NSCLC乙酰肝素酶及C-erbB-2表达分析

【摘要】目的：探讨非小细胞肺癌（nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）乙酰肝素酶（HPA）和C-erbB-2表达与NSCLC发生发展和浸润转移的关系。方法：NSCLC组为56例非小细胞肺癌保存蜡块，其中临床分期Ⅰ期15例、Ⅱ期28例、Ⅲ期13例。病理分级高分化16例、中分化22例、低分化18例，对照组为18例癌旁组织。采用免疫组织化学染色法检测两组HPA和C-erbB-2蛋白表达情况。结果：NSCLC组HPA表达阳性率（43/56例，76.8％）显著高于对照组（2/18例，11.1％），淋巴结转移NSCLC组显著高于无淋巴结转移NSCLC组，不同临床分期、不同病理分化程度NSCLC组HPA阳性表达率差异有显著性。NSCLC组C-erbB-2阳性率（40/56例，71.4％）显著高于对照组（2/18例，11.1％），NSCLC组不同临床分期、不同病理分化程度的C-erbB-2阳性表达率差异有显著性。结论：HPA和C-erbB-2高表达与NSCLC的发生、发展及浸润转移有显著关系。

【关键词】非小细胞肺癌；乙酰肝素酶；C-erbB-2；免疫组织化学

文章编号：1009-5519（2008）09-1287-02 中图分类号：R36 文献标识码：A

肿瘤侵袭和转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一，但目前对肿瘤侵袭转移的确切机制尚不十分清楚[1]。乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是一种内糖苷酶，可降解细胞外基质（extra cellular matrix，ECM）和基底膜（basement membrane，BM）中的硫酸乙酰肝素（heparan sulfate，HS），HPA在恶性肿瘤中高表达，与肿瘤血管生成关系密切[2]。C-erbB-2为促肿瘤细胞生长的基因，与肺癌发生发展有关[3]。本研究应用免疫组织化学技术检测56例非小细胞肺癌（nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）中HPA和C-erbB-2的临床表达特征及相互关系，以期了解HPA和C-erbB-2表达在NSCLC发生发展和预后中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料：56例病理标本取自2000年1月~2005年12月在本院胸外科手术的NSCLC患者的保存腊块，其中男30例，女26例，年龄45~69岁，平均（57.5±6.3）岁，经病理检查证实为NSCLC。56例标本中鳞癌22例、腺癌20例、腺鳞癌8例、大细胞癌6例。高分化癌16例、中分化癌22例、低分化癌18例。临床分期Ⅰ期15例、Ⅱ期28例、Ⅲ期13例，有淋巴结转移25例，无远处淋巴结转移31例。对照组18例癌旁组织标本选用离肿块5cm的肺组织。

1.2 免疫组织化学染色分析：兔抗人HPA（1∶500）和C-erbB-2单克隆抗体（1∶500）为美国Sauta Cruz公司产品，免疫组化检测试剂盒（SP-9000）及DAB酶底物显色试剂盒等购自北京中杉金桥生物技术有限公司。NSCLC标本常规石蜡包埋，5 ?滋m切片，60℃烤片1 h；二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；将组织切片放入柠檬酸缓冲液内，高压锅热诱导抗原修复；3%H2O2作用10 min抑制内源性过氧化酶；正常非免疫动物血清封闭液室温孵育10 min，阻断非特异性着色；加一抗4℃过夜，0.01M PBS冲洗；生物素标记二抗37℃孵育30 min，0.01M PBS冲洗；链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶37℃孵育30 min，0.01M PBS冲洗；DAB显色，HE复染，中性树胶封固。0.01M PBS代替一抗作阴性对照。结果判定：随机选择5个高倍视野进行观察，平均阳性细胞数≥10%为阳性片。

1.3 统计分析：所得数据以例数或％表示，采用SPSS 11.0统计学软件进行χ2分析，P

2 结果

2.1 NSCLC中HPA免疫组化检测结果：HPA阳性为肿瘤细胞胞浆出现棕黄色颗粒。NSCLC中HPA阳性表达率为76.8%（43/56），癌旁组织为11.1%（2/18），差异有非常显著性。不同病理类型NSCLC HPA表达无显著区别，不同临床分期NSCLC HPA阳性表达率差异有显著性。随着肿瘤病理分化程度由高至低，NSCLC HPA阳性表达明显增强。有淋巴结转移的NSCLC中HPA表达明显高于无淋巴结转移组。结果见表1。

