罗汉果组培快繁技术的优化

1消毒时间对外植体污染率和死亡率的影响

试验中的3组对照均出现不同程度的杂菌及霉菌的污染，同时也有因升汞消毒过度而导致芽体的死亡的现象，其中消毒6min的污染率最高，达79%，消毒10min的芽体死亡率最高，达47%，消毒8min为最佳消毒组，其芽的污染率、死亡率及成活率分别为31%，11%和58%(表1)。可见升汞消毒时间的控制是降低污染率的有效措施之一，8min是最佳时间。

2培养基对芽诱导的影响

不同的培养基配方对芽的诱导作用不同，对各组芽诱导率的统计如表2所示。由表2可见，当NAA的浓度过高时，有利于愈伤组织的形成而抑制了芽的诱导;当NAA的浓度过低时，愈伤组织能够得到有效控制，但芽体生长状态不佳，芽体生长慢且瘦小;当NAA为0.05mg/L时，有利于腋芽的重新诱导和生长，芽体不仅生长快而且粗壮，同时一定程度上抑制了愈伤组织的形成，因此培养基c为芽诱导的最佳配方。

3培养基对芽继代增殖的影响

继代培养10d左右可见茎段的腋芽开始形成幼芽，同时切口处膨大形成少量白色疏松的愈伤组织，进一步培养到25d左右即可由腋芽形成数个丛生芽和嫩梢，至此可以进行下次继代培养，继代培养的最优配方选择以繁殖系数和芽体的生长状态为依据。不同配方的培养基对不定芽的增殖的影响见表3。由表3可知，继代培养基中添加适量的IBA有利于腋芽的重新诱导和生长，而当加入GA3后芽的增殖系数有明显的增大，且当IBA和GA3的比例为1∶1时(配方c)，增殖系数最大，生长最快。

4培养基对根诱导的影响

不定芽转入生根培养基中20d后生根，不同生根诱导情况统计结果见表4。由表4可知，在1/2MS+IBA1.0生根培养基c中，根的诱导率达98%，长根最快，根系发达健壮，效果最佳;尽管NAA能有效诱导生根且根系发达，但由于形成大量的愈伤组织而易导致断根现象，从而影响炼苗和移栽的成活率。当在最佳生根培养基中培养的组培苗根数达5～6条时，即可在无光照的条件下将瓶盖打开，适时向培养基中加少量无菌水，3d后将苗移除、洗净后移栽到营养土中培养。培养钵置于有遮荫设施的温棚内，温度保持在25～30℃，移栽成活率达98.5%左右。

5讨论

尽管本试验的消毒效果较好，但污染率还是偏高。有研究表明，药用植物的根、茎、叶中均共生有多种植物内生菌［12］，内生菌的存在与组培污染有较大关系，例如蛇足石杉植物体内存在丰富的内生真菌，对其灭菌比较困难［13］。陈海燕等［14-15］已从罗汉果中能分离出内生菌，因此，罗汉果外植体污染率高可能与其具有较多的内生菌有一定关系。不同激素浓度及其配比影响芽体的诱导、分化增殖及根的分化率，林荣等［6］认为MS+IBA0.5mg/L+BA1.0mg/L的培养基最适于罗汉果叶组织诱导成芽。GA3是一类重要的植物生长调节剂，但在以往的罗汉果组织培养中尚无人报道。本实验在继代增殖培养基中加入了0.1mg/L的GA3，结果芽的分化增殖中，增殖系数达8～9，与杭玲等［8］的增殖率4～8、蔡时可等［9］的增殖系数4～6相比具有明显的优势，说明本实验在以往罗汉果继代培养基基础上，适量配合使用GA3能有效促进新芽的分化增殖和加快其生长，在繁殖速度这一层面上有了新的突破。在生根诱导中添加IBA1.0mg/L的生根效果最佳，生根培养20d几乎所有的无菌苗生根情况均能达到移栽要求，这与蔡时可［9］等的生根周期30d左右相比，能有效缩短培养周期，而且此配方能有效克服添加NAA后出现愈伤组织大而脱根的现象，大大提高了移栽的成活率。本试验研究了罗汉果组培苗生产的高效快繁，可为提高工厂的大规模生产提供技术体系。

作者：谭秀梅 王晓英 田启建 夏勉 刘世彪 单位：吉首大学生物资源与环境科学学院 国家作物分子设计 工程技术研究中心