马鞭草提取总黄酮技术

论文摘要：目的为充分利用马鞭草植物资源，避免资源的浪费，探讨马鞭草总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从马鞭草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.2 028 mg/ml，回收率为101.4%，其纯度和产率均较高。结论 该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取马鞭草黄酮类物质的有效途径。

主题词： 马鞭草 总黄酮

中图分类号：Q949.777.5

马鞭草Herba verbenae始载于《名医别录》，为马鞭草科植物马鞭草Verbena oficinalis L.的全草，广泛分布于我国中南、西南及山西、甘肃、新疆、江苏和浙江等地。马鞭草性苦、辛，微寒，具有清热解毒、活血通经、利水消肿、截疟的功效，用于感冒发热、黄疸、痢疾、痛经、水肿、疟疾、跌打损伤等。其主治瘕积聚、经闭痛经、疟疾、喉痹、痈肿、水肿、热淋等症，可用于 治疗 疟疾、白喉、传染性肝炎、流行性感冒、丝虫病、咳嗽等。马鞭草亦可利尿，止血，促进泌尿系统结石的排出，减少黏膜出血，缓解疼痛，配合其它常用利水通淋化石的中药，临床常获良效。除此之外，其外用可治疗痔疮、关节痛、跌打损伤、水疝等。马鞭草含有鞭草苷、5二氢马鞭草苷、桃叶珊瑚苷、熊果酸、3α，24二羟基齐墩果酸、十六酸、 β谷甾醇、羽扇豆醇、蒿黄素、β胡萝卜素等化学成分。由于其在临床应用中有明显的疗效，近年又发现有新的药理活性， 现代 研究又发现马鞭草醇提取物具有抗生育、抗癌作用。因此马鞭草中的化学成分及药效物质引起了新的关注。马鞭草由于临床应用无毒副作用，前景具有潜在优势，对其研究受到重视。

近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。但超声技术应用于提取马鞭草中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取马鞭草总黄酮及鉴别。

1 仪器与试剂

1.1 仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40 kHz、昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪（上海顾村光电仪器厂）；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

1.2 试剂95%乙醇；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；乙酸镁AR；镁粉AR；正丁醇AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（ 中国 药品生物制品检定所）；新鲜马鞭草购自广西百色市人民菜市。

2 方法与结果

2.1 总黄酮成分提取取新鲜马鞭草，烘干，粉碎。称取马鞭草粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml左右为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。

2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定马鞭草中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

2.3 定量实验-总黄酮的含量测定

2.3.1 波长的选择

取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

2.3.2 标准曲线的绘制

分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测吸光度。

2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度A=0.106，根据回归方程：A=-0.03 110+13.52C， 计算 样品中总黄酮的含量C=0.2 028 mg/ml。

2.3.4 回收实验精密量取样品液2.00 ml，加入标准芦丁对照品2.00 ml（0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为101.4% 。

2.4 定性实验-总黄酮的鉴别

2.4.1 颜色反应

紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。

浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30 s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。

三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。

乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。

盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（一次加入），在泡沫处呈紫红色。

2.4.2 纸层析 取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。

3 讨论

3.1 实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为101.4%，提取效率高于传统方法，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。

3.2 黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。在 自然 界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。

黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、消心脑血管疾病、抗炎镇痛、调节免疫力、降血糖、 治疗 骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。本文实验结果表明，马鞭草中含有较为丰富的黄酮。因此，马鞭草具有广泛开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。

参考文献：

1、黄锁义，超声波提取马鞭草总黄酮及鉴别，论文网，2012.05