LY294002对高糖培养原代足细胞snail表达的影响

【摘要】 目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002对高糖培养的大鼠肾小球足细胞snail表达的影响，为进一步研究糖尿病肾病足细胞损伤的机制提供依据。方法：体外培养大鼠原代肾小球足细胞，经细胞免疫荧光法鉴定。足细胞分化完全后同步化，分为正常糖组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+LY294002（2 mg/L）组，培养上述细胞48 h后观察细胞形态，Western blot法半定量检测snail的表达。结果：高糖可导致足细胞足突消失，细胞体积变大，snail表达增强（P

【关键词】 高糖； 足胞； PI3K抑制剂； snail

Effect of LY294002 on Snail of Glomerular Podocytes under High Glucose Condition in Rats/JIA Miao，XIE Yu-xian，QIU Hong，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（35）：027-030

【Abstract】 Objective：To evaluate the effect of the blocker of PI3K LY294002 on the expression of snail in high glucose-induced podocyte cell.Method：The glomeruli were isolated and gathered for primary culture.The cells were randomized into normal glucose（NG） group，high glucose（HG） group，mannitol control（MG） group，HG+LY294002（2 mg/L）group. The culture was continued for 48 h.The expression of snail was observed with Western blot methods.Result：Compared with NG group，the podocytic-process retraction and partial effacement and intercellular junction losing appeared in HG group，the expression of snail was increased（P

【Key words】 Glucose； Podocytes； LY294002； Snail

First-author’s address：The People’s Hospital of Suzhou National New & Hi-tech Industrial Development Zone，Suzhou 215129，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.35.007

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K） 是生物体内重要的细胞内激酶。其主要的下游是丝氨酸/苏氨酸激酶Akt。PI3K/Akt信号通路在细胞代谢、凋亡、增殖与分化等方面发挥着重要作用[1-2]。snail作为一种锌指转录因子，其可以与E-cadherin启动子上的E-box结合，从而使上皮细胞粘附分子E-cadherin的表达下调，使上皮细胞间的粘附性降低，参与上皮细胞的转分化[3]。目前关于snail在肾病方面的研究多集中在肾小管上，对足细胞的研究较少。本研究通过观察LY294002对高糖培养的大鼠原代足细胞snail表达的影响，旨在为糖尿病肾病的诊疗提供新的理论依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物与主要试剂 雄性SD大鼠200～220 g购自上海斯莱克实验动物中心，质量合格证号2007000580977，实验动物使用许可证号码SCXK（沪）2012-0002。兔抗snail、synaptopodin购自美国Abcam，LY294002购自Sigma-Aldrich Corporation，DMEM-F12培养基、RPMI无糖培养基、培养基添加物ITS、胎牛血清购自美国Gibco公司。

1.2 实验方法

1.2.1 大鼠肾小球足细胞原代培养与鉴定 采用差异过筛法分离大鼠肾小球，方法参见文献[4-5]。无菌取肾后分离肾皮质后轻柔研磨并逐层分别通过80、150、200目筛网，收集200目筛网上的肾小球，并将其接种于细胞瓶中，采用翻转法培养，放置于37 ℃ 5%CO2恒温恒湿培养箱内，孵育4.5 h后将培养瓶翻转过来使其正常放置。第7～8天后，首次传代后的细胞培养7 d，待细胞长满瓶底后行倒置相差显微镜观察足细胞形态，并采用synaptopodin鉴定足细胞。

1.2.2 实验分组 使用正常糖培养基培养7 d至足细胞分化完全，相互间形成广泛连接，用无血清培养基继续培养24 h使各组细胞同步化。按下述分组分别更换不同培养基继续生长48 h。（1）正常浓度葡萄糖组（NG，GS 5 mmol/L）；（2）甘露醇对照组（MG，甘露醇30 mmol/L）；（3）高糖组（HG，GS 30 mmol/L）；（4）HG+LY294002（GS 30 mmol/L+ LY294002 2 mg/L）