两系超级稻丰两优四号指纹图谱构建及纯度快速鉴定

摘 要：为加强两系超级稻丰两优四号的品种质量控制，打击假冒伪劣，该研究利用SSR分子标记技术构建丰两优四号的指纹图谱，筛选适用于该品种的SSR特征引物，并利用纯度SSR快速鉴定技术体系鉴定丰两优四号的纯度。结果表明：在48对标准SSR引物中，有19对引物在丰两优四号亲本间具有多态性，杂交种呈现双亲互补带型，可用于该品种纯度鉴定；利用SSR快速鉴定技术鉴定丰两优四号样品纯度的结果表明，引物RM224和RM336不仅能区分母本、父本混杂，还能鉴定多种串粉和机械混杂，是对丰两优四号纯度鉴定较为适宜的特征引物。

关键词：两系超级稻；丰两优四号；SSR；指纹图谱；纯度

中图分类号 S511 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）13-0138-04

Fingerprinting Construction and Rapid Purity Identification of a Two-line Super Rice Variety，

Fengliangyou 4

Zhou Guilin et al.

（Hefei Fengle Seed Co.，Ltd，Hefei 230000，China）

Abstract：To enhance the quality control and fight against counterfeit and defective seeds of a two-line super rice variety fengliangyou 4，fingerprinting map was constructed，and specific primers were screened and used to detect the purity of the sample.The results revealed that the parents of fengliangyou4 showed polymorphism at 19 of 48 SSR markers，and the hybrid's amplification bands were complementary with that of the parents，indicating that the 19 markers were available for purity identification of the hybrid；but RM224 and RM336 were more suitable，because they can distinguish not only parents，but also abnormal seeds caused by out-crossing and mechanical mixing.

Key words：Two-line super rice；Fengliangyou 4；SSR；Fingerprinting map；Purity

品种质量包括真实性和纯度，是目前我国杂交水稻推广环节中最突出的问题之一，每年都有不少假种和低纯度的种子出售，给农民和农业生产造成了很大损失。品种的真实性检验和纯度鉴定是防止假冒伪劣种子进入市场的重要手段[1，2]。因此，建立简便、经济、快速、准确的种子真实性和纯度鉴定技术对种子生产经营部门和广大农民来说具有重要意义。

SSR标记具有共显性、多态性高、重复好和简单快捷等特点，同时符合作物品种鉴定的4个基本准则即环境的稳定性、品种间变异的可识别性、最小的品种内变异和试验结果的可靠性，且鉴定时间短、费用适中，因而SSR标记法成为当前应用最广的种子室内真实性及纯度检验方法[3-5]。此外，新修订的GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定》将“田间小区种植是鉴定品种真实性和测定品种纯度的最为可靠、准确的方法”修改为“田间小区种植是鉴定品种真实性和测定品种纯度的可靠方法之一”（即认可其它准确、可靠的品种真实性和纯度鉴定方法），并特别指出，针对品种真实性验证或身份鉴定，允许采用SSR和SNP分子标记方法；同时，新种子法第四十七条规定：“农业、林业主管部门可以采用国家规定的快速检测方法对生产经营的种子品种进行检测，检测结果可以作为行政处罚依据”，其中，快速检测方法即包括DNA检测方法。

“丰两优四号”属籼型两系杂交水稻，是合肥丰乐种业股份有限公司自主选育的两系杂交水稻新品种，该品种产量高、米质优，且具有较好的抗病性，2007年入选农业部超级稻并列为第二批超级稻示范推广品种，2009年通过国家审定，2011年被列为长江中下游中籼稻迟熟组筛选试验对照品种。本研究拟利用农业部颁布的行业标准《水稻品种鉴定技术规程SSR标记法》（NY/T 1433-2014）中推荐的48个SSR标记，构建丰两优四号的指纹图谱，并筛选适合的特征引物用于该杂交种纯度的快速鉴定，为加强种子质量控制，打击假冒伪劣种子，保护育种者、种子生产经营企业和农民的合法权益提供技术保障。

1 材料与方法

1.1 材料 供试材料为纯度合格的丰两优四号标准样品及其亲本，以及制种过程中混杂严重，但是纯度未知的丰两优四号检测样品，均由合肥S乐种业股份有限公司提供。SSR引物和DNA聚合酶购自上海生工生物工程技术服务中心，引物序列来自中华人民共和国农业行业标准《水稻品种鉴定技术规程SSR标记法》（NY/T 1433-2014）。

1.2 方法

1.2.1 发芽 按照《农作物种子检验规程》（GB/T3543.4―1995）要求，每个样品随机取220粒种子，均匀置于发芽床上，温度为30℃、光照为750lx、湿度为75%的条件下发芽3～7d。