比色法测定刺槐花中总皂苷含量

摘要：建立了比色法测定刺槐（Ｒｏｂｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ Ｌ．）花提取物总皂苷含量的方法。以人参皂苷Ｒｇ１作为对照品，通过正交设计对香草醛－高氯酸比色法的试验条件进行优化，确定最佳比色条件为：６０ ℃水浴挥干溶剂后，加入０．２ ｍＬ ７.0％香草醛－冰乙酸液和１ ｍＬ高氯酸，于６０ ℃水浴２０ ｍｉｎ，测定波长为５４５ ｎｍ。样品在０～０．２４ ｍｇ范围内呈良好的线性关系，回归方程为ｙ＝３．５４７ ０ｘ＋０．０１０ ９（Ｒ２＝０．９９８ ９），平均加样回收率为１００．０７％（ＲＳＤ＝２．１０％，ｎ＝７），测得刺槐花提取物中总皂苷平均含量为２．１７７％。该方法简便、准确、重现性与稳定性较好，可用于测定刺槐花提取物总皂苷含量。

关键词：刺槐（Ｒｏｂｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ Ｌ．）花；总皂苷；含量测定；比色法

中图分类号：Ｏ６５７．３２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）17－3846-04

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ Ｒｏｂｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ Ｌ． Ｆｌｏｗｅｒｓ ｂｙ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ

ＪＩ Ｈｏｎｇ－ｆａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ Ｌｉｎｇ－ｗｅｎ１，２，ＹＡＮＧ Ｍｉｎｇ－ｄｕｏ２，ＬＩ Ｂｉｎ１，ＹＡＮ Ｚｈｅｎ－ｍｉｎ１，ＺＨＡＮＧ Ｆａｎ１

（１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈｅｎａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００３，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ；

２．Ｐｏｓｔｄｏｃｔｏｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｈａｒｂｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｍｍｅｒｃｅ，

Ｈａｒｂｉｎ １５００７６， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｒｏｂｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ Ｌ． ｆｌｏｗｅｒｓ （ＲＰＦ） ｂｙ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ． Ｗｉｔｈ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ１ ａｓ ｓｔａｎｄａｒｄ material， ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｎｉｌｌｉｎ－ｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ． Ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ： ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ｅｖａｐｏｒａｔｅｄ ｂｙ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ ｈｅａｔｉｎｇ ａｔ ６０ ℃， ａｎｄ ｗａｓ ｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ ０．２ ｍＬ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ７.0％ ｖａｎｉｌｌｉｎ ａｎｄ １ ｍＬ ｐｅｒｃｈｌｏｒｉｃ ａｃｉｄ， ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ ｗａｓ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ａｔ ６０ ℃ ｆｏｒ ２０ ｍｉｎ． Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ５４５ ｎｍ． Ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗａｓ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０～０．２４ ｍｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｙ＝３．５４７ ０ｘ＋０．０１０ ９（Ｒ２＝０．９９８ ９）， ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ １００．０７％（ＲＳＤ＝２．１０％，ｎ＝７）． Ｔｈｅ average content of ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ ＲＰＦ ｗas ２．１７７％． Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ， ａｃｃｕｒａｔｅ， ｅｘｃｅｌｌｅｎｔｌｙ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ， ａｎｄ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ ＲＰＦ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｒｏｂｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ Ｌ． ｆｌｏｗｅｒｓ； ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ； ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔ； ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ

刺槐（Ｒｏｂｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏａｃａｃｉａ Ｌ．）又称洋槐，是主要的速生造林树种之一，在我国分布广泛，目前我国剌槐面积约有１５０万ｈｍ２，资源丰富［１］。刺槐花系豆科植物刺槐的干燥花，味涩、平、入肝经，始载于《贵州民间方药集》，具有消痈化瘀、清热解毒、疗咽治痔、健胃通肠等功效。刺槐花含有丰富的蛋白质［２］、氨基酸［３］、微量元素［４］、多酚类［５］、黄酮类［６］等化合物，具有较高的食用价值和药用价值。目前，对刺槐花化学成分及活性的研究较多［５－７］，但鲜见有总皂苷定量方法的研究报道。皂苷是生理活性广泛的一种特殊的苷类，普遍具有抗炎抑菌、抗肿瘤、降胆固醇、祛痰止咳、祛风湿、免疫调节、兴奋或抑制中枢神经系统的作用［８］，已成为食品与营养学研究的热点之一。准确测定刺槐花中总皂苷的含量对确保其疗效和药物开发具有重要的意义。

香草醛－高氯酸法能与皂苷作用形成特征紫红色，且灵敏度与精密度较高，受糖类干扰较小，所用仪器设备简单、结果可靠、重复性好，是一般实验室测定总皂苷含量最广泛采用的显色方法。反应机理是皂苷在强氧化性酸的作用下脱氢，氧化后再与香草醛起加成反应［９］。本试验以香草醛－高氯酸为显色剂，采用紫外－可见分光光度法优化了槐花总皂苷最佳的测试条件，并建立了简便准确的定量方法。

１ 材料与方法