定[11]；蛋白酶活性测定使用福林-酚试剂法[12]；淀粉酶使用淀粉-碘比色法[13]；植酸酶酶活性测定采用FeSO4-铝蓝法[14]。

1.2.4 数据处理 试验数据用Excel 2007作处理，所有数值用平均数±标准误差表示，对数据作单因素方差分析，做LSD多重比较，P

2 结果与分析

2.1 枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼生产性能的影响

添加枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼生产性能的影响见表2。由表2可知，添加枯草芽孢杆菌0.2‰、0.3‰、0.4‰试验组的增重率与对照组相比，均有显著性差异（P0.05）。与对照组相比，添加枯草芽孢杆菌0.2‰、0.3‰、0.4‰试验组的饲料系数显著性降低（P0.05），其中，添加0.2‰、0.3‰试验组的饲料系数也显著性低于0.4‰试验组（P

2.2 枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼肠道食糜消化酶活性的影响

枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼肠道食糜消化酶活性的影响见表3。由表3可知，添加枯草芽孢杆菌0.2‰、0.3‰、0.4‰试验组鱼食糜蛋白酶活性显著提高（P

2.3 枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼中肠组织消化酶活性的影响

枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼中肠组织消化酶活性的影响见表4。由表4可知，与对照组相比，添加枯草芽孢杆菌0.2‰、0.3‰、0.4‰试验组的鱼中肠组织蛋白酶活性显著提高（P0.05）；添加枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼中肠组织淀粉酶活性无显著影响（P>0.05）。

2.4 枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼肝胰脏消化酶活性的影响

添加枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼肝胰脏消化酶的影响见表5。由表5可知，与对照组相比，添加枯草芽孢杆菌0.1‰、0.2‰、0.3‰、0.4‰试验组对黄河鲤鱼肝胰脏蛋白酶活性无显著影响（P>0.05），但显著地降低了肝胰脏淀粉酶活性（P

3 小结与讨论

3.1 枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼鱼种生长性能的影响

试验结果显示，饲料中添加枯草芽孢杆菌0.2‰、0.3‰、0.4‰都能显著促进黄河鲤鱼增重率和降低饲料系数，但添加0.4‰对黄河鲤鱼的增重率和饲料系数的效果又不如添加0.2‰、0.3‰，本研究结果与潘康成等[14]、华雪铭等[15]、管越强等[6]研究芽孢杆菌影响鲤鱼、暗纹东方鲀幼鱼和中华鳖稚鳖的增重率和饲料系数的结果一致。芽孢杆菌菌体含有大量营养物质，另外在芽孢杆菌发酵或代谢过程中产生多种酶类或者其他促生长的化合物，有助于动物对食物的消化和吸收，促进其生长。但是添加过量枯草芽孢杆菌造成机体肠道菌群结构失调，降低了内源酶对营养物质的降解作用，从而降低了动物的生产性能[16]。

3.2 枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼消化酶活性的影响

本研究中添加枯草芽孢杆菌后黄河鲤鱼食糜淀粉酶和蛋白酶都有提高，且添加0.3‰试验组提高最为显著；而各添加组对肠道淀粉酶无显著影响，添加0.4‰试验组对蛋白酶影响最显著；同时各添加组显著抑制了肝胰脏淀粉酶活性，而对肝胰脏蛋白酶活性无显著影响。综合来看，鱼体摄食枯草芽孢杆菌后消化道的酶活性关系为：食糜>肠道>肝胰脏。这与王红权等[17]研究异育银鲫摄食几种不同动物蛋白源饲料后消化酶活性变动结果是一致的。肠道中酶活性主要来源芽孢杆菌萌发期分泌的蛋白酶、淀粉酶等及食物刺激机体肠道分泌消化酶，故食糜中的酶活性是最高的。

本研究结果表明，在黄河鲤鱼饲料中添加0.2‰～0.3‰枯草芽孢杆菌（有效活菌数为2×109 CFU/g）有益于黄河鲤鱼的消化及生长。

参考文献：

[1] KESARCODI-WATSON A， KASPAR H， LATEGAN M J， et al.Probiotics in aquaculture： The need，principles and mechanisms of action and screening processes[J]. Aquaculture，2008， 274（1）：1-14.

[2] EL-HAROUN E R，GODA A M A S， CHOWDHURY M A K. Effect of dietary probiotic Biogen supplementation as a growth promoter on growth performance and feed utilization of Nile tilapia Oreochromis niloticus（L）[J].Aquaculture Research，2006，37（14）：1473-1480.

[3] 郑 虹，施巧琴，施碧红，等.芽孢杆菌对养殖水体净化作用的比较研究[J].微生物学杂志，2005，25（6）：41-44.

[4] 曹煜成，李卓佳，冯 娟，等.地衣芽孢杆菌胞外产物消化活性的研究[J].热带海洋学报，2005，24（6）：6-12.

[5] 袁丰华，林黑着，李卓佳，等.凝结芽孢杆菌对尖吻鲈的生长、消化酶及非特异性免疫酶的影响[J].上海海洋大学学报，2010， 19（6）：792-797.

[6] 管越强，周 环，张 磊，等.枯草芽孢杆菌对中华鳖生长性能、消化酶活性和血液生化指标的影响[J].动物营养学报，2010， 22（1）：235-240.

[7] 仇 明，封功能，齐志涛，等.枯草芽孢杆菌对斑点叉尾鮰生长性能及消化酶活力的影响[J].饲料工业，2010，31（20）：15-18.

[8] 刘小刚， 周洪琪， 华雪铭. 微生态制剂对异育银鲫消化酶活性的影响[J].水产学报，2002，26（5）：448-452.

[9] WANG Y B， XU Z R.Effect of probiotics for common carp （Cyprinus carpio） based on growth performance and digestive enzyme activities[J]. Animal Feed Science and Technology，2006，127（3-4）：283-292.

[10] 武金霞.生物化学实验原理与技术[M].保定：河北大学出版社，2005.70-71.

[11] 苏拔贤，范培昌，程明哲.生化技术导论[M].北京：人民教育出版社，1978.52-54.

[12] 张秀明.现代临床生化检验学[M].北京：人民军医出版社，2001.

[13] 陆文清，刘 伟，刘兴海.固体发酵饲用植酸酶酶活的快速测定方法[J].饲料研究，2000（1）：11-12.

[14] 潘康成，何明清，刘克琳.微生物添加剂对鲤鱼生长和消化酶活性的影响研究[J].饲料工业，1997，18（10）：41-42.

[15] 华雪铭，周洪琪，邱小踪，等.饲料中添加芽孢杆菌和硒酵母对异育银卿的生长及抗病力的影响[J].水产学报，2001，25（5）：448-453.

[16] 付天玺，许国焕，吴月嫦，等.凝结芽孢杆菌对奥尼罗非鱼消化酶活性、消化率及生长性能的影响[J].淡水渔业，2008，38（4）：30-35.

[17] 王红权，孙桂芳，赵玉蓉.异育银鲫摄食5种不同动物蛋白源饲料后消化酶活性变动比较[J].内陆水产，2000（2）：9-11.