辛芍提取物中5种成分在Caco―2细胞中的吸收特性

[摘要] 研究辛芍提取物在Caco-2细胞中的吸收特性。该文建立人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞模型，采用UPLC-MS测定辛芍提取物中芍药内酯苷、没食子酸、咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素5个活性成分在细胞裂解液中的含量。并用此模型分别研究pH，时间，温度以及药物浓度对辛芍提取物中芍药内酯苷等5种成分的吸收影响，并且考察在P-糖蛋白抑制剂存在与否时5种成分的转运情况，预测这5种成分在Caco-2细胞中的吸收机制。实验结果表明，在37 ℃下，辛芍组方提取物中5种成分的摄取具有一定的时间依赖性；在0.5～12.5 g・L-1，摄取呈浓度依赖性，符合被动扩散过程；在pH 4.0～7.4，咖啡酸、灯盏乙素、灯盏甲素3个成分的细胞吸收量随pH增加而显著降低（P

[关键词]辛芍提取物； Caco-2细胞； 吸收； UPLC-MS； 被动扩散

[Abstract] To study the absorption characteristics of Xinshao extracts in Caco-2 cells. In this paper， human colon adenocarcinoma cell line Caco-2 cell model was established， and UPLC-MS method was applied to determinate the contents of five components of Xinshao extracts（albiflorin， gallic acid， caffeic acid， scutellarin and apigenin-7-O-glucronide） in cell lysates. This model was also used to study the effect of different drug concentrations， pH， time and temperature on the absorption of five components， investigate the transport of the five components of Xinshao extracts under the conditions with or without P-glycoprotein inhibitors， and predict the absorption mechanism of these five components in Caco-2 cells. The experimental results showed that the absorption of five components of Xinshao extracts in Caco-2 cells was time-dependent at 37 ℃， and concentration-dependent in the range of 0.5-12.5 g・L-1， with a passive diffusion mechanism. At the pH of 4-7.4， the absorption of caffeic acid， scutellarin and apigenin-7-O-glucronide was significantly declined with the increase of pH（P

[Key words] Xinshao extract； Caco-2 cells； absorption； UPLC-MS； passive diffusion

doi：10.4268/cjcmm20161126

辛芍组方，来源于贵州民间验方，由灯盏细辛和赤芍配伍组成，在民间以其汤剂煎服用于治疗偏瘫，有较好的临床基础[1-2]。灯盏细辛是菊科植物短葶飞蓬Erigeron brevisca-pus（Vant .） Hand.-Mazz.的干燥全草，具有活血通络、祛风散寒之功效[3]。赤芍为毛莨科植物川芍药Paeonia veitchii Lynch的干燥根，具有清热凉血、散瘀止痛之功效[4]。课题组前期对辛芍组方的化学成分、药理作用、体内药动学特征等进行了大量研究[5-10]，但其体内吸收过程并不很明确，并且国内外对其吸收机制的研究也少有报道。本实验采用Caco-2细胞模型结合液质联用技术[11-12]研究辛芍提取物中5种活性成分的吸收机制，考察这几种成分的摄取、跨膜转运等特点，从细胞水平提供药物分子吸收的综合信息。为辛芍提取物相关制剂的研究提供一定的科学依据，并为中药配伍制剂的研究方法提供一种有益的尝试。

Caco-2细胞实验表明，辛芍提取物各成分在Caco-2细胞的摄取量与药物浓度呈良好的线性关系，表现为一定的浓度依赖性，而咖啡酸的摄取随着浓度的增加，先增加后降低，其具体机制有待进一步研究。由于在相应浓度范围内，各个成分的细胞吸收表现出一级速率过程的特征，表明辛芍提取物中5种成分的吸收机制可能为被动扩散。

在pH对细胞吸收的影响实验中，碱性环境可能不利于芍药内酯苷等4种成分的吸收，可能是因为其属于黄酮类和酚酸类成分，其分子结构中存在酚羟基，弱碱性环境会影响其存在状态不利于其吸收[17]。因此综合选择有利于药物吸收的最佳pH，将更加有助于药物深入研究。进一步实验表明，环孢菌素A和维拉帕米能明显增加灯盏乙素和咖啡酸的摄取量，因此灯盏乙素和咖啡酸的吸收过程可能有P-糖蛋白的参与[18]。

本实验建立了辛芍提取物中主要活性成分在

Caco-2细胞中的超高效液相色谱-质谱联用分析方法，通过方法学考察，表明此方法准确、快速、灵敏。通过Caco-2细胞模型的吸收实验，获得了芍药内酯苷等5种成分的细胞吸收机制及其影响因素，为辛芍提取物的剂型设计及临床应用提供细胞水平的实验基础和科学依据。

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