Survivin基因在中耳胆脂瘤中的表达及其意义

【摘要】目的探讨Survivin基因在中耳胆脂瘤中的表达及其意义。方法选取我院2009年1月――2012年12月30例中耳胆脂瘤患者，设定为研究组，并选取30例健康者作为对照组，以免疫组织化学（Envision System）染色技术和RT-PCR法，分析对比Survivin基因在两组患者中的表达。结果研究组患者中20例（66.67%）Survivin基因蛋白染色呈现阳性，对照组未呈现阳性表达，只有极少数分散状阳性细胞，两组存在较明显统计学差异（P

【关键词】中耳胆脂瘤；Survivin基因；免疫组织化学

本文选取了30例中耳胆脂瘤患者，探讨Survivin基因表达，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料选取我院2009年1月――2012年12月30例中耳胆脂瘤患者，设定为研究组，其中男16例，女14例，并选取30例健康者作为对照组，其中男15例，女15例；年龄21-68，平均（35.8±3.5）岁。研究组病程2-10年，平均（5.6±1.6）年。选取已知阳性切片为阳性对照，PBS液作为阴性对照。

1.2方法两组均应用免疫组化方法进行测定。采选组织以4%甲醛固定液保持24h固定，常规法应用石蜡进行包埋，并切片，烘干。然后以常规法脱蜡。予以抗原修复后，滴入一抗，4℃环境下孵育过夜，后滴入二抗。以DAB显色试剂显色，在光镜下保持显色时间。选取苏木素进行复染，后以中性树胶实施封片，应用光镜予以观察。

半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法[1]：所选取组织标本从液氮取出然后研磨为粉状，加进适宜RNAiso Reagent对总RNA进行提取，以核酸/蛋白分析仪对mRNA进行测定，RNA OD值保持在1.6-1.8。RT-PCR：将存品总RNA（5-10ug），加入到标准反转录反应体系当中，46℃状态下保持60min，99℃状态下保持5min，5℃状态下保持5min。扩增PCR，以4.0ul cDNA作为模板，50ul标准化PCR反应体系，94℃4min变性；94℃30sec，59.3℃50sec，72℃50sec，实施30个循环态；于72℃10min进行延伸。内参照选取β-actin，退火温度设定59.8℃，然后将其扩增30循环。将5ulPCR产物放置在1.0%琼脂糖凝胶上保持电泳30min，应用溴乙锭进行染色。

表达判定标准[2]：Survivin蛋白免疫组化经染色细胞核呈现棕黄色表示其为阳性，每个标本均需随机选取3张切片统计其细胞数量。应用光镜200倍对阳性细胞数量进行统计，每片选择3个不相同视野，确保视野清晰，每个视野下观察到的阳性细胞（%）=阳性细胞数/总细胞数×100%。观察对比两组Survivin基因表达。

1.3统计学分析阳性细胞总计以 表示，以t检验，P

2结果

3讨论

中耳胆脂瘤属于耳科中常见疾病，会引发较为严重的颅内外并发症，对患者生命健康造成较为严重的影响。临床医学中还没有较为明确的阐明中耳胆脂瘤疾病发病机制，因此并不存在效果极佳的药物治疗措施，必须予以手术治疗。有资料显示，胆脂瘤上皮细胞因为凋亡而受到抑制是中耳胆脂瘤疾病发生、发展的重要原因。本文应用免疫组化法对Survivin进行，结果较为显著。Survivin基因属于较为新型的凋亡抑制蛋白（IAP），属于目前能够克隆的最小IAP。Survivin在组织当中的分布有较为显著的细胞选择性，胚胎组织当中具有较多的表达，但是终末分化成熟组织通常无法检测到其表达，大部分肿瘤组织中或是转化细胞均能够检测到其高表达现象[3]。

通过本文研究可以知道，胆脂瘤上皮Survivin表达比对照组健康外耳道者的皮肤上皮呀显著高出很多。Park等人有资料显示，Survivin在获得性胆脂瘤上皮中存在的表达要显著高于先天胆脂瘤。

总之，Survivin基因能够参与到中耳胆脂瘤疾病的发生、发展中，和胆脂瘤上皮细胞大量繁殖存在一定相关性，给基因治疗方法的研究应用提供了较有效的理论基础。

参考文献

[1]伍千元，李建军，李龙平.Survivin及Livin在中耳胆脂瘤组织中的表达及相关性研究[J].中国实用医学，2011，6（1）：3-4.

[2]杨宁，蒋立新.凋亡抑制蛋白Livin及Survivin在中耳胆脂瘤上皮的表达及意义[J].听力学及言语疾病杂志，2011，19（4）：356-358.

[3]殷团芳，任基浩.中耳胆脂瘤的发生及其与细胞凋亡的关系[J].山东大学耳鼻喉眼学报，2010，24（1）：29-33.