2.2 NSCLC中C-erbB-2免疫组化检测结果：NSCLC组织中C-erbB-2阳性表达率为71.4%（40/56），癌旁组织为11.1%（2/18），差异有显著性。不同临床分期及病理分级NSCLC的C-erbB-2阳性表达率差异有显著性，有淋巴结转移的NSCLC中C-erbB-2阳性率显著高于无淋巴结转移的NSCLC。结果见表1。

2.3 NSCLC中HPA与C-erbB-2表达相关性结果：按HPA阳性与阴性将56例患者分为HPA阳性组（43例）与HPA阴性组（13例），HPA阳性组43例中C-erbB-2阳性39例，占90.7％（39/43），HPA阴性组13例中C-erbB-2阳性1例，占7.7％（1/13），统计学分析表明两组差异有显著性（P

3 讨论

肺癌等恶性肿瘤之所以成为人类致命疾病，既在于肿瘤细胞生长失去控制，更在于肿瘤细胞具有转移能力[4]。肿瘤细胞对细胞外基质和基底膜的侵袭与新生血管的形成是肿瘤生长和转移的两个重要条件，其中多种生物因子起重要作用。研究表明，HPA是肿瘤细胞扩散和转移过程中的一个关键酶，能够降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖（HSPG），在肿瘤侵袭、转移及肿瘤血管生成中起重要的作用[5]。HSPG在基底膜和细胞外基质的装配和屏障功能以及在生物活性分子的隔离和稳定中起着重要作用。硫酸乙酰肝素可在数个位点上降解HPSE，破坏ECM和BM的完整性，利于肿瘤细胞穿越ECM和血管壁，促进肿瘤细胞侵袭和转移，导致血管内皮细胞的迁移和生长促进新生血管的形成[6，7]。

本结果显示，HPA在NSCLC癌旁组织中阳性表达率低，在NSCLC中阳性表达率为76.8%（43/56），组间差异有显著性。在NSCLC中，HPA的阳性表达率在不同临床分期和不同病理类型中具有显著区别，伴有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组，说明HPA表达与NSCLC浸润、转移及预后相关。HPA表达增加促进了肿瘤细胞的转移，是由于HPA大量降解血管外周ECM中的乙酰肝素糖蛋白，使ECM和BM结构破坏，细胞间质屏障功能降低，并可释放结合在HPA上的uPA和tPA，溶解基质网状结构，使膜的功能降低，导致肿瘤的浸润和转移。

肺癌的发生、发展及预后与某些癌基因的激活和抗癌基因的丢失密切相关[8]。原癌基因HER-2/neu/c-erbB-2位于17号染色体q21区带上，编码一分子量为185kDa的跨膜受体蛋白[9，10]。本研究观察了NSCLC中C-erbB-2蛋白的表达情况，显示其阳性率为71.4%(40/56)，而癌旁组织中阳性率较低，为11.1％(2/18)。NSCLC不同病理分级和临床分期C-erbB-2阳性表达率差异有显著性，表明NSCLC中存在c-erbB-2的特征性过度表达，c-erbB-2癌基因与NSCLC发生发展有关，提示C-erbB-2表达可作为一个独立于传统预后指标的独立性预后因索。

NSCLC中HPA与C-erbB-2表达相关性分析提示，HPA阳性组C-erbB-2阳性率为90.7％，HPA阴性组C-erbB-2阳性率为7.7％，差异有显著性，提示HPA表达与C-erbB-2表达差异有显著性，二者在NSCLC的发生发展中具有协同作用，在促进肿瘤细胞穿越血管壁、进行扩散和转移中发挥共同作用，也提示HPA与C-erbB-2表达可作为临床判定NSCLC生物学行为和预后的参考指标。

综上所述，对HPA和C-erbB-2基因表达的研究可为研究NSCLC发病机制提供新的途径，为NSCLC的有效靶基因的预防和治疗提出了理论基础。

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收稿日期：2008-01-08