应用免疫组化标记法进行ER和PR检测

[摘要] 目的：检测雌激素受体和孕激素受体，为临床诊断治疗乳腺癌提供理论参考。方法：采用免疫组化标记法进行检测。结果：ER背景清晰者38张，背景稍差者2张；PR背景清晰者24，背景稍差者4例。雌激素受体和孕激素受体在乳腺组织中的表达均为阳性细胞（+）16例，（++）16例，（+++）4例。结论：应用LSAB法进行ER和PR检测，是采用高度特异性的抗受体单克隆抗体显示受体的部位，结果准确可靠，可作为乳腺癌患者的常规检查项目之一推广应用。

[关键词]雌激素受体；孕激素受体；免疫组化标记

[中图分类号]R446[文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2007）04（c）-106-01

受体的测定技术很多，如细胞学、生物化学、免疫学与分子生物学等技术都可以用于检测受体。免疫组化标记法（LSAB）是近年来在免疫病理诊断中采用的对靶组织内受体进行定位标记与定量检测的一种新方法。国外早已开展雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的检测，主要用于指导内分泌治疗及估计病情预后。许多研究也证明，和其他妇科恶性肿瘤一样， ER与PR也是乳腺癌肿瘤组织中的标记物，肿瘤组织ER与PR阳性[ER（+），PR（+）]者提示分化较好，激素治疗有效，病人预后较好。为了指导我院对乳腺癌的临床治疗和预后判断，我科于2006年2-11月，开展了此项检查，共检查患者48例，效果满意。现总结如下：

1材料与方法

1.1材料与试剂

材料来源于本科外检乳腺癌组织，用10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4 cm，载玻片涂APES胶，以防脱片。微波炉为750 W东芝产品。ER/PR试剂盒及DAB显色试剂盒均购于北京中山生物工程公司。

1.2方法

将切片常规脱蜡至水，PBS液洗；3%过氧化氢，室温10 min,PBS洗；将切片浸入0.01 mol/L枸酸盐缓冲液中，微波炉加热至92～98℃，持续10 min,室温冷却10～30 min，PBS液洗；滴加2%正常羊血清，室温20 min。去除多余液体，不洗；再滴加鼠抗人雌、孕激素受体单克隆抗体，37℃ 1～2 h或4℃冰箱过夜，PBS液洗；滴加生物素化的抗鼠抗体，37℃ 30 min，PBS液洗；DAB显色，苏木素淡染色，脱水，透明，封片。

1.3判断标准

以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞45%为（+++）。背景无颜色或淡黄色。

2结果

48例患者68张病理切片中，ER背景清晰者38张，背景稍差者2张，PR背景清晰者24，背景稍差者4例。RE和PR的表达情况见表1。

3讨论

受体是靶细胞上能与激素特异性结合的分子，其主要功能为识别激素信号并与它特异性结合，然后将激素信息传递至细胞内的特定部位，从而影响细胞的代谢过程或基因表达进行调控。因此，受体是决定细胞能否对激素产生应答的关键因素。对受体进行检测对了解激素的作用机制以及疾病的发病机制具有重要意义，对疾病的辅助诊断或激素治疗的方案选择及判断预后也具有应用价值。

免疫组化标记法（LSAB）是用链菌抗生物素代替了一般抗生物的试剂，链菌抗生物素是一种从链霉菌中分离出来的不同糖基链的蛋白质，含有4个亚基，每个亚基可以与一个生物素分子结合，其结合力和亲和力很强，它仅标记过氧化物酶而本身没有与生物素连接，生物素是直接连接在第二抗体上，故分子量较小，渗透组织的能力强，反应速度快，敏感性高。此外，其等电点为6.5，接近中性，几乎不与组织中的内源性凝集素样物质发生非特异性结合，从而产生了低背景、高放大的效果。它与过去我们曾使用的ABC法、PAP法相比，具有敏感性高、特异性强、背景清晰等优点。

通过该项试验，我们认为，应用LSAB法检测ER和PR，适用于冰冻切片及石蜡切片，并可作为ER和PR的回顾性研究，不强调标本的新鲜和及时冷冻处理，不需要特殊冷冻设备。其操作简便易行，省去了抗体的配置、稀释和测试等步骤，无须移动仪器即可完成，染色时间短，阳性着色强度好，背景清晰，节省试剂，切片易保存，试剂稳定可靠，可在4℃冰箱保存1年。

总之，应用LSAB法进行ER和PR检测，是采用高度特异性的抗受体单克隆抗体显示受体的部位，结果准确可靠。可作为乳腺癌患者的常规检查项目之一在基层医院推广应用。

（收稿日期：2007-02-22）

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