脑蛋白水解物注射液的生物安全性研究

[摘要] 目的 研究脑蛋白水解物注射液的生物安全性。 方法 对过敏反应、异常毒性、降压物质等非标准收载项目以及细菌内毒素等标准项目进行研究分析，结果用于评价脑蛋白水解物注射液的生物安全性。 结果 按照设计的质量标准进行检查，1批样品出现了过敏反应，6批样品出现了降压反应，其余样品符合标准要求。 结论 需要进一步关注脑蛋白水解物注射液的生物安全性问题。

[关键词] 脑蛋白水解物注射液；生物安全性；检查

[中图分类号] R969.4[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210（2012）03（a）-0105-02

近年来，有关脑蛋白水解物注射液引起的不良反应报道呈增加的趋势，主要表现为过敏反应、恶心、腹泻、血压下降等，其质量标准分别收载于国家药品标准地标升国标第十六册以及进口药品注册标准JX20040206，所涉及的生物安全性标准检查项目仅有细菌内毒素检查一项，按照化学药品注射剂安全性检查法应用指导原则的要求显然是不够的[1]，本文增加了对过敏反应、异常毒性以及降压物质的检查项目研究，试图为进一步控制该药质量提供实验基础，同时也为此类药物在药害事件的应急处理中提供一定的应用价值。

1 仪器与试药

1.1 药物与仪器

脑蛋白水解物注射液（脑蛋白A，由吉林省辉南辉发制药股份有限公司生产，每支5 mL，批号：081201），脑蛋白水解物注射液（脑蛋白B，由海南斯达制药有限公司生产，每支2 mL，批号：0807040），脑蛋白水解物注射液（脑蛋白C，由新乡东升制药有限公司生产，每支10 mL，批号：0812111，），马血清（由广州蕊特生物科技有限公司生产，每瓶100 mL，批号：090318），磷酸组胺标准品（由中国药品生物制品检定所提供，每支25 mg，批号：0540-9411），生理盐水（由昆明市宇斯药业有限责任公司生产，每瓶100 mL，批号：08070204）。

1.2 试验动物

Hartley品系的豚鼠，普通级，280～320 g，合格证号为2008A0026；NIH品系小鼠，SPF级，18～20 g，合格证号为2008A0021，均购自广东省医学实验动物中心，动物使用许可证号为SYXK（粤）2009-0050；实验用猫，2.5 kg，购于市场，并在实验室适应性饲养2 d。

2 方法与结果

2.1 过敏反应检查

2.1.1 常规隔日腹腔注射致敏的过敏反应检查[2]

取豚鼠30只，随机分为5组（生理盐水组，马血清组，脑蛋白A组，脑蛋白B组，脑蛋白C组），每组6只，马血清以氯化钠注射液稀释至10%，其余各组采用供试品原液。各组豚鼠分别于第0、2、4天腹腔注射相应供试液0.5 mL进行致敏。第14天和第21天，每组各取3只豚鼠由静脉注射相应供试液1.0 mL进行激发，记录过敏反应的发生情况。结果马血清组和脑蛋白A组各6只豚鼠在腹腔注射致敏的第14天和21天，药物激发后全部出现了过敏反应，马血清组还各有1只豚鼠出现休克死亡；其余3组未出现过敏反应；另外试验的7批脑蛋白水解物注射液均未出现过敏反应。

2.1.2 改进的连续静脉注射致敏法的过敏反应检查[3]

2.1.2.1 豚鼠静脉注射马血清引起过敏反应的时效性取豚鼠16只，雌雄各半，按激发时间分为4组，分别于第0、1、2天从静脉注射10%马血清0.5 mL进行致敏，并于第7、8、9、10天每天各取豚鼠4只，从静脉注射马血清1.0 mL进行激发，观察并记录过敏反应的发生情况。结果在静脉注射马血清致敏豚鼠的第7、8、9、10天，经激发后每组4只豚鼠中分别有2、4、4、4只豚鼠出现明显的过敏反应；结果表明该方法致敏后第8天是一个合适的激发时间。

2.1.2.2 豚鼠静脉注射药物引起过敏反应检查方法取豚鼠20只，随机分为5组（生理盐水组，马血清组，脑蛋白A组，脑蛋白B组，脑蛋白C组），每组4只，雌雄各半，马血清以氯化钠注射液稀释至10%，其余各组采用供试品原液。分别于第0、1、2天静脉注射上述供试液0.5 mL进行致敏，并于第8天从豚鼠静脉注射供试液1.0 mL进行激发，观察并记录过敏反应的发生情况。结果马血清组和脑蛋白A组豚鼠在静脉注射致敏的第8天，药物激发后均出现了过敏反应（马血清组2只豚鼠出现死亡）；其余3组未出现过敏反应；另外试验的7批脑蛋白水解物注射液均未出现过敏反应。

2.2 异常毒性检查

本品的成人用量为每次10～30 mL，每天使用1次，取平均值计算成人日均用量相当于0.33 mL/kg。每批样品进行检验时各取小鼠5只，从尾静脉注射本品原液0.5 mL/20 g，所用剂量相当于成人日均用量的75倍，注射后观察48 h，记录小鼠的精神状态及存活情况。

取25个厂家的37批脑蛋白水解物注射液，以0.5 mL/20 g的剂量进行异常毒性检查，各组小鼠均健康存活，体重增加，由于该供试品剂量已是最大检查剂量，受试小鼠均未出现明显的毒性反应和死亡，提示该剂量的设置是可行的。

2.3 降压物质检查

供试液采用本品原液，检查剂量分别为2.00、1.00、0.50、0.33 mL/kg，分别相当于成人日均临床用量的6.0、3.0、1.5倍及临床日均用量；组胺标准品的检查剂量为0.1 μg/kg。

取上述3批脑蛋白水解物注射液，以2.0 mL/kg（相当于成人日均用量的6倍）和1.0 mL/kg的剂量进行降压物质检查，结果供试品组的降压幅度明显高于0.1 μg/kg组胺标准品引起的降压幅度；以0.50 mL/kg的剂量（相当于成人日均用量的1.5倍）进行检查时，只有脑蛋白A出现明显的降压反应，另对22个厂家各1批样品进行降压物质检查，结果有7批供试品出现明显的降压反应；而以0.33 mL/kg的剂量（相当于成人日均用量）进行降压物质检查时，脑蛋白A仍出现明显的降压反应，另外7批供试品中仍有5批出现明显的降压反应。

2.4 细菌内毒素检查

现行质量标准规定本品的细菌内毒素限值为1.5 EU/mL，按照《中国药典》2010年版附录的规定进行细菌内毒素常规检查，每批设立阴性对照管（NC）、阳性对照管（PC）、供试品管（NPC）、供试品阳性管（PPC）各两个重复管，结果25批供试品内毒素检查结果均符合规定。见表1。

3 讨论

脑蛋白水解物注射液是本单位2009年度进行国家药品评价抽验的品种，由于其质量标准中所涉及的生物安全项目只有细菌内毒素1项，根据近年来该品种不良反应报道逐渐增加的实际情况，加强有关生物安全性指标的非标准方法研究是十分必要的。

本文采用非标方法进行了过敏反应、降压物质、异常毒性的检查研究，考虑到该注射剂品种为生化技术提取制备的高危品种，因而根据化学药品注射剂安全性检查法应用指导原则的要求进行研究时对检查限值从严处理，确保所使用的检查剂量不低于临床用量。研究结果显示该品种的细菌内毒素和异常毒性检查均符合拟定标准的规定；采用笔者此前建立并应用于多个品种的静脉注射致敏的过敏反应检查法[4-6]，与经典的腹腔注射过敏反应检查结果相比较，检验周期可以缩短1～2周，且二者结果高度一致，除了1批样品过敏反应检查不符合规定外，其余均符合规定；而在相当于成人日均用量的剂量下（0.33 mL/kg）尚有6批样品降压物质不符合规定。根据实验结果可以启动进一步应急处理的程序，为此类药害事件的快速处理奠定良好的基础。

以上结果提示临床使用本品存在一定的过敏反应和血压下降隐患，与其临床不良反应类似，需进一步加强和改进生产工艺。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京：中国医药科技出版社，2010：附录212.

[2]肖贵南，盛英美，程朝辉，等.快速检测脑蛋白水解物注射液引起的过敏反应[J].中国医院药学杂志，2010，30（15）：7-10.

[3]肖贵南，盛英美，陈浩桉，等.白介素-4和免疫球蛋白E含量指标在快速检测药物引起过敏反应中的作用研究[J].中国药房，2010，21（21）：1946-1948.

[4]肖贵南，程朝辉，陈浩桉.中药注射剂引起的过敏反应及其检测技术[J].广东药学院学报，2009，25（6）：636-638.

[5]肖贵南，盛英美，陈浩桉，等.清开灵注射液引起过敏反应的快速检测[J].华西药学杂志，2010，25（5）：571-573.

[6]肖贵南，盛英美，程朝辉，等.快速检测香丹注射液引起的过敏反应[J].中成药，2010，32（8）：1453-1455.

（收稿日期：2011-11-10本文编辑：卫 轲